糖蛋白參與到很多生命過程當中,是人體不可或缺的重要物質(zhì),糖蛋白的異常表達往往與疾病的發(fā)生和發(fā)展有關。因此,許多糖蛋白被作為疾病標志物用于臨床診斷。例如,甲胎蛋白(AFP)是一種糖蛋白,它作為原發(fā)性肝癌的生物標志物用于早期診斷。因此采用靈敏便捷的方法測定糖蛋白對揭示癌癥和糖蛋白之間的關系具有重要意義。目前糖蛋白的檢測方法主要是免疫分析法,但抗體的制備復雜耗時,穩(wěn)定性差。因此,開發(fā)一種靈敏的無抗體測定方法檢測糖蛋白具有重要意義。富勒醇具有很強的抗氧化性和清除自由基的能力,被認為是一種有前景的抗癌納米藥物。目前富勒醇主要通過注射途徑用于癌癥治療研究,注射會帶來相應的疼痛和一定的風險,絕大多數(shù)患者更愿意使用口服藥物。然而,口服給藥也存在挑戰(zhàn),特別是胃腸道中的蛋白水解酶可能與藥物作用并降低其藥效。因此,研究富勒醇與胃腸道中的蛋白水解酶之間的相互作用對評估口服給藥期間藥物的活性及其生物利用度至關重要�；赟ERS的頻移檢測技術可以實時、高靈敏監(jiān)測探針和靶標之間的動態(tài)過程,是研究富勒醇和蛋白質(zhì)之間相互作用的理想工具。具體研究成果如下:1.構(gòu)建糖蛋白檢測傳感器:由于4-MPBA具有較大的橫截面以及與碳水化合物良好的親和力,因此選擇4-MPBA做為糖蛋白檢測傳感器的探針分子,并探究了檢測過程中使用的緩沖液種類、pH值及溫度條件。當4-MPBA/AgNP基底識別靶標時,4-MPBA的拉曼峰會發(fā)生可逆變化,通過此現(xiàn)象同時捕獲和檢測糖蛋白到10-12 M。最后對所構(gòu)建傳感器的特異性進行了研究,發(fā)現(xiàn)此傳感器可以很好的區(qū)分糖蛋白與非糖蛋白。2.利用拉曼頻移檢測方法證明富勒醇與胃蛋白酶/胰蛋白酶之間的相互作用。通過引入胃蛋白酶/胰蛋白酶相應的酶抑制劑抑制其活性區(qū)域來研究富勒醇與消化蛋白酶之間作用的特異性結(jié)合位點。與胃蛋白酶的情況不同,富勒醇傾向于優(yōu)先吸附在胰蛋白酶的活性結(jié)構(gòu)域中。通過對接模擬在亞分子水平上計算出不含或含有對應抑制劑的胃蛋白酶/胰蛋白酶與富勒醇相互作用的特異結(jié)合構(gòu)型和模式,進一步證實了這些結(jié)果。根據(jù)富勒醇表面的親/疏水分布,理論模擬結(jié)果顯示,它們傾向于與帶有或不帶有抑制劑的消化蛋白酶的大量帶電/極化殘基以及少量疏水殘基結(jié)合。根據(jù)實驗和理論計算的結(jié)果,我們可以通過調(diào)節(jié)富勒醇中羥基的數(shù)量和分布模式,有目的地設計富勒醇口服藥物的親水/疏水特性,以提高其通過消化屏障的滲透性。最后,我們研究了富勒醇對Caco-2細胞/單層的細胞毒性和透過率。
【學位單位】：安徽大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

，穩(wěn)定的尺寸，超靈敏的ＳＥＲＳ響應和優(yōu)異的信號再現(xiàn)性。選擇乳子以探究單細胞的分泌代謝物，并成功檢測到細胞外空間的酸化。環(huán)境的異常酸化是癌細胞的重要特征，這個技術可以進一步應用和循環(huán)腫瘤細胞的鑒定［１７］。還有研宄動態(tài)監(jiān)測細胞色素ｃ的釋放示電刺激過程中細胞的凋亡機制，利用細胞色素ｃ特異性適體和４－計并制備了細胞色素ｃ和ｐＨ雙響應的智能ＳＥＲＳ納米探針。在電醇化的ＡｕＮＰｓ和特異性捕獲的細胞色素ｃ可以從線粒體釋放到細誘導電子轉(zhuǎn)移（ＥＴ）引起ＭＢＡ－ＡｕＮＰ的Ｃ－Ｓ振動模式變化可以的ＳＥＲＳ檢測。利用這種方法，除了細胞酸化之外，還發(fā)現(xiàn)在電刺癌細胞中釋放的細胞色素ｃ的量比在單個正常Ｌ９２９細胞中高至后實現(xiàn)了在電刺激過程中凋亡細胞中的ＭＭＰ去極化和細胞色素直接實時可視化［１８］。??

最后實現(xiàn)了在電刺激過程中凋亡細胞中的ＭＭＰ去極化和細胞色素ｃ釋放??／分布的直接實時可視化［１８］。??圖１．２在ＥＳ過程中用于細胞Ｃｙｔ?ｃ和ｐＨ檢測的ＳＥＲＳ響應性納米機器人的制備，捕??獲Ｃｙｔｃ和傳感機制示意圖［１８］??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，?Ｃｙｔ?ｃ?ｃａｐｔｕｒｅ?ａｎｄ?ｓｅｎｓｉｎｇ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ｔｈｅ??ＳＥＲＳ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ?ｎａｎｏｒｏｂｏｔ?ｆｏｒ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?Ｃｙｔ?ｃ?ａｎｄ?ｐＨ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ?ｄｕｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ＥＳ?ｐｒｏｃｅｓｓ１１８＾??４??

?ＳＫ？?Ａｇ?Ｓ塊?Ａｇ＾ＴＢ??圖１．３?（Ａ）基于夾心免疫測定法捕獲ＰＳＡ，（Ｂ）將ＰＳＡ捕獲的ＺｎＯ納米顆粒轉(zhuǎn)化為??Ｚｎ２＋，?（Ｃ）?ＳＥＲＳ平臺檢測的示意圖［２Ｑ】??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?（Ａ）?Ｃａｐｔｕｒｅ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ＰＳＡ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ｓａｎｄｗｉｃｈ?ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ；?（Ｂ）?Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ?ｏｆ??ＰＳＡ－ｃａｐｔｕｒｅｄ?ＺｎＯ?ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ?ｉｎｔｏ?Ｚｎ２＋；?ａｎｄ?（Ｃ）?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ＳＥＲＳ??ｐｌａｔｆｏｒｍ１２０＾．??５??
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本文編號：2845654