目的:依達(dá)拉奉是一種氧自由基清除劑,可抑制脂質(zhì)過氧化作用,從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。谷氨酸(Glu)是腦組織內(nèi)主要的興奮性氨基酸,病理狀態(tài)下可對神經(jīng)元產(chǎn)生毒性作用。PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤克隆化的細(xì)胞株,被廣泛用于神經(jīng)細(xì)胞生理功能的實驗研究。因此,擬探明依達(dá)拉奉對Glu所致PC12細(xì)胞損傷的影響。方法:取對數(shù)增長期體外培養(yǎng)的PC12細(xì)胞分為6組,對照組只加入DMEM完全培養(yǎng)基,實驗組Glu終濃度分別為2.5、5、10、20、40mmol/L,37℃,5%CO?條件下培養(yǎng)24h后MTT法檢測PC12細(xì)胞存活率。選取細(xì)胞存活率降低為對照組50%~60%的Glu濃度為后續(xù)造模條件。將細(xì)胞接種24h后,造模同時分別加入20、40、60、80、100、120μmmol/L濃度的依達(dá)拉奉,對照組加入DMEM完全培養(yǎng)基,共設(shè)7個濃度組,選取40μmol/L,80μmol/L(峰效濃度)作為低、高濃度組為后續(xù)造模。取對數(shù)期細(xì)胞分為4組,Glu組細(xì)胞加入10mmol/LGlu,依達(dá)拉奉濃度組細(xì)胞中加入10mmol/LGlu后再分別加入40μmmol/L,80μmmol/L依達(dá)拉奉,對照組細(xì)胞加入等量DMEM,各組細(xì)胞加入藥物后繼續(xù)培養(yǎng)24h,以MTT法檢測細(xì)胞存活率,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位(MMP),活性氧簇(ROS),酶標(biāo)儀比色法檢測超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)。結(jié)果:1.MTT實驗結(jié)果:Glu作用24h后,Control組細(xì)胞生長良好;與Control相比,升高Glu濃度,PC12細(xì)胞存活率依次降低。10 mmol/L Glu時,細(xì)胞存活率為對照組的52.40±4.67%。加入依達(dá)拉奉后,提高了PC12細(xì)胞的存活率,但仍低于對照組。80μmol/L依達(dá)拉奉時效果達(dá)峰值66.73±4.29%,繼續(xù)增加依達(dá)拉奉濃度,細(xì)胞存活率反而相對下降。2.細(xì)胞凋亡的變化Glu作用24h后,與Control相比,其它三組PC12細(xì)胞的凋亡率顯著增高,Glu+EDA1組和Glu+EDA2組細(xì)胞凋亡率較Glu組明顯下降,Glu+EDA2組下降更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P﹤0.05)。3.依達(dá)拉奉對PC12細(xì)胞內(nèi)活性氧簇ROS的影響與Control組相比,加入Glu可明顯升高PC12細(xì)胞內(nèi)的ROS水平,在共聚焦顯微鏡下觀察熒光強(qiáng)度最亮,細(xì)胞數(shù)目最多,Glu+EDA1組和Glu+EDA2組細(xì)胞ROS水平較Glu組下降,Glu+EDA2組較Glu+EDA1組下降更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P﹤0.05)。4.依達(dá)拉奉對PC12細(xì)胞線粒體膜電位的影響與Control組相比,各藥物組PC12細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位顯著下降,Glu+EDA1組和Glu+EDA2組細(xì)胞線粒體膜電位較Glu組明顯上升,分別為0.73±0.06、0.93±0.07,Glu+EDA2組較Glu+EDA1組上升更為顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P﹤0.05)。5.依達(dá)拉奉對PC12細(xì)胞SOD酶活性和MDA含量的影響與Control組相比,各藥物組細(xì)胞內(nèi)SOD酶活性顯著降低,Glu+EDA1組與Glu組比較差異并不明顯,無統(tǒng)計學(xué)意義;Glu+EDA2組較Glu下降明顯。與對照組相比,各組MDA含量顯著增加,Glu+EDA2組較Glu+EDA1組下降明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1.依達(dá)拉奉對Glu誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與依達(dá)拉奉拮抗Glu誘發(fā)的氧化應(yīng)激有關(guān)。2.ROS介導(dǎo)的線粒體膜電位下降參與Glu誘發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

C12 細(xì)胞細(xì)胞存活率 n=6.＊＊P＜0.05 vs 對照組（GFig.1PC12 Cell Viability in 6 Groupsn = 6.＊＊P＜0.05 vs control group（Glu=0）

PC12 細(xì)胞細(xì)胞存活率 n=6.＊＊P＜0.05 vs 對照組（GluFig.1PC12 Cell Viability in 6 Groupsn = 6.＊＊P＜0.05 vs control group（Glu=0）

16A：Control 組 B：Glu 組 C:Glu+EDA1 組 D:Glu+EDA2 組圖 3 流式細(xì)胞儀檢測 4 組 PC12 細(xì)胞細(xì)胞凋亡Fig.3 The rate of apoptosis in four groups of PC12 cells was detected byflow cytometry
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2844809