本課題首先研究索拉菲尼(SO)與蘿卜硫素(SF)單獨及聯(lián)合用藥對肝腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞的治療效果,然后制備載SO和SF的脂質(zhì)雙分子層的介孔二氧化硅納米粒(LMSN),進(jìn)一步探討載SO和SF的LMSN單獨及聯(lián)合用藥對肝腫瘤細(xì)胞HepG2的治療效果。我們首先借助于高效液相色譜技術(shù)建立了SO和SF含量測定的方法。實驗結(jié)果顯示,SO濃度在12.5-400 μg-mL-1范圍內(nèi)與樣品峰面積A呈良好相關(guān)性(r=0.9999),直線回歸方程：A=10061C-203.8。實驗結(jié)果顯示,SF濃度在3.125～200μg-mL-1范圍內(nèi)與樣品峰面積A呈良好相關(guān)性(r=0.9999),直線回歸方程：A=31321C+44464。結(jié)果顯示,SO與SF方法的線性、精密度、回收率、專屬性均符合要求,可以用于藥物的含量檢測。在溫和堿性條件下,以CTAB陽離子表面活性劑作為模板劑,TEOS作為無機(jī)硅源,在80℃介孔合成溫度條件下,制備二維結(jié)構(gòu)相的MCM-41型MSN。使用硅烷偶聯(lián)劑AEPTMS對MSN進(jìn)行表面氨基化修飾,制備得到的Ap-MSN分散性顯著得到改善,孔徑增大至9.97nm,孔容積為0.724cm3/g,并增加了對SF的載藥量。采用乙醇注入法,以DOPC, DOPE, DSPE-PEG2000,膽固醇為油相,制備了粒徑均一、在透射電鏡(TEM)下清晰可見核殼結(jié)構(gòu)的的脂質(zhì)體(Liposome),然后將Liposome與載藥MSN共孵育,成功制備了具有脂質(zhì)雙分子層的載藥納米粒(]LMSN)。掃描電鏡(SEM)下觀察MSN形貌,大小圓整,粒徑在90～100nm之間。MSN的TEM圖譜表示介孔結(jié)構(gòu)有序、均一是典型的二維結(jié)構(gòu)相MCM-41型介孔分子篩結(jié)構(gòu)。采用CCK-8法檢測藥物對細(xì)胞活性,結(jié)果表明SO和SF對HepG2細(xì)胞生長的抑制效應(yīng)呈濃度依賴性。通過比較SO與SF在7種不同摩爾比例,每個比例篩選6種不同濃度,利用協(xié)同指數(shù)CI值(CI1.1,拮抗；0.9CI1.1,相加；CI0.9,協(xié)同),篩選出對肝癌細(xì)胞HepG2的協(xié)同、拮抗及相加比例分別為5：1、1：1、10：1。通過平板克隆形成實驗對不同比例細(xì)胞克隆形成情況進(jìn)行考察,結(jié)果表明SO與SF在協(xié)同比例5：1,SO與SF濃度分別是4.0.8 μmol/L時其克隆形成數(shù)(14.7±3.08)明顯低于拮抗比例1：1,SO與SF濃度分別是4、4 μmol/L時的克隆形成數(shù)(31.33±5.16),P0.01；細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果顯示,SO與SF主要抑制HepG2細(xì)胞早期凋亡,在SO與SF在協(xié)同比例5：1時,SO與SF濃度分別是8、1.6μmol/L時其早期凋亡率(18.9±3.87)%明顯高于拮抗比例1：1,兩藥濃度分別是8、8μmol/L時的早期凋亡率(4.76±0.06)%。選用人肝腫瘤細(xì)胞株HepG2,用無血清培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)得到HepG2-TS。以CD133作為肝腫瘤干細(xì)胞特異性表面標(biāo)記物,經(jīng)流式細(xì)胞儀證實肝腫瘤微球體高表達(dá)CD133。采用CCK-8法檢測SO與SF對HepG2-TS的細(xì)胞殺傷效果,結(jié)果表明：在相同濃度下,SO與SF對HepG2-TS比對HepG2細(xì)胞系的IC50低,實驗結(jié)果表明,相比HepG2細(xì)胞系而言,HepG2-TS對SO與SF更為敏感；微球體成球率實驗表明：經(jīng)SO與SF處理后,微球體成球率均比空白組下降,而紫杉醇對照組的微球體成球率高于空白組,上述實驗結(jié)果表明：SO與SF對肝腫瘤干細(xì)胞殺傷作用更強。我們進(jìn)一步計算不同比例不同濃度下SO與SF對HepG2-TS的協(xié)同指數(shù)CI值,結(jié)果表明：SO與SF比例為20：1時表現(xiàn)為協(xié)同作用(CI0.9),5：1時表現(xiàn)為相加作用(0.9CI1.1)。在載藥納米粒體外細(xì)胞毒性實驗中,空白材料MSN與LMSN在實驗濃度范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞均無細(xì)胞毒性。SF/LMSN比SF的細(xì)胞殺傷作用更強,SO/LMSN和SO的細(xì)胞殺傷作用相比沒有顯著性差異。在SO/LMSN:SF/LMSN摩爾比為5：1時比單獨使用SO/LMSN或SF/LMSN具有更強的殺傷效果。本課題采用模板法成功制備MSN,其粒徑均一、表面形貌圓整、具有清晰有序的二維孔道結(jié)構(gòu)。采用]HPLC法分析MSN的載藥量及包封率,結(jié)果表明以MSN為納米載藥系統(tǒng)可顯著提高對疏水藥物SO的包封率和載藥量；氨基化改性后可提高SF藥物的載藥量及包封率。課題首次比較SO與SF在不同摩爾比時對HepG2細(xì)胞系及HepG2-TS的殺傷效果,實驗結(jié)果表明當(dāng)SO與SF摩爾比為5：1時對HepG2細(xì)胞系具有協(xié)同治療效果,對HepG2-TS具有相加治療效果,目前還未見相關(guān)報道。SO/LMSN與SF/LMSN在5：1比例下對HepG2細(xì)胞的殺傷比單獨SO/LMSN與SF/LMSN更強。該研究證實SO與SF均能有效殺傷肝腫瘤干細(xì)胞,載SO和SF的LMSN亦能有效殺傷肝腫瘤細(xì)胞,該研究可能為肝腫瘤治療提供一種有效的治療方法。
【學(xué)位單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R943;R96
【部分圖文】：

無機(jī)二氧化硅與有機(jī)陽離子表面活性劑通過靜電作用（庫企力）可自組裝成有序??結(jié)構(gòu)，脫除表面活性劑后，就可以得到ＭＣＭ－４１具有六方對稱性的二維結(jié)構(gòu)相??介孔二氧化娃材料，其合成過程如圖２－１所示。??＾?、?？?＿?Ａ?，?＿?％??ＴＥＯＳ?＼??Ｍ?？Ｗｖｍｍｍｔｔ?＊?＊Ｗ?．：飛?ｅｉｏｈ?＂?％?‘??＾?＞６?＾?＾?ｗｉ?＾?＾??ＭＳＮ－ＣＴＡＢ?［?ＭＳＮ?｜?｜?Ａｐ－ＭＳＮ?｜??圖２－１?ＭＳＮ合成流程圖??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ?ｏｆ?ＭＳＮ??１９??

基礎(chǔ)上進(jìn)一步引入氨基進(jìn)行修飾［３４－３６］，此方法是一種引入氨基的有效方法，引入??氧基官能團(tuán)量較高。??圖２－２后嫁接法??Ｆｉｇ．２－２?Ｐｏｓｔ－Ｇｒａｆｔｉｎｇ?Ｍｅｔｈｏｄ??脂質(zhì)體是由一個或多個被水或緩沖溶液層隔幵的脂質(zhì)雙層閉合囊泡。本課題??采用乙醇注入法制備，在制備過程中調(diào)整乙醇、憐脂、水三種組分的比例，并加??入ＤＯＰＥ使其具有ＰＨ敏感性。將制備好的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)與介孔二氧化桂材料共鮮??育，得到具有脂質(zhì)包裹的介孔二氧化桂納米粒（ＬＭＳＮ）。合成過程如圖２－３所示。??．．．．．訾?１?ｍ??ＬＭＳＮ??Ｌｉｐｏｓｏｍｅ?染??－Ｉ?ｆ?？?ｉ??ＯｎｉＱＳ?Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ＤＯＰＥ?ＯＯＰＣ?１８：０?ＰＥＧ－２０００ＰＥ??圖２－３?ＬＭＳＮ合成流程圖??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ?ｏｆ?ＬＭＳＮ??２０??

采用乙醇注入法制備，在制備過程中調(diào)整乙醇、憐脂、水三種組分的比例，并加??入ＤＯＰＥ使其具有ＰＨ敏感性。將制備好的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)與介孔二氧化桂材料共鮮??育，得到具有脂質(zhì)包裹的介孔二氧化桂納米粒（ＬＭＳＮ）。合成過程如圖２－３所示。??．．．．．訾?１?ｍ??ＬＭＳＮ??Ｌｉｐｏｓｏｍｅ?染??－Ｉ?ｆ?？?ｉ??ＯｎｉＱＳ?Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ?ＤＯＰＥ?ＯＯＰＣ?１８：０?ＰＥＧ－２０００ＰＥ??圖２－３?ＬＭＳＮ合成流程圖??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ?ｏｆ?ＬＭＳＮ??２０??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王亞寧;袁暾;賈莉芳;鄒文;梁潔;;醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠生物相容性的比較分析[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2012年04期

本文編號：2840642