肝纖維化是機體對各種病因引起的慢性肝損傷后的一種損傷修復反應,具體表現(xiàn)為細胞外基質(zhì)(ECM)成份、特別是膠原等過度生成和沉積。多種細胞和信號分子通過各種方式作用于肝纖維化形成的不同環(huán)節(jié),最終導致ECM合成和降解的不平衡而產(chǎn)生肝纖維化。活化態(tài)的肝星狀細胞分泌合成大量的ECM,是產(chǎn)生肝纖維化的重要原因,因此抑制活化態(tài)肝星狀細胞的增殖、促進其凋亡和逆轉(zhuǎn)其活化表型已成為抗肝纖維化治療中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和重要途徑。目前,許多包括抗纖維化藥物在內(nèi)的藥物難溶于水、生物利用度小,且毒性大;若制成鹽則活性降低,在進入體內(nèi)易被體循環(huán)系統(tǒng)清除,限制了它們在臨床的開發(fā)利用。納米載藥系統(tǒng)因其可提高藥物利用度和可控釋放速率等特點,已成為藥劑學及納米藥物等領(lǐng)域研究的熱點。中空介孔二氧化硅納米(HMSN)顆粒作為一種新型的藥物運輸系統(tǒng),其粒徑可控,擁有巨大的比表面積和孔容、藥物的裝載率高以及對藥物的緩釋作用等優(yōu)點,而且其內(nèi)外表面易于被修飾、生物相容性好,廣受關(guān)注。本論文嘗試構(gòu)建了視黃醇偶聯(lián)并荷載喜樹堿的HMSN藥物運輸系統(tǒng),并通過體外實驗考察了對活化態(tài)HSC的特異靶向性;進而用于荷載抗纖維化藥物喜樹堿、考察藥物體系對活化態(tài)HSCs的糖酵解的抑制和對MF表型的逆轉(zhuǎn)。首先,我們合成了四種納米載體:分別為氨基修飾的二氧化硅、偶聯(lián)VA的二氧化硅、涂層殼聚糖的二氧化硅和偶聯(lián)物涂層的二氧化硅(以后本論文中用字母SiO_2-NH_2、SiO_2-CONH-VA、SiO_2-CS和SiO_2-CS-VA分別代替前面的四種載體),隨后利用FTIR、DLS、Zeta、BET、TG、SEM、WB等手段對材料的理化性質(zhì)進行考察,并證實了這些HMSN顆粒的制備成功和VA靶向配體修飾的成功。同時通過四種納米載體的細胞毒性和血液相容性分析確定,它們均具有具有良好的生物相容性。其次,利用熒光顯微鏡和流式細胞儀,考察了活化態(tài)肝星狀細胞株HSC-T6細胞和Hela細胞對負載尼羅紅熒光染料的四種HMSN顆粒的攝取。結(jié)果表明HSC-T6細胞而非Hela細胞,選擇性地優(yōu)先攝取VA修飾的兩種體系,VA的修飾可以有效介導納米載體對活化態(tài)肝星狀細胞的主動靶向性。最后,制備了四種負載CPT的HMSN顆粒并對其理化性質(zhì)進行了評價。體外藥物釋放分析表明殼聚糖涂敷顯著提高了的荷藥HMSN的pH響應性緩釋功能。細胞毒性評價及基因和蛋白表達分析顯示,四種荷藥納米顆粒抑制并逆轉(zhuǎn)HSCs活化表型,而視黃修飾和殼聚糖涂層均能顯著提高載藥顆粒的這些抗纖維化活性。這些結(jié)果表明本文所制備的VA偶聯(lián)并荷載喜樹堿的HMSN球,不僅擁有對HSCs良好的主動靶向性還具備很好的pH響應控釋功能,可作為一種新型潛在的抗肝纖維化藥物系統(tǒng),在未來肝纖維化治療中有良好的應用前景。
【學位單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R943;R96
【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 肝纖維化的概述
    1.3 活化態(tài)肝星狀細胞
    1.4 肝纖維化的治療
    1.5 藥物傳遞納米載體
    1.6 DDS用于治療活化HSCs的研究進展
    1.7 本課題的提出及研究方案的確定
第2章 VA修飾的HMSN載體的合成及表征
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 VA修飾的中空介孔二氧化硅的合成
        2.2.1 模板球碳酸鈣的合成
        2.2.2 碳酸鈣@氨基修飾的二氧化硅納米復合物的制備
        2.2.3 具有VA偶聯(lián)的HMSN的制備
    2.3 合成物的材料學表征
        2.3.1 材料的粒徑（Size）及電位檢測（Zeta）
        2.3.2 材料的紅外表征（FTIR）
        2.3.3 材料的熱重分析（TG）
        2.3.4 材料的比表面積及孔隙分析（BET）
        2.3.5 材料的XRD物相分析
        2.3.6 材料的SEM分析
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 材料的表征分析
        2.4.2 材料形貌分析
    2.5 本章小結(jié)
第3章 pH響應性的VA修飾的HMSN的制備與表征
    3.1 實驗試劑和儀器
        3.1.1 實驗試劑
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 pH響應性的VA介導的中空介孔硅合成
        3.2.1 模板球碳酸鈣的合成
        3.2.2 HMSN顆粒制備
        3.2.3 偶聯(lián)VA的CS合成
2-CS-VA載體的制備'>        3.2.4 SiO₂-CS-VA載體的制備
    3.3 合成物的材料學的表征
        3.3.1 材料的粒徑（Size）及電位檢測（Zeta）
        3.3.2 材料的紅外表證（FTIR）
        3.3.3 材料的熱重分析（TG）
        3.3.4 材料的比表面積及孔隙分析（BET）
        3.3.5 材料的SEM分析
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 材料的表征分析
        3.4.2 材料形貌分析
    3.5 本章小結(jié)
第4章 中空介孔硅球的生物學評價
    4.1 試驗試劑與儀器
        4.1.1 實驗試劑
        4.1.2 實驗儀器
    4.2 空白載體的生物相容性評價
        4.2.1 空白載體的細胞毒性實驗
        4.2.2 空白載體的溶血率實驗
    4.3 負載尼羅紅納米顆粒的制備
2-NH₂和SiO₂-CONH-VA顆粒的制備'>        4.3.1 負載尼羅紅的SiO₂-NH₂和SiO₂-CONH-VA顆粒的制備
2-CS-VA和SiO₂-CS顆粒的制備'>        4.3.2 負載尼羅紅的SiO₂-CS-VA和SiO₂-CS顆粒的制備
        4.3.3 負載尼羅紅納米顆粒的載藥量及包封率
        4.3.4 負載尼羅紅納米顆粒的藥物釋放行為
    4.4 VA修飾的HMSN的靶向性分析
        4.4.1 VA修飾的HMSN結(jié)合RBP4的蛋白分析
        4.4.2 HSC-T6和Hela細胞吞噬負載尼羅紅的納米載體的熒光觀察分析
        4.4.3 HSC-T6和Hela細胞吞噬負載尼羅紅的HMSN的細胞流式分析
    4.5 結(jié)果與討論
        4.5.1 空白納米納米載體的生物相容性考查
        4.5.2 負載尼羅紅納米載體的表征
        4.5.3 HMSN載體的體外靶向性研究
    4.6 本章小結(jié)
第5章 負載CPT的HMSN對活化態(tài)HSCs細胞的作用
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗試劑
        5.1.2 實驗儀器
    5.2 負載CPT的HMSN納米體系制備及表征
        5.2.1 負載CPT的HMSN體系的制備
        5.2.2 四種負載CPT的HMSN體系的載藥量及包封率
        5.2.3 四種負載CPT的HMSN體系的藥物釋放行為
    5.3 CPT及負載CPT的HMSN體系對HSC-T6細胞的毒性實驗
    5.4 CPT及負載CPT的HMSN體系HSC-T6細胞基因的表達影響
    5.5 CPT及負載CPT的HMSN體系對HSC-T6細胞蛋白表達的影響
    5.6 統(tǒng)計學分析
    5.7 結(jié)果與討論
        5.7.1 負載CPT的HMSN體系的表征
        5.7.2 CPT及負載CPT的HMSN體系HSC-T6細胞的毒性分析
        5.7.3 CPT及負載CPT的載體對HSC-T6細胞基因和蛋白水平影響
    5.8 本章小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻
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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 解淑蕊;張曉嵐;;肝星狀細胞的起源、分布與表型轉(zhuǎn)變[J];細胞生物學雜志;2009年01期

2 何雅軍;舒建昌;呂霞;方力;沈雁;;姜黃素預防肝纖維化作用與肝星狀細胞的關(guān)系[J];中華肝臟病雜志;2006年05期

本文編號：2840469