發(fā)布時(shí)間：2020-10-13 09:45

　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?以奈達(dá)鉑(NDP)為模型藥物,羧基修飾的磁性介孔二氧化硅(MMSNs-COOH)為載體,構(gòu)建NDP-MMSNs-COOH,對(duì)其制備和表征及熱療聯(lián)合體外抗肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞的作用及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行初步研究。實(shí)驗(yàn)方法:本文首先以化學(xué)沉淀法制備了四氧化三鐵(Fe_3O_4)納米粒子,并以得到的Fe_3O_4納米粒子為核,通過溶膠-凝膠法包覆二氧化硅,并通過離子交換的方法,用硝酸銨-乙醇混合溶液移除表面活性劑,得到介孔結(jié)構(gòu)的Fe_3O_4/mSiO_2納米粒子(以MMSNs表示),對(duì)其進(jìn)行氨基化和羧基化改性,得到MMSNs-NH_2和MMSNs-COOH。以紅外、透射電鏡、介孔全分析和磁性測(cè)試等方法對(duì)載體結(jié)構(gòu)及形態(tài)進(jìn)行表征,并考察了808激光對(duì)磁性載體材料的升溫作用。以NDP為模型藥物,通過單因素實(shí)驗(yàn),考察溶劑的種類、不同載藥方式、反應(yīng)時(shí)間及不同功能基團(tuán)等因素對(duì)其載藥量和包封率的影響,確定最優(yōu)載藥處方及工藝;采用高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行NDP藥物含量的測(cè)定,考察NDP原料藥和NDP-MMANs-COOH在37℃和43℃情況下的釋藥情況。在體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)中,以SK-MES-1肺鱗癌細(xì)胞為模型腫瘤細(xì)胞,采用MTT法檢測(cè)原料藥、制劑及載體對(duì)細(xì)胞的毒性,NDP-MMSNs-COOH及NDP原料藥與磁熱療(808激光照射)聯(lián)合的體外細(xì)胞抑制情況;將載體用FITC進(jìn)行標(biāo)記,分別使用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞的攝取情況進(jìn)行檢測(cè);NDP-MMSNs-COOH及NDP原料藥與熱療聯(lián)合作用,考察其對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響及肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)載體進(jìn)行表征:透射電子顯微鏡圖顯示,磁核是粒徑5~15 nm的粒子,MMSNs和MMSNs-COOH是包覆磁核的有介孔結(jié)構(gòu)的粒子,粒子粒徑為60~100 nm,介孔直徑約為5 nm;磁性測(cè)試顯示Fe_3O_4和MMSNs納米粒的飽和磁化值為58 emu/g和18 emu/g。N_2吸附-脫附曲線表明曲線的形狀符合IV型吸附-脫附等溫線,MMSNs的比表面積為753.30 m~2/g,孔體積為1.03 cm~3/g;對(duì)MMSNs、MMSN-NH_2和MMSNs-COOH連續(xù)激光照射3min,載體溫度分別增加9.9℃、9.9℃和12.4℃。對(duì)載體載藥條件優(yōu)化,最終選擇以無水乙醇作為溶劑,以羧基化修飾的介孔二氧化硅MMSNs-COOH為載體,采用探超15 min的方式將NDP載入MMSNs-COOH內(nèi)部的方法。選擇三種不同功能基團(tuán)的載體對(duì)NDP進(jìn)行載藥研究,結(jié)果表示,以羧基基團(tuán)載藥時(shí),包封率為93.45%,載藥量62.3%,達(dá)到較高的包封率和載藥量。制劑37℃和43℃體外釋藥結(jié)果表明其具有一定的緩釋作用;釋藥時(shí)間達(dá)到12 h時(shí),累計(jì)釋放率為82.34%和88.95%,均能達(dá)到80%以上,溫度升高對(duì)藥物釋放具有促進(jìn)作用。體外抗腫瘤活性研究中,當(dāng)NDP原料藥與HT聯(lián)用時(shí),SK-MES-1細(xì)胞對(duì)奈達(dá)鉑更為敏感,奈達(dá)鉑與熱療聯(lián)合作用24 h后,IC50值從116.62μg/mL降低至79.84μg/mL。NDP-MMSNs-COOH與熱療聯(lián)合后,IC50值從94.46μg/mL降低至70.86μg/mL。MMSNs-COOH增加了細(xì)胞攝取效果;周期和凋亡實(shí)驗(yàn)顯示NDP-MMSNs-COOH與熱療聯(lián)合能誘導(dǎo)細(xì)胞S期阻滯,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。與熱療結(jié)合后,NDP原料藥和制劑的凋亡率分別從1.5%和4.1%增加到5.2%和12.2%。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:經(jīng)過羧基修飾的磁性介孔二氧化硅載藥,具有較高的包封率和載藥量;熱療聯(lián)合NDP-MMSNs-COOH能增加對(duì)肺鱗癌細(xì)胞SK-MES-1的抑制作用、凋亡和攝取。本研究為NDP磁性介孔二氧化硅類制劑用于肺鱗癌的研究提供了一定的數(shù)據(jù)參考。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R943
【部分圖文】：

奈達(dá)鉑分子結(jié)構(gòu)

奈達(dá)鉑與DNA作用機(jī)制圖

MCM-41的形成機(jī)制圖
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2839019