發(fā)布時(shí)間：2020-10-10 01:25

　　 研究目的:(1)評(píng)價(jià)新型氨基酸卟啉光敏劑4I對(duì)臨床分離的11種敏感菌株和多重耐藥菌株的抗菌活性,并比較4I介導(dǎo)的a PDT對(duì)臨床分離的同一菌種的多重耐藥菌和敏感菌之間的差異;(2)檢測(cè)4I對(duì)Hacat(永生化表皮細(xì)胞)及RAW264.7(單核-巨噬細(xì)胞)的細(xì)胞毒性,為進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。研究方法:(1)抗菌活性實(shí)驗(yàn)依據(jù)臨床藥敏結(jié)果選取所需菌株,挑取新鮮菌落制備菌懸液,設(shè)置a PDT組(4I+菌液+光照)、避光組(4I+菌液+未光照)、陰性對(duì)照組(菌液+純水+光照)、空白對(duì)照組(培養(yǎng)基+純水+光照)共4組,設(shè)8個(gè)濃度梯度,最高濃度為62.5μM,最低濃度為0.49μM。二倍稀釋法將不同濃度光敏劑與菌懸液避光孵育30min后,除避光組外,其余立即行紅色激光照射30min(650nm,6J/cm2),采用涂板計(jì)數(shù)法評(píng)定出4I對(duì)不同菌株的MIC和MBC值,計(jì)算ED50和ED90濃度;并比較4I對(duì)臨床分離的同一菌種的多重耐藥菌和敏感菌之間的差異;(2)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)收集Hacat、RAW264.7,96孔板內(nèi)接種,實(shí)驗(yàn)分為aPDT組(4I+培養(yǎng)基+細(xì)胞+光照),避光組(4I+培養(yǎng)基+細(xì)胞+未光照)共2組,每組分別設(shè)置對(duì)照組(培養(yǎng)基+細(xì)胞+光照/未光照)、空白組(培養(yǎng)基+CCK8)以及7個(gè)不同濃度梯度的藥物組,最高濃度為62.5μM,最低濃度為0.98μM,貼壁培養(yǎng)24h后,棄掉上清液,加入二倍稀釋法稀釋好的藥液或新培養(yǎng)基,避光孵育30min,孵育后,a PDT組立即照射30min(參數(shù)同抗菌活性實(shí)驗(yàn)),避光組同等條件下不接受光照避光靜置30min,更換含有CCK-8的培養(yǎng)基100ul/孔(10ul CCK-8:100ul培養(yǎng)基),酶標(biāo)儀450nm處測(cè)量吸光度,記錄結(jié)果。結(jié)果:(1)抗菌活性實(shí)驗(yàn)新型氨基酸卟啉光敏劑4I對(duì)臨床篩選出的11種菌種,除奇異變形桿菌、摩根摩根菌外,其余菌株全部有效,抑菌效果與藥物濃度成正比,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的殺菌效果優(yōu)于革蘭氏陰性菌(P0.01),對(duì)于同一菌種的敏感菌和多重耐藥菌抑菌效果未見(jiàn)明顯差異(P0.05),抑制50%菌種的全部菌株生長(zhǎng)的有效抑菌濃度值(ED50)和抑制90%菌種的全部菌株生長(zhǎng)的有效抑菌濃度值(ED90)的相應(yīng)藥物濃度分別為0.822μM(95%CI 0.590-1.065μM)和1.947μM(95%CI 1.434-3.612μM);單純4I避光組,對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)抑制作用;單純紅色弱激光650nm,能量密度6J/cm2作用下,對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。(2)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)單純給予紅色激光照射,對(duì)Hacat有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)作用(P0.001);對(duì)RAW264.7生長(zhǎng)沒(méi)有影響(P0.999)。單純給予光敏劑藥物孵育30min,對(duì)Hacat有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用(P0.05),不同濃度組別之間的促生長(zhǎng)作用無(wú)明顯差異(P0.05);較高濃度組62.5μM至15.6μM對(duì)RAW264.7有輕度抑制作用(P0.001),其余濃度組對(duì)生長(zhǎng)無(wú)影響(P0.05)。a PDT后,兩種細(xì)胞的存活率都明顯降低,不同濃度組殺傷作用之間未見(jiàn)明顯差異(P0.05),4I介導(dǎo)的a PDT后Hacat和RAW264.7的細(xì)胞毒性IC50濃度值為分別為1.846μM(95%CI0±6.416μM)和7.447μM(95%CI 1.110±20.087μM)。結(jié)論:(1)新型氨基酸卟啉類光敏劑4I具有高效、廣譜的抗菌活性,無(wú)細(xì)胞毒性,低毒副作用,是一種前景極佳的抗菌光敏劑。(2)4I具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,因此4I結(jié)合紅色弱激光的光動(dòng)力抗菌療法具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

法科學(xué)院生物工程研究所研制，針對(duì)前期實(shí)驗(yàn)以改進(jìn)，以取代的四苯基卟啉為基礎(chǔ)，引入性氨基酸卟啉光敏劑：5，10，15，20-四{4-}卟啉，編碼縮寫(xiě)為 4I（結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖 1），通過(guò)前期的光熱穩(wěn)定性、親水性，高細(xì)菌吞噬量，高。通過(guò)擴(kuò)大細(xì)菌種類，評(píng)價(jià)光敏劑 4I 對(duì)臨床直菌活性，并比較 4I 對(duì)同一菌種的敏感菌株和異，同時(shí)檢測(cè) 4I 光敏劑對(duì)人永生化表皮細(xì)胞264.7）的細(xì)胞毒性，為進(jìn)一步體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供

圖 2.4I 抗菌活性實(shí)驗(yàn) 96 孔板排板圖 2 注：A.aPDT 組（4I+菌液+光照）B.避光組(4I+菌液+未光照)C.陰性對(duì)照組（菌液+純水+光照/未光照）D.空白對(duì)照組（培養(yǎng)基+純水+光照）1.1.7 實(shí)驗(yàn)步驟①除 62.5μM 濃度組外，每孔加入純水 100μl。②向 62.5μM 濃度組加入 125μM 藥液 200μl/孔，取 100μl/孔加入到下一個(gè)

圖 3. aPDT 組表皮葡萄球菌 a.4I 光敏劑 15.6～3.9μM 濃度組 b. 4I 光敏劑 1.95～0.975μM 濃度組 c. 4I 光敏劑 0.49μM 濃度組 d.未加 4I 光敏劑的陰性對(duì)照組1.2.2 光敏劑 4I 對(duì)同一菌種的敏感菌和耐藥菌藥敏結(jié)果比較（表 3）表 3.同一菌種的敏感菌和耐藥菌藥敏結(jié)果比較菌 最小抑菌濃度 最小殺菌濃度株 RSRRMann-Whitney U 值 Z P（雙側(cè)）RSRRMann-Whitney U 值 Z P（雙側(cè)）革蘭氏陽(yáng)性菌 G+

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳錦燦;陳卓;林華建;黃明東;;酞菁光敏劑抗菌效果的實(shí)驗(yàn)研究[J];福建醫(yī)藥雜志;2016年05期

2 陳康;馮勇;鄭硯文;熊力;文宇;苗雄鷹;;新型光敏劑在肝癌中的應(yīng)用[J];激光生物學(xué)報(bào);2017年02期

3 周傳農(nóng);;影響生物體內(nèi)光敏劑運(yùn)輸和結(jié)合的立體化學(xué)因素[J];中國(guó)激光醫(yī)學(xué)雜志;1993年04期

4 韓銳;;診治癌癥的光敏劑—光卟啉的研究[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1987年07期

5 梁宏;王蘭嵐;陸仲康;宋桂英;徐正平;金秀蓮;;利用激光微束照射體外培養(yǎng)HeLa細(xì)胞篩選葉綠素衍生物光敏劑[J];光電子.激光;1988年02期

6 王澤時(shí),楊永華,郭勇,吳思恩,齊法琳,趙獻(xiàn)光,陳增謙,鄭茂峰,孫向東,梁永茂;葉綠素光敏劑診治惡性腫瘤[J];浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年04期

7 周如真;馬劍文;殷祥生;;新光敏劑PSD-007注射液含量測(cè)定方法的研究[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1989年08期

8 井戶健一 ,賈剛田;光敏劑的研究與開(kāi)發(fā)動(dòng)向[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)學(xué)分冊(cè));1989年02期

9 王捷;何勇;聶俊;;陽(yáng)離子光敏劑的研究進(jìn)展[J];信息記錄材料;2012年06期

10 王澤時(shí);;葉綠素光敏劑診治惡性腫瘤(附102例報(bào)告)[J];浙江腫瘤通訊;1990年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 許曾平;孟帥;趙占娟;劉天軍;;新型氨基酸卟啉類光敏劑的抗菌活性研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第三十四屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2014年

2 劉仲榮;楊慧蘭;;光敏劑的研究進(jìn)展[A];美麗人生 和諧世界——中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)醫(yī)學(xué)美學(xué)與美容學(xué)術(shù)年會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)美學(xué)與美容學(xué)分會(huì)20周年慶典暨第三屆兩岸四地美容醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)論壇論文匯編[C];2010年

3 靳洪濤;劉漢清;魏金峰;王愛(ài)平;;光敏劑研發(fā)進(jìn)展與評(píng)價(jià)實(shí)踐[A];2015年（第五屆）藥物毒理學(xué)年會(huì)論文集[C];2015年

4 李永;張妙芬;鄭碧遠(yuǎn);黃劍東;;白蛋白-量子點(diǎn)-酞菁光敏劑三元復(fù)合物的構(gòu)建和生物活性[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

5 黃劍東;陳耐生;黃金陵;;醫(yī)用光敏劑的研究進(jìn)展[A];2000'全國(guó)光催化學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

6 候煥知;孫鵬飛;范曲立;黃維;;分子刷型共軛聚合物光敏劑的制備及其對(duì)HepG2細(xì)胞的靶向光動(dòng)力治療[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第30屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集-第二十一分會(huì)：π-共軛材料[C];2016年

7 趙占娟;孟帥;許曾平;劉天軍;;新型水溶性糖酞菁類光敏劑的抗菌活性研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第三十三屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

8 胡萍;黃明東;陳卓;;不同正電荷數(shù)目的酞菁光敏劑的抗菌作用比較研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第四屆卟啉與酞菁學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2017年

9 陳錦燦;陳卓;周山勇;羅智璞;陳宏煒;王俊東;陳耐生;黃金陵;黃明東;;具有腫瘤靶向性的一種新型高效光敏劑[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第27屆學(xué)術(shù)年會(huì)第05分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2010年

10 宋心凱;楊希川;蔡斌;鄧子健;;傒類光敏劑在染料敏化太陽(yáng)能電池中的應(yīng)用[A];第五屆新型太陽(yáng)能電池學(xué)術(shù)研討會(huì)摘要集（納晶敏化太陽(yáng)能電池篇）[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 特約通訊員 唐海濤;全球光敏劑新藥巡禮[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

2 河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院 王玉芳;護(hù)士勿忘多重耐藥菌防控職責(zé)[N];健康報(bào);2012年

3 樊丹邋柴玉;衛(wèi)生部要求加強(qiáng)多重耐藥菌醫(yī)院感染控制工作[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

4 記者 孫夢(mèng);多重耐藥菌院感防控達(dá)成專家共識(shí)[N];健康報(bào);2015年

5 記者 孫夢(mèng);多重耐藥菌院感防控有了技術(shù)指南[N];健康報(bào);2011年

6 記者 張夢(mèng)然;發(fā)現(xiàn)新抗生素!能殺死多重耐藥菌[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

7 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院感染控制中心主任 吳安華;應(yīng)對(duì)多重耐藥菌分兩步走[N];健康報(bào);2014年

8 劉霞;法首次用人類干細(xì)胞制造出表皮[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

9 編譯 朱向晗;抗多重耐藥菌噬菌體療法研究受關(guān)注[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2018年

10 衛(wèi)新辦;醫(yī)院要從多學(xué)科角度加強(qiáng)監(jiān)控[N];保健時(shí)報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭科;靶向蛋白與藥物復(fù)合物的制備及功能研究[D];福州大學(xué);2015年

2 戴維德;細(xì)胞光敏損傷位點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2004年

3 姚建忠;新型二氫卟吩類光敏劑及環(huán)六脂肽類抗真菌藥物的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 李曉松;應(yīng)用熒光光譜技術(shù)對(duì)光動(dòng)力學(xué)治療過(guò)程中光敏劑含量的監(jiān)測(cè)[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2007年

5 黃焱;新型生物靶向光敏劑酞菁鋅介導(dǎo)的光動(dòng)力療法治療CNV體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2007年

6 李士鋒;以羥基為吸附基團(tuán)的光敏劑及芳胺類空穴傳輸材料應(yīng)用于染料敏化太陽(yáng)能電池的研究[D];大連理工大學(xué);2012年

7 郭向威;多酸基無(wú)機(jī)光敏劑在p-型染料敏化太陽(yáng)能電池領(lǐng)域的應(yīng)用[D];東北師范大學(xué);2017年

8 劉婧;雜合離子液體電解質(zhì)、硅卟啉及吩VA嗪光敏劑在染料敏化太陽(yáng)能電池中的應(yīng)用[D];大連理工大學(xué);2013年

9 孟帥;卟啉光敏劑的合成、生物活性篩選與構(gòu)效關(guān)系研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 洪閣;用于腫瘤光動(dòng)力療法的新型水溶性光敏劑的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫實(shí);新型抗菌活性氨基酸卟啉光敏劑4I的抗菌活性和細(xì)胞毒性的體外研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

2 張利明;雙功能化光敏劑的設(shè)計(jì)合成及應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2018年

3 顏?zhàn)恿?Bodipy納米光敏劑的設(shè)計(jì)合成及其在抗腫瘤方面的應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2018年

4 曹群芳;噻吩并咔唑稠環(huán)基有機(jī)光敏劑的合成及其光伏性能研究[D];湘潭大學(xué);2018年

5 田木華;不同濃度溴化鎂酞菁光敏劑與紅細(xì)胞損傷的相關(guān)性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2017年

6 毛艷;近紅外驅(qū)動(dòng)的納米光敏劑的制備、穩(wěn)定性及載藥性能研究[D];浙江師范大學(xué);2018年

7 劉大鋒;光敏劑抗菌機(jī)理的研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2018年

8 李麗;新型光敏劑左卟吩鈉的理化屬性分析及抗腫瘤機(jī)制研究[D];陜西師范大學(xué);2017年

9 檀鄒;玫瑰紅介導(dǎo)的血管靶向光動(dòng)力療法光敏劑劑量?jī)?yōu)化研究[D];福建師范大學(xué);2017年

10 葉舒岳;BODIPY類光敏劑的設(shè)計(jì)合成及其抗腫瘤活性研究[D];蘇州大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2834510