研究背景肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上發(fā)病率較高的惡性腫瘤,嚴重威脅人們的健康和生命。全球不論在肝癌高發(fā)地區(qū)還是低發(fā)地區(qū),HCC發(fā)病率男性高于女性2~8倍。在歐美,HCC的主要致病因素是慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染,而在亞洲和非洲則是慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染。目前HCC的治療方法主要有外科治療、消融技術(shù)、經(jīng)動脈治療、外電子束放療、系統(tǒng)治療以及系統(tǒng)治療。由于手術(shù)治療具有一定局限性,且輔助治療的方法有限,因此,急需更有效的綜合輔助治療方法來提高患者預后,相對于傳統(tǒng)的放化療等輔助方法,分子靶向藥物能有效地殺滅腫瘤細胞,療效更好,且全身毒副作用較少,對HCC的治療具有重要意義。沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(silent information regμLator 2 homolog 1,SIRT1)與酵母中發(fā)現(xiàn)的沉默信息調(diào)節(jié)因子Sir2基因家族同源,sirtuin家族由7個成員(SIRT1-7)組成,它們共享高度保守的催化核心結(jié)構(gòu)域并依賴于NAD+的酶功能,家族成員的N-和C-末端延伸及其亞細胞定位不同,它們共同負責其各種結(jié)合配偶體以及不同的代謝功能,介導刺激誘導的細胞凋亡。SIRT1能使組蛋白和其他關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子脫乙�；�,如p53,NF-κB,Foxo,Ku70,E2F1,PPARγ共激活因子1α和缺氧誘導的轉(zhuǎn)錄因子(HIF)。它對基因轉(zhuǎn)錄的廣泛影響已經(jīng)集中在細胞衰老,新陳代謝,炎癥和應(yīng)激反應(yīng)等有關(guān)的細胞活動中。研究顯示,SIRT1在HCC患者中異常高表達。由此,本實驗室基于SIRT1展開抗肝癌活性研究。研究目的利用計算機輔助藥物設(shè)計,本實驗應(yīng)用Sybyl2.1平臺的Surflex-Dock模塊研究Tipranavir和SIRT1晶體的對接研究,通過體外抗肝癌活性研究,初步確定Tipranavir對肝癌細胞HepG2具有一定的抑制作用,但是具體通過哪些細胞通路來抑制肝癌細胞的增殖還有待研究,因此本課題從此出發(fā),將研究Tipranavir的作用機制,為Tipranavir治療HCC提供一些思路。研究內(nèi)容1.應(yīng)用Sybyl2.1進行分子對接,配體為Tipranavir受體為SIRT1蛋白。2.Tipranavir體外抗肝癌活性研究,例如通過MTT法檢測藥物對于肝癌細胞HepG2的增殖的影響、LDH法檢測細胞增殖、流式細胞術(shù)檢測藥物對肝癌細胞凋亡的影響、Hoechst染色法檢測細胞凋亡、蛋白免疫印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白。3.構(gòu)建HepG2細胞SIRT1沉默細胞株及驗證及siRNA沉默SIRT1基因?qū)epG2細胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的的影響。4.Tipranavir對HepG2細胞作用的時間和劑量對SIRT1蛋白表達的影響。5.SIRT1過表達對HepG2細胞凋亡的影響及作用機制探討。研究結(jié)果本課題通過Tipranavir體外抗肝癌活性研究初步證實Tipranavir對肝癌細胞HepG2具有一定的增殖抑制作用,并通過流式細胞儀檢測藥物Tipranavir會促進細胞凋亡,通過siRNA-SIRT1沉默HepG2初步證實藥物可通過抑制SIRT1從而促進細胞凋亡,并通過相關(guān)促凋亡蛋白驗證得出Tipranavir通過抑制SIRT1促進細胞凋亡。
【學位單位】：重慶理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

增殖性疾病以及衰老的許多潛在用途。目前發(fā)現(xiàn)與 HCC 有關(guān)的號通路包括血小板原性生長因子受體[20]、成纖維細胞生長因)[21]和血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)[22]，這些信號通路共同介導增殖、存活、遷移和轉(zhuǎn)移[23]，這些靶點的發(fā)現(xiàn)促成了治療 HCC 的靶點或多靶點）的研發(fā)，如圖 1.1 所示。表皮生長因子受體(EGFR供了合理的靶點[24]，因為它通常在多種實體瘤中過表達，并且其療法和放射療法的抗性以及不良預后相關(guān)。 西妥昔單抗(C255)是FR 的特異性單克隆抗體，與化學療法和放射療法具有協(xié)同作用，已療伊立替康難[25]治性結(jié)直腸癌(CRC)和頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN妥昔單抗[26]治療非小細胞肺癌(NSCLC)，乳腺癌和胰腺癌的臨床試，西妥昔單抗已被證明是一種治療 EGFR 過度表達的新策略[27]。盡和進展與各種信號通路的錯誤傳到有關(guān)，但其機制尚不確定[28]。20抗腫瘤制劑索拉菲尼(多吉美)同時被美國和歐盟批準用于治療HC著晚期 HCC 的靶向治療向前邁出了重要一步[29]。

重慶理工大學碩士學位論文的特定機制奠定了基礎(chǔ)[45]。T1 的制劑劑信息調(diào)節(jié)因子 1)是哺乳動物 sirtuin 家族蛋白(S守的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+依賴性脫乙存活[1]。SIRT1 在細胞活動過程中扮演者重要作非組蛋白，如圖 1.2；SIRT1 在細胞生長、分化動中起到了重要作用，與眾多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控 SIRT1 在各種生物過程中的調(diào)節(jié)作用外，在 HCC要的是，SIRT1 被證實參與 HCC 的腫瘤發(fā)生、子的脫乙�；�。

圖 1.3 SIRT1 參與了多種生理活動Figure1.2 SIRT1 involved in a variety of physiological activities來，許多研究表明 SIRT1 與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究顯中 SIRT1 的含量明顯增加[47]�；� SIRT1 在癌癥中高表達，腫瘤促進劑，并且大多數(shù)學者這么認為，也有人認為是腫瘤抑l 作為腫瘤的靶點不斷深入研究，以及對 SIRTl 抑制劑的作用機IRT1 小分子抑制劑主要有 β-萘酚類、吲哚類、2-苯甲酰胺類、s、Tenovins、天然產(chǎn)物類等[48]。T1 的表達及調(diào)控T1 除自身的表達和活性受到精細的調(diào)控，同時也調(diào)控其轉(zhuǎn)錄水對 SIRT1 轉(zhuǎn)錄水平包括 p53 負性調(diào)節(jié) SIRT1 轉(zhuǎn)錄、FOXO 家IRT1 轉(zhuǎn)錄、HIC1(Hypermethy in cancer1)負性調(diào)節(jié) SIRT1 轉(zhuǎn)錄IRT1 轉(zhuǎn)錄[38]。

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