惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康的重大疾病,其治療以手術(shù)治療,放射治療、化學(xué)療法以及近年來的免疫治療為主。無論是放療、化療還是免疫治療,耐藥和精準用藥的選擇性不高是制約其治療的難題。雖然免疫治療的優(yōu)勢顯著,但患者的應(yīng)答率不高,因此化療雖有諸多不盡人意,但依然侵襲轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療方案。近年來靶向藥物的出現(xiàn),為腫瘤患者帶來新的希望。靶向藥物靶點明確,但是耐藥迅速,并且只有少數(shù)靶向藥物有耐藥標志物。目前臨床上缺乏精準有效的指示標志物來預(yù)測化療與靶向治療效果,因此臨床上亟待發(fā)現(xiàn)新的指示標志物,用以精準用藥,提高患者生存率及生存治療。AGR2是二硫鍵異構(gòu)酶家族成員,雖然是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位蛋白,但AGR2仍可定位于細胞胞質(zhì)和分泌至細胞外,具有分泌特性。AGR2作為癌基因,在多種腫瘤中高表達:1)可顯著促進腫瘤的增殖與侵襲轉(zhuǎn)移;2)其分泌特性,提示可作為腫瘤的診斷標志物;3)可作為藥物靶點,已有AGR2抗體藥物的研究報道。作為藥物靶點,已有研究發(fā)現(xiàn)AGR2與耐藥有關(guān),對乳腺癌內(nèi)分泌治療耐受。目前AGR2與腫瘤耐藥的研究較少。因此本論文首先通過藥物篩選,確定AGR2表達與腫瘤治療化療藥物和靶向藥物的關(guān)聯(lián),發(fā)現(xiàn)其表達顯著影響藥物的藥效。隨后對其耐藥機制進行研究,發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)和分泌的AGR2均通過不同的機制參與耐藥,最后通過AGR2介導(dǎo)的耐藥機制探討其應(yīng)對方案,并確定分泌的AGR2可作為化療以及血管靶向藥物的用藥指示標志物,并根據(jù)AGR2的表達提出序貫用藥的策略。第一部分AGR2表達對腫瘤化療藥物和靶向藥物敏感性的影響AGR2被認為是一種癌基因,能夠顯著促進癌細胞增殖與侵襲轉(zhuǎn)移,并且多個報道顯示AGR2能夠促進癌細胞抵抗細胞死亡。目前發(fā)現(xiàn)AGR2在乳腺癌中高表達促進他莫昔芬及多柔比星耐受,但是在我們前期通過組學(xué)數(shù)據(jù)分析在多西紫杉醇耐藥的前列腺癌細胞中AGR2表達顯著下調(diào)。因此我們首先進行了通量的藥物篩選以確定AGR2的表達與腫瘤化療耐受的相關(guān)性,為進一步分析AGR2的功能提供基礎(chǔ)。一、不同細胞AGR2的基礎(chǔ)表達對化療藥物的敏感性對比通過對常見的腫瘤細胞AGR2基礎(chǔ)表達進行分析,分別選取AGR2高表達和低表達的細胞進行藥物敏感性篩選,發(fā)現(xiàn)AGR2的表達水平影響藥物的藥效:1.低表達AGR2的非小細胞肺癌與結(jié)腸癌細胞對化療藥物耐受WB實驗結(jié)果顯示非小細胞肺癌細胞A549中AGR2表達顯著低于H460細胞,SW620中AGR2表達顯著低于SW480。根據(jù)MTT結(jié)果分析其IC50值,結(jié)果表明低表達AGR2的A549與SW620細胞對多西紫杉醇、阿霉素及順鉑三種化療藥物較為耐受,而H460與SW480細胞對所選藥物較為敏感,。2.高表達AGR2的乳腺癌細胞對細胞毒性化療藥物耐受WB實驗顯示乳腺癌細胞MDA-MB-453中AGR2表達顯著高于MDA-MB-468細胞,MTT結(jié)果表明,MDA-MB-453細胞三種化療藥物較為耐受,而MDA-MB-468細胞對藥物較為敏感。二、細胞沉默或過表達AGR2表達對化療藥物及靶向藥物的應(yīng)答分析1.細胞AGR2表達變化對化療藥物敏感性的影響我們在AGR2高表達的PC3,H460,SW480細胞中沉默AGR2表達,在AGR2低表達的DU145,A549,SW620中過表達AGR2后分析其對化療藥物敏感性的影響。MTT檢測發(fā)現(xiàn)與對照細胞相比,AGR2表達下調(diào)后前列腺癌、非小細胞肺癌及結(jié)腸腺癌細胞對化療藥物多西紫杉醇、阿霉素及順鉑產(chǎn)生耐受,過表達AGR2后三種腫瘤細胞對藥物敏感性增加,和前期數(shù)據(jù)一致。2.細胞AGR2表達改變對靶向藥物敏感性的影響MTT檢測發(fā)現(xiàn)與對照細胞相比,AGR2表達下調(diào)后前列腺癌、非小細胞肺癌及結(jié)腸腺癌細胞對EGFR靶向藥物吉非替尼、CDK4/6靶向藥物帕布昔利布及血管新生靶向藥物卡博替尼耐受,對蛋白酶體靶向藥物硼替佐米敏感。過表達AGR2后三種腫瘤細胞對吉非替尼,帕布昔利布及卡博替尼敏感,對硼替佐米耐受。3.乳腺癌細胞AGR2表達與化療藥物敏感性篩選:MTT檢測發(fā)現(xiàn)與對照細胞相比,AGR2表達下調(diào)后乳腺癌細胞MDA-MB-453細胞毒性化療藥物多西紫杉醇、阿霉素及CDK4/6靶向藥物帕布昔利布、血管新生靶向藥物卡博替尼以及蛋白酶體靶向藥物硼替佐米一致敏感。過表達AGR2的MDA-MB-468細胞對篩選的五種化療藥物一致耐受。第二部分分泌AGR2拮抗抗血管新生靶向藥物的分子機制及應(yīng)對方案在第一部分通量篩選中,我們發(fā)現(xiàn)AGR2高表達腫瘤細胞對抗血管新生藥物卡博替尼耐受,這引起了我們的興趣。腫瘤增殖與侵襲轉(zhuǎn)移均需要充足的營養(yǎng)供給,這促使腫瘤組織血管新生以保重營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣輸送,運出代謝產(chǎn)物并為至腫瘤轉(zhuǎn)移提供重要的門戶。雖然AGR2在腫瘤增殖與侵襲中研究較多,但是AGR2對抗血管新生靶向藥物的影響是否與促進血管新生有關(guān)尚無報道。課題組前期發(fā)現(xiàn)AGR2能夠顯著促進原位前列腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移,并且過表達AGR2的原位腫瘤血運尤為豐富,提示AGR2促進腫瘤血管新生以促進前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。結(jié)合第一部分AGR2對抗血管新生藥物敏感性的影響,本部分探討AGR2促血管新生的分子機制及應(yīng)對策略。一.分泌的AGR2協(xié)同VEGFA促進血管新生前期研究已證實,細胞內(nèi)高表達的AGR2可通過穩(wěn)定NF-κB介導(dǎo)的EMT機制而發(fā)揮促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用。本論文進一步發(fā)現(xiàn)過表達AGR2的細胞上清同樣具有顯著的促進腫瘤增殖和遷移的作用,提示分泌的AGR2可能發(fā)揮促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用,因此,本部分重點分析分泌的AGR2是否能夠促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移與血管新生:1.重組人AGR2蛋白促進血管新生采用原核表達純化體系獲得了帶His標簽的重組人AGR2融合蛋白。分子篩結(jié)果顯示蛋白為二聚體活性形式存在。細胞生長曲線數(shù)據(jù)表明重組人AGR2蛋白能夠促進前列腺癌細胞增殖。小管形成實驗表明rhAGR2顯著增加內(nèi)皮細胞HUVECs的小管形成數(shù)目。ELISA實驗結(jié)果顯示rhAGR2刺激后,HUVECs培養(yǎng)基中VEGFA含量無明顯變化,提示AGR2不促進VEGFA的成熟。2.重組人AGR2蛋白協(xié)同VEGFA促進血管新生小管形成實驗表明rhAGR2與VEGFA都能夠增加HUVECs小管形成數(shù)目,二者聯(lián)合刺激HUVECs小管形成數(shù)目顯著高于單獨刺激。劃痕實驗表明rhAGR2與VEGFA聯(lián)合刺激增強HUVECs與前列腺癌細胞PC3的移動能力明顯強于單獨刺激。Q-PCR結(jié)果顯示rhAGR2與VEGFA聯(lián)合刺激增強VEGFR2信號通路。二.分泌的AGR2直接結(jié)合VEGFA,激活VEGF/VEGFR信號而促進血管新生1.AGR2與VEGFA直接相互作用采用原核表達純化體系獲得了帶His標簽的重組人VEGFA融合蛋白與GST標簽的AGR2全場及截短體蛋白蛋白,SDS-PAGE表明蛋白正確且純度較高。His-pulldown實驗證實AGR2與VEGFA存在直接相互作用。通過VEGFA與AGR2截短體pulldown實驗表明AGR2與VEGFA結(jié)合于AGR2的81-101位氨基酸內(nèi)。2.AGR2與VEGFA形成分子間二硫鍵His-pulldown實驗證實AGR2半胱氨酸突變體不能與VEGFA相互作用,并且還原劑阻斷AGR2與VEGFA的相互作用。小管形成實驗表明細胞分泌與純化的AGR2 C81A突變體蛋白都不能促進HUVECs小管形成。因此PDI結(jié)構(gòu)域是AGR2與其他蛋白形成分子間二硫鍵的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。3.還原劑谷胱甘肽阻斷AGR2促血管新生與促侵襲活性免疫共沉淀實驗表明生理性還原劑谷胱甘肽能夠破壞細胞外AGR2與VEGFA相互作用。小管形成實驗顯示谷胱甘肽聯(lián)合rhAGR2刺激HUVECs小管形成數(shù)目顯著降低。劃痕實驗表明谷胱甘肽聯(lián)合rhAGR2刺激PC3細胞轉(zhuǎn)移能力顯著下降。體內(nèi)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移模型發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽能夠降低注射rhAGR2小鼠肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目,但是抗血管新生藥物貝伐珠單抗則不能抑制注射rhAGR2小鼠肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目。三、分泌的AGR2拮抗血管新生靶向藥物及用藥選擇研究小管形成實驗表明卡博替尼與貝伐珠單抗都可以有效的抑制HUVECs小管形成數(shù)目,但是rhAGR2不能逆轉(zhuǎn)卡博替尼而可以逆轉(zhuǎn)貝伐珠單抗抑制HUVECs小管形成數(shù)目。裸鼠荷瘤實驗表明腹腔注射rhAGR2能夠削弱貝伐珠單抗的抗腫瘤活性,而對卡博替尼的抗腫瘤活性沒有影響。提示AGR2指示抗血管新生藥物用藥。第三部分AGR2低表達介導(dǎo)的腫瘤化療多藥耐藥的分子機制在第一部分中,我們發(fā)現(xiàn)AGR2低表達介導(dǎo)了激素非依賴的前列腺癌,非小細胞肺癌及結(jié)腸腺癌的化療耐受。而篩選結(jié)果表明,下調(diào)AGR2介導(dǎo)了癌細胞對多種結(jié)構(gòu)不同靶點各異的化療藥物耐受,提示AGR2介導(dǎo)了腫瘤化療多藥耐藥。因此我們探尋AGR2介導(dǎo)腫瘤化療耐受的分子機制,以及克服耐藥的用藥策略。一、AGR2負調(diào)控MRP2表達介導(dǎo)腫瘤化療多藥耐藥由于低水平的AGR2可介導(dǎo)多種不同結(jié)構(gòu)和作用機制的化療藥物耐藥,而藥泵蛋白是介導(dǎo)多藥耐藥的重要機制,因此,首先分析藥泵蛋白在AGR2低表達介導(dǎo)耐藥的作用。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示PC3細胞下調(diào)AGR2,細胞內(nèi)阿霉素的蓄積水平顯著下降,表明藥泵蛋白參與其耐藥過程。MTT結(jié)果顯示,AGR2在前列腺癌、非小細胞肺癌及結(jié)腸腺癌細胞中表達與P-gp不親和的卡巴他賽藥物敏感性呈負相關(guān)PC3與H460細胞中沉默AGR2表達,免疫印跡結(jié)果顯示MRP2蛋白水平增加,免疫熒光結(jié)果顯示過表達AGR2細胞膜上MRP2減少。提示AGR2介導(dǎo)MRP2依賴的多藥耐藥。二、ARRB1介導(dǎo)MRP2蛋白降解流式細胞術(shù)檢測沉默ARRB1表達,細胞內(nèi)阿霉素蓄積明顯降低。WB結(jié)果顯示,沉默ARRB1表達,MRP2蛋白表達升高,而過表達ARRB1,細胞MRP2蛋白表達降低。免疫共沉淀檢測MRP2與同家族蛋白MRP1與ARRB1相互作用。蛋白泛素化檢測發(fā)現(xiàn)過表達ARRB1,MRP2泛素化水平增加,并且ARRB1 S412D失活突變不能增加MRP2泛素化。最后免疫共沉淀結(jié)果顯示MRP2與E3泛素連接酶MDM2相互作用。三、AGR2上調(diào)ARRB1介導(dǎo)腫瘤化療多藥耐藥1.下調(diào)ARRB1介導(dǎo)腫瘤化療多藥耐藥MTT結(jié)果顯示PC3細胞與H460細胞沉默ARRB1表達,細胞對多西紫杉醇、阿霉素及順鉑等三種細胞毒性化療藥物耐受,而在DU145與A459細胞中過表達ARRB1,細胞對三種化療藥物敏感性增加。動物實驗表明,下調(diào)ARRB1腫瘤對多西紫杉醇耐受。2.AGR2上調(diào)ARRB1蛋白表達介導(dǎo)藥物耐受WB結(jié)果顯示,H460細胞下調(diào)AGR2表達,ARRB1蛋白表達下降。免疫共沉淀結(jié)果顯示,AGR2與ARRB1存在相互作用。MTT結(jié)果表明,過表達ARRB1逆轉(zhuǎn)下調(diào)AGR2介導(dǎo)的腫瘤化療耐受,而沉默ARRB1表達則逆轉(zhuǎn)過表達AGR2介導(dǎo)的藥物敏感。3.PDI結(jié)構(gòu)域參與AGR2介導(dǎo)的藥物耐受WB結(jié)果顯示,PDI結(jié)構(gòu)域突變的AGR2 C81A突變體不能上調(diào)ARRB1表達。MTT結(jié)果顯示AGR2 C81A突變體不能影響腫瘤細胞對多西紫杉醇和阿霉素的敏感性。4.AGR2上調(diào)MRP2蛋白表達介導(dǎo)藥物耐受MTT結(jié)果表明,在PC3與H460細胞中沉默MRP2表達逆轉(zhuǎn)下調(diào)AGR2介導(dǎo)的藥物敏感。第四部分蛋白酶體抑制劑克服AGR2低表達介導(dǎo)的腫瘤化療多藥耐藥的作用及分子機制研究在前期通量篩選過程中,我們發(fā)現(xiàn)蛋白酶體抑制劑硼替佐米的藥物敏感性與AGR2表達負相關(guān),這提示我們靶向蛋白酶體有潛力作為AGR2低表達介導(dǎo)的腫瘤化療多藥耐藥的應(yīng)對策略。本部分分析AGR2調(diào)控蛋白酶體活性的機制,為腫瘤化療耐受的逆轉(zhuǎn)策略提供理論支持。一、AGR2負調(diào)控腫瘤細胞蛋白酶體活性1.AGR2與細胞泛素-蛋白酶體降解途徑相關(guān)BioGRID數(shù)據(jù)庫分析AGR2蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò),聚類結(jié)果顯示AGR2相互作用蛋白與蛋白質(zhì)泛素化相關(guān)。WB結(jié)果顯示沉默AGR2表達細胞內(nèi)總泛素化蛋白減少,而過表達AGR2細胞內(nèi)泛素化蛋白積累增加2.AGR2負調(diào)控蛋白酶體活性蛋白酶體活性分析結(jié)果表明,沉默AGR2表達,蛋白酶體中胰蛋白酶樣活性、胰凝乳蛋白酶樣活性與肽基-谷氨�；饷笜踊钚陨�,而過表達AGR2,凝乳蛋白酶樣活性與肽基-谷氨�；饷笜踊钚越档�,胰蛋白酶樣活性基本不變。二、AGR2調(diào)控蛋白酶體19s調(diào)節(jié)亞基與20s核心亞基結(jié)合11AGR2通過PDI結(jié)構(gòu)域與19s蛋白酶體調(diào)節(jié)亞基結(jié)合蛋白酶體活性檢測結(jié)果表明,與對照BSA蛋白相比,純化的AGR2蛋白并不抑制蛋白酶體活性。免疫共沉淀表明,AGR2與19s調(diào)節(jié)亞基蛋白PSMD2存在相互作用,并且PDI結(jié)構(gòu)域突變的AGR2 C81A不能與PSMD2相互作用,蛋白酶體活性檢測提示AGR2 C81A不能抑制蛋白媒體活性。MTT檢測細胞活力表明AGR2 C81A不能降低腫瘤細胞對蛋白酶體抑制劑硼替佐米的敏感性2.AGR2抑制19s調(diào)節(jié)亞基與20s核心亞基結(jié)合免疫共沉淀結(jié)果表明過表達AGR2,PSMD2與AGR2結(jié)合增多,而與核心亞基蛋白PSMA7結(jié)合減少。提示AGR2高表達抑制了 19s調(diào)節(jié)亞基與20s核心亞基結(jié)合從而蛋白酶體活性降低。三、多西紫杉醇與硼替佐米序慣性用藥克服化療獲得性耐受動物實驗數(shù)據(jù)顯示,下調(diào)AGR2介導(dǎo)腫瘤細胞對多西紫杉醇耐受,對蛋白酶體抑制劑敏感。多西紫杉醇通過下調(diào)AGR2反饋性增加蛋白酶體活性。MTT結(jié)果顯示,先采用多西紫杉醇處理12h后更換硼替佐米處理12h,腫瘤細胞存活率顯著低于單獨使用多西紫杉醇與硼替佐米或二者聯(lián)用。動物實驗表明先采用多西紫杉醇治療后使用硼替佐米治療的效果優(yōu)于單獨使用多西紫杉醇與硼替佐米或二者聯(lián)用治療效果。結(jié)論1.低表達AGR2與腫瘤細胞多藥耐藥相關(guān)。2.AGR2協(xié)同VEGFA促進腫瘤血管新生及貝伐珠單抗耐受,而谷胱甘肽與卡博替尼可以作為應(yīng)對策略。3.低表達AGR2通過下調(diào)ARRB1的表達介導(dǎo)腫瘤化療耐受4.AGR2通過抑制蛋白酶體核心亞基與調(diào)節(jié)亞基的結(jié)合負調(diào)控蛋白酶體。6.硼替佐米克服低表達AGR2介導(dǎo)的腫瘤多藥耐藥,并且多西紫杉醇與硼替佐米序慣性用藥克服臨床化療獲得性耐受創(chuàng)新點1.鑒定VEGFA是分泌AGR2的直接相互作用蛋白2.首次報道ARRB1介導(dǎo)了MRP2的降解起始,并且E3泛素連接酶MDM2介導(dǎo)了MRP2的泛素化。3.首次鑒定PSMD2是AGR2的相互作用蛋白,并且AGR2通過抑制蛋白酶體核心亞基與調(diào)節(jié)亞基的結(jié)合4.首次提出多西紫杉醇與硼替佐米序慣性用藥方案,并且提出AGR2作為指示標志物指導(dǎo)臨床腫瘤化療用藥。不足之處1.未能分析乳腺癌細胞中AGR2上調(diào)介導(dǎo)多藥耐藥的分子機制2.AGR2促進MRP2降解的機制研究不夠完整,應(yīng)當(dāng)更進一步分析MRP2降解過程中AGR2所起到的作用。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

ＡＧＲ２表達高而ＤＵ１４５細胞ＡＧＲ２表達低，因此我們采用攜帶ＡＧＲ２干擾ＲＮＡ逡逑序列的腺病毒感染ＰＣ３細胞以下調(diào)ＡＧＲ２，在ＤＵ１４５細胞中轉(zhuǎn)染ＡＧＲ２表達質(zhì)逡逑粒以上調(diào)ＡＧＲ２表達。之后對多西紫杉醇細胞存活篩選。如圖１．３，結(jié)果顯示ＰＣ３逡逑細胞下調(diào)ＡＧＲ２，對多西紫杉醇敏感性隨之下降。ＤＵ１４５細胞則與之相反。ＤＵ１４５逡逑細胞上調(diào)ＡＧＲ２，對多西紫杉醇敏感性上升。非小細胞肺癌結(jié)果與激素非依賴前逡逑列腺癌相似。在ＡＧＲ２低表達的ＮＳＣＬＣ細胞Ａ５４９中上調(diào)ＡＧＲ２表達，結(jié)果顯逡逑示細胞對多西紫杉醇敏感性上升，而Ｈ４６０細胞下調(diào)ＡＧＲ２表達，對多西紫杉醇逡逑４８逡逑

１邋ｌｉ邋１１１逡逑ＭＤＡ－ＭＢ－ＩＳ３ＭＤＡ－ＭＢ－４ｂ８邐ＭＤＡ－ＭＢ－＊５３ＭＤＡ－ＭＢ－？６８逡逑ＤＯＸ邋１０ｕｇ／ｍｌ邐ＤＯＸ１０ｕ0／ｍｌ逡逑圖１．２乳腺癌細胞內(nèi)源細胞ＡＧＲ２表達與藥物敏感相關(guān)性。Ａ．邋ＷＢ檢測乳腺癌逡逑細胞ＡＧＲ２蛋白表達水平。Ｂ．乳腺癌細胞對細胞毒性化療藥物敏感性對比。（ｎ＝３，逡逑ｎｓ邋ｐ＞０．０５，邋＊ｐ＜０．０５，邋＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１）逡逑２．腫瘤細胞上下調(diào)ＡＧＲ２與化療藥物敏感性差異篩選逡逑上一步篩選我們發(fā)現(xiàn)在激素非依賴前列腺癌，非小細胞肺癌及結(jié)腸腺癌細胞逡逑中高表達ＡＧＲ２的細胞株對多西紫杉醇，阿霉素及順鉑等三種細胞毒性化療藥逡逑物敏感耐受，低表達細胞株與之相反。而在三陰性乳腺癌細胞中，ＡＧＲ２高表達逡逑細胞株對化療藥物全線耐受。我們進一步上下調(diào)腫瘤細胞ＡＧＲ２表達，檢測細胞逡逑對化療藥物耐受情況，首先是多西紫杉醇。我們課題組前期以報道ＰＣ３細胞逡逑ＡＧＲ２表達高而ＤＵ１４５細胞ＡＧＲ２表達低

逡逑阿霉素結(jié)果與多西紫杉醇相似。如圖１．４，在ＡＧＲ２低表達的ＤＵ１４５，Ａ５４９，逡逑ＳＷ６２０細胞中上調(diào)ＡＧＲ２表達，結(jié)果顯示細胞對阿霉素的敏感性上升，而ＡＧＲ２逡逑高表達的ＰＣ３，Ｈ４６０，邋ＳＷ６２０細胞下調(diào)ＡＧＲ２表達，細胞對阿霉素藥物敏感性下逡逑降。乳腺癌細胞依舊得到了相反的結(jié)果。逡逑５ｕｇ／ｍｌ邐１０ｕｇ／ｍｔ邐５ｕｇ／ｍｌ邐１０ｕｇ／ｍｌ逡逑ｐ。遍輸－煖偷逡逑ＭＣＩ邋ＡＯＲ７Ｉ邐ＭＣ？邋Ａ邋ＯＨＭ邐ｐｃＯＮＡ邋ｐｃＡＯＨ＞邐ｐ＜ＯＭＡ邋ｐｃＡＯＩ＊７逡逑ＯＯＫ？ｕ0ｎＭ邐ＯＯＸ１０ｕ0＞ｆＴｉｌ邐ＡＭ９邐ＡＭ＊逡逑ＮＯ邐Ａ（Ｈｍ邐ＭＯ邐ｐｃＯＮＡ邋ｐｃＡＯＲ７邐ｐｃＤＮＡ邋ｐｃＡＣＲ？逡逑－ｉｆｌ破—ｉｆｌvR逡逑ＯＯＸＷ＾邐ＤＯＸＩＯｕ＾ｍｌ邐ＰＣＡＯＩＭ邐ＰＣＯＮＡ邋ＰｃＡＯＲ？逡逑ＯＯＸ邋Ｓｕｏｆｍｌ邐ＤＯＸ邋１０ｕａ／ｎＫ逡逑ＭＢ４ＳＳ邐ＨＢ４？＞邐ＭＢ４Ｃ８邐ＭＢ４Ｍ逡逑ａ？－ｌ邋Ｉ邐：邐１邐Ｉ邐：邐１邐。＿＊｜逡逑ＭＤＡ－ＭＢ￣４５３！＊．‘ｊ＿邋■邐ｆ°‘ｊ＿邋■邋ＭＤＡ－ＭＢ￣４６８邋ｆ■邋ｉ－邋■逡逑＂ｉｍｍ邋：１Ｕ邋：ｍｍ邋：；Ｕ逡逑圖１．４激素非依賴前列腺癌，非小細胞肺癌，結(jié)腸腺及乳腺癌細胞中沉默或逡逑過表達ＡＧＲ２，檢測細胞對多柔比星的敏感性。（ｎ＝３，ｎｓｐ＞０．０５，邋＊ｐ＜０．０５，逡逑＊＊ｐ＜０．０１，＊＊＊ｐ＜０．００１）逡逑我們在順柏篩選中也得到了相似的結(jié)果。如圖１．５邋ＡＧＲ２高表達細胞感染腺逡逑病毒之后細胞對順鉑的敏感性下降。在ＡＧＲ２低表達細胞中過表達ＡＧＲ２介導(dǎo)逡逑了細胞對順鉑的藥物耐

本文編號：2830114