肝癌作為嚴(yán)重威脅人類健康的兇手之一,其治愈率很難達(dá)到理想預(yù)期的主要原因在于:治療腫瘤的方法單一;長期用藥后腫瘤產(chǎn)生明顯的耐藥性。本論文利用不同方法研究兩個具有抗肝癌作用的小分子化合物:NT157和強心苷10-4-4的抗腫瘤機制,對發(fā)現(xiàn)新的高效抑癌藥物、研究藥物的抑瘤機制,乃至開發(fā)新藥以及治療癌癥意義重大。第一章研究NT157的抗肝癌分子機制。肝癌是一種在我國發(fā)生率較高的一種惡性腫瘤,多種生理或環(huán)境因素都可能誘發(fā)肝癌,因此明確治療肝癌藥物的作用靶點和機制就顯得尤為重要。NT157是小分子酪氨酸磷酸化抑制劑在細(xì)胞水平對多種癌細(xì)胞(結(jié)腸癌、前列腺癌等)有較強的抑制效果。我們的實驗發(fā)現(xiàn)NT157在肝癌細(xì)胞中也具有較強的促凋亡作用,但是NT157在肝癌細(xì)胞中的作用機制還未被研究。我們利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在蛋白水平對NT157抑制肝癌細(xì)胞生長或誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡機制進行探索。利用細(xì)胞培養(yǎng)中氨基酸穩(wěn)定同位素標(biāo)記(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),研究NT157在肝癌細(xì)胞中引起的蛋白質(zhì)的變化。結(jié)果表明NT157在誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡作用中有5273個蛋白質(zhì)的變化,我們通過對這些蛋白的分類,幫助我們發(fā)現(xiàn)了 NT157在肝癌細(xì)胞中的新機制,能為該類多靶點抗腫瘤藥的研發(fā)提供幫助。第二章研究強心苷類藥物10-4-4靶向核受體Nur77的抗肝癌作用。傳統(tǒng)的強心苷主要用于治療包括心律不齊、慢性心功能不全等在內(nèi)的各種心臟類疾病,近些年來強心苷的抑制腫瘤作用逐漸被發(fā)現(xiàn)并引起了藥物學(xué)家的重視,但是傳統(tǒng)強心苷毒性較大,不良反應(yīng)眾多,不適于臨床癌癥的治療。這些不良反應(yīng)出現(xiàn)的原因主要在于強心苷分子機制還未被完全了解。我們前期篩選了一系列強心苷衍生物,發(fā)現(xiàn)化合物10-4-4具有較強的抗腫瘤作用。對10-4-4的研究發(fā)現(xiàn),它能夠誘導(dǎo)核受體Nur77的蛋白表達(dá),依賴Nur77的表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞周期。對強心苷類藥物分子機制的探究,能夠在以后的研發(fā)過程中指導(dǎo)這一系列藥物的研發(fā),提高療效的同時,減輕副作用。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ邋３：邋Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ邋Ｍａｓｓ邋Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ邋（ＭＳ）－ｂａｓｅｄ邋ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ邋ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ逡逑摘自：Ｒｕｅｄｉ邋Ａｅｂｅｒｓｏｌｄ，Ｍａｔｔｈｉａｓ邋Ｍａｎｎ．Ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ－ｂａｓｅｄ邋ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００３，１邋（５）：２５２－２６２．逡逑３．２蛋白質(zhì)組學(xué)在藥物研究中的應(yīng)用逡逑藥物發(fā)現(xiàn)是一個漫長的過程，它使用來自不同領(lǐng)域的各種工具。為了加速這逡逑一進程，已經(jīng)開發(fā)出許多生物技術(shù)，包括基因組學(xué)，蛋白質(zhì)組學(xué)和一些細(xì)胞和有逡逑機方法學(xué)［２９］。蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展面臨跨學(xué)科的挑戰(zhàn)，包括傳統(tǒng)（生物和化學(xué)）和逡逑新興（高通量自動化和生物信息學(xué)）。新興技術(shù)包括二維凝膠電泳，質(zhì)譜，蛋白逡逑質(zhì)陣列，同位素編碼，雙雜交系統(tǒng)，信息技術(shù)和基于活性的分析。作為蛋白質(zhì)組逡逑學(xué)技術(shù)的一部分，這些技術(shù)正在推進蛋白質(zhì)組學(xué)在藥物發(fā)現(xiàn)過程中的實用性？。逡逑藥物發(fā)現(xiàn)過程涉及許多階段，包括目標(biāo)識別，信號通路識別，小分子優(yōu)化以逡逑６逡逑

但其對肝癌的作用尚無報道，為明確ＮＴ１５７是否對肝癌細(xì)胞具有抑制作逡逑用，我們對ＳＫ－Ｈｅｐ－丨肝癌細(xì)胞進行ＭＴＴ實驗，實驗結(jié)果表明ＮＴ１５７對ＳＫ－Ｈｅｐ－１逡逑肝癌細(xì)胞的增殖產(chǎn)生了明顯的抑制作用，其ＩＣ５０為６．７６＾Ｍ邋（圖４Ａ）。為了進逡逑一步說明ＮＴ１５７對肝癌細(xì)胞的抑制作用是否是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡實現(xiàn)的，我們逡逑在不同的藥物作用濃度和時間下觀察ＰＡＲＰ蛋白的切割情況。研究表明ＮＴ１５７逡逑處理ＳＫ－Ｈｅｐ－１肝癌細(xì)胞６小鼠就出現(xiàn)了明顯的ＰＡＲＰ切割，同時我們發(fā)現(xiàn)�。湾义系乃幬餄舛忍幚硪渤霈F(xiàn)了邋ＰＡＲＰ切割，這一方面說明ＭＴＴ的結(jié)果可信，也說明逡逑ＮＴ丨５７對細(xì)胞的凋亡作用有時間濃度依賴性（圖４Ｂ）。為了進一步說明ＮＴ１５７逡逑的誘導(dǎo)凋亡作用，我們采用了邋ＤＡＰＩ染色顯示處理ＳＫ－Ｈｅｐ－１細(xì)胞，６小時后約逡逑６０．０％的細(xì)胞顯示出核冷凝和碎裂（圖５Ａ）。此外，細(xì)胞用ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色逡逑后，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析顯示，２ｐＭＮＴ１５７處理細(xì)胞６小時，ＳＫ－Ｈｅｐ－１細(xì)胞發(fā)生逡逑廣泛的中晚期凋亡

ＮＴ丨５７對細(xì)胞的凋亡作用有時間濃度依賴性（圖４Ｂ）。為了進一步說明ＮＴ１５７逡逑的誘導(dǎo)凋亡作用，我們采用了邋ＤＡＰＩ染色顯示處理ＳＫ－Ｈｅｐ－１細(xì)胞，６小時后約逡逑６０．０％的細(xì)胞顯示出核冷凝和碎裂（圖５Ａ）。此外，細(xì)胞用ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色逡逑后，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析顯示，２ｐＭＮＴ１５７處理細(xì)胞６小時，ＳＫ－Ｈｅｐ－１細(xì)胞發(fā)生逡逑廣泛的中晚期凋亡，從０．５９％增加到１３％（圖５Ｂ）。逡逑Ａ邋１０0Ｌ邐１０５０＝６．７６０＾１邐Ｂ逡逑＾８０－ＮＴ１５７（１０ｈ）邐ＮＴ１５７（６｜ｉＭ）逡逑０邋２邋４邋６邋８邋１０＿邐０邋２邋４邋６邋８邋（ｈ）逡逑ｍＭＭＭｍ逡逑＾邐＼邐ＰＡＲＰ邐ＰＡＲＰ逡逑ｆ＇邐＼邐…邐邐逡逑２邋２０＊邐ｆ－ａｃｔｉｎ邋？＾丯邋Ｐ－ａｃｔｉｎ邋■邋■邋？邋廣逡逑２．５邐３．０邐３．５邐４．０邐４５逡逑ＬＯＧＩＯＣ逡逑圖４：邋ＮＴ１５７誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞ＳＫ－ＨＥＰ－ｌ凋亡。Ａ：ＭＴＴ實驗檢測ＮＴ１５７對ＳＫ－ＨＥＰ－ｌ逡逑的抑制增殖作用，其對細(xì)胞的ＩＣ５０為６．７６ｎＭ。Ｂ：使用時間梯度２、４、６、８、１０ｈ，濃度梯逡逑度２、４、６、８、１０ｐＭ分別對細(xì)胞進行處理，蛋白免疫印跡法測定ＮＴ１５７處理后的細(xì)胞中逡逑ＰＡＲＰ剪切蛋閂的表達(dá)水平。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４：邋ＮＴ１５７邋ｉｎｄｕｃｅｓ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｏｆ邋ｈｅｐａｔｏｍａ邋ｃｅｌｌｓ邋ＳＫ－ＨＥＰ－ｌ．邋Ａ：邋ＭＴＴ邋ａｓｓａｙ逡逑ｄｅｔｅｃｔｓ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ邋ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ＮＴ邋１５７邋ｏｎ邋ＳＫ－ＨＥＰ－ｌ

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 地麗巴爾·阿布力米提;帕提古麗·亞森;;強心苷類藥物的藥理作用及不良反應(yīng)分析[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2018年44期

2 賈雨萌;王相陽;褚揚;李偉;馬曉慧;楊勁;;強心苷類藥物藥動學(xué)研究進展[J];中草藥;2014年23期

3 李廣印;李秀芝;;強心苷類藥物的合理應(yīng)用[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年13期

4 馬金玲;王丹;杜馥曼;許麗娟;仲恒;于明亮;鄒寧;段濱紅;;強心苷類藥物與腫瘤細(xì)胞自噬的相關(guān)性[J];臨床與病理雜志;2018年10期

5 陳茹;;地高辛在臨床上的安全合理使用[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2011年09期

6 丁紹祥;王智杰;張永利;;對強心苷類臨床應(yīng)用相關(guān)問題的思考[J];醫(yī)學(xué)爭鳴;2017年02期

7 郭建華;;臨床安全合理使用地高辛[J];中外醫(yī)療;2009年23期

8 聶方;;強心苷類藥物的合理應(yīng)用[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2008年32期

9 周旋;李娟;;關(guān)于強心苷類藥物與無義介導(dǎo)的mRNA降解在抗腫瘤作用中的研究[J];臨床與病理雜志;2016年09期

10 程慶礫;;慢性腎臟病合并心腎綜合征的處理策略[J];中國實用內(nèi)科雜志;2010年02期

相關(guān)會議論文 前1條

1 蔡燕明;;淺談急救人員對甲亢合并心衰時是否可用強心苷類藥物[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 唐萍;不能混用的中西藥（下）[N];上海中醫(yī)藥報;2005年

2 趙飛;老人使用利尿劑要慎重[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

3 鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院 時仲省;口服藥：“五嚴(yán)”保安全[N];大眾衛(wèi)生報;2015年

4 張洪軍;有可能導(dǎo)致男性ED的藥物[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 包雨洲;NT157與強心苷類藥物10-4-4抗肝癌作用及分子機制研究[D];廈門大學(xué);2018年

2 何玲娟;強心苷類藥物抑制低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α蛋白表達(dá)的機制研究[D];浙江大學(xué);2013年

3 張倩;哇巴因誘導(dǎo)Jeko-1細(xì)胞凋亡的機理研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

4 王麗娟;洋地黃毒苷的微生物羥基化作用研究[D];天津科技大學(xué);2008年

本文編號：2826841