惡性腫瘤是目前最危害人類健康的疾病之一。雖然現(xiàn)在化學(xué)療法、放射療法等治療方法在臨床上用于抑制腫瘤增殖和延長病人壽命等方面取得了巨大成功。但越來越多的實踐和研究中發(fā)現(xiàn)單一治療形式已經(jīng)不能完全消除腫瘤且難以預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移。因此,要克服單一療法的限制性,采用兩種或更多種形式的聯(lián)合治療方法被認(rèn)為是替代單一治療的有效方法。先進(jìn)的納米技術(shù)可對多功能納米材料進(jìn)行智能設(shè)計并用于共遞送、共組裝兩種或多種治療藥物,為腫瘤聯(lián)合治療的設(shè)想提供了有力的支持。免疫治療是一種完全不同于化學(xué)療法的治療方式。它是通過激活或重建病人免疫系統(tǒng)并改變腫瘤微環(huán)境,使機體對腫瘤細(xì)胞重新產(chǎn)生識別和殺傷能力的一種治療方法。這種治療方法對機體正常細(xì)胞不產(chǎn)生損壞,卻能抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,并且由于記憶功能的存在而具有長期免疫的效果,因此得到了廣泛關(guān)注。聚合物納米粒具有強大的整合和包載診療試劑的能力,良好的生物相容性和可降解性,靈活的設(shè)計性和可修飾性等特征使得其作為藥物遞送載體在腫瘤治療中脫穎而出。兩親性嵌段聚合物在水相中最終形成的結(jié)構(gòu)取決于嵌段共聚物的親、疏水性嵌段的比例以及聚合物分子量。因此,我們基于兩親性三嵌段聚合物PCL-b-PEG-b-PCL,通過調(diào)節(jié)PEG和PCL的質(zhì)量比例分別獲得自組裝成聚合物納米囊泡和聚合物納米膠束的兩種材料并對其在化療-光熱聯(lián)合治療以及免疫治療中的應(yīng)用進(jìn)行了探索。具體內(nèi)容如下:1.LHRH/TAT雙肽并載DOX/PTX/ICG聚合物囊泡聯(lián)合化療-光熱治療腫瘤的研究本研究基于還原響應(yīng)型兩親性三嵌段共聚物PCL-ss-PEG-ss-PCL,采用薄膜-水化-超聲分散法制得粒徑分布均一的聚合物囊泡并偶聯(lián)氨基化的LHRH、cys-TAT,同時包載DOX、PTX、ICG構(gòu)建出LHRH/TAT雙重化療藥物聯(lián)合使用和化療-光熱治療的聯(lián)合療法。對載藥聚合物囊泡進(jìn)行粒徑、分散度、Zeta電位(ξ)和形態(tài)結(jié)構(gòu)表征,DOX、ICG、PTX載藥量和包封率測定,體外熱成像評價,DOX和PTX體外釋放研究,體外細(xì)胞攝取及細(xì)胞毒性評價,研究表明采用薄膜-水化-超聲法制得的雙肽共負(fù)載DOX/PTX/ICG的聚合物囊泡粒徑分布均一,對藥物有較高載藥量,具有還原響應(yīng)性、藥物緩釋性能及良好的光熱轉(zhuǎn)換效率,可通過雙肽作用有效實現(xiàn)細(xì)胞高效內(nèi)吞,通過聯(lián)合化療-光熱治療具有較高的細(xì)胞殺傷能力。2.包載抗原和IMQ/MPLA的陽離子脂質(zhì)聚合物納米粒及其免疫性能研究本研究構(gòu)建了一種新型多功能脂質(zhì)聚合物納米粒(liqid-polymer hybrid nanoparticles,LPNPs)疫苗系統(tǒng),共同包載具有協(xié)同效應(yīng)的抗原和兩種Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)激動劑。采用 OVA 作為抗原,TLR7 激動劑 MQ 和 TLR4激動劑MPLA作為佐劑,PCL-b-PEG-b-PCL作為載體材料并添加陽離子1,2-二油酰-3-三甲銨基丙烷(DOTAP)脂質(zhì)通過薄膜-水化-超聲-吸附法制備得到粒徑均一的陽離子脂質(zhì)聚合物納米粒。結(jié)果表明,陽離子脂質(zhì)聚合物納米粒能顯著提高DCs細(xì)胞對抗原的攝取,有效誘導(dǎo)體外DCs成熟,并促進(jìn)體內(nèi)DCs向次級淋巴結(jié)的遷移。皮下注射載OVA的陽離子脂質(zhì)聚合物納米粒后,交叉提呈水平、細(xì)胞因子分泌、長效記憶性免疫等有效提高并對腫瘤有較好的預(yù)防能力。3.靶向共傳遞抗原和佐劑聚合物納米粒及其腫瘤免疫研究通過連接甘露糖配體制得靶向樹突狀細(xì)胞DCs的聚合物雜化納米粒。共包載抗原和佐劑后,對其進(jìn)行免疫效果評估。包括形態(tài)結(jié)構(gòu)分析,粒徑分析,體外釋放行為,體外細(xì)胞毒性試驗,體外細(xì)胞攝取,體外促成熟實驗,注射部位藥物代謝分析,體內(nèi)DCs細(xì)胞向次級淋巴結(jié)的遷移,動物免疫實驗以及預(yù)防型實驗等。結(jié)果表明,制備得到的靶向共傳遞抗原和佐劑聚合物納米粒具有良好的生物相容性,顯著地提高體外促DCs成熟效果且能誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的抗原特異性CD8+T細(xì)胞,更強的淋巴細(xì)胞活化,更有效地交叉提呈以及更多的記憶性T細(xì)胞、抗體、顆粒酶B、IFN-γ同時顯著延遲小鼠腫瘤的發(fā)展。因此,這種共遞送抗原和佐劑、DCs靶向的陽離子聚合物納米粒用于癌癥免疫療法的一種極具潛力的抗原遞送系統(tǒng)。
【學(xué)位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R943
【部分圖文】：

的介質(zhì)隔離開，同時起到了載體和保護(hù)的作用。而它的親水性內(nèi)腔可以用來包載諸逡逑多親水性藥物，比如蛋白質(zhì)、生長因子、ＤＮＡ和ＲＮＡ片段。聚合物囊泡的結(jié)構(gòu)及逡逑應(yīng)用如圖１－１所示。由于獨特的結(jié)構(gòu)，同時包載親水性和疏水性藥物的能力，較好逡逑的可控性和生物穩(wěn)定性，聚合物囊泡作為新型的藥物載體得到了廣泛的應(yīng)用。逡逑兩親性共聚物逡逑昝蛋白質(zhì)、生長因子〕逡逑＾邋—邐賺親水性逡逑疏水性藥物—包載在疏水性逡逑雙籽膜層中逡逑圖ｉ－ｉ．聚合物囊泡的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用逡逑在過去的幾十年中，生物相容性聚合物膠束作為藥物的遞送載體也同樣得到了逡逑矚目發(fā)展。這與它們通過兩親性嵌段自組裝后形成的疏水性內(nèi)核－親水性外殼的結(jié)構(gòu)逡逑形態(tài)有關(guān)。如圖１－２所示［７，邋８］。與聚合物囊泡相似，聚合物膠束的親水性外殼可以逡逑包載親水性藥物并與靶向分子連接，起到靶向治療腫瘤的作用。它的疏水性內(nèi)核則逡逑用于包載疏水性藥物。膠束制備過程簡單，無需添加有毒的有機溶劑和表面活性劑，逡逑從而使得膠束具有良好的生物相容性［９］。同時，聚合物膠束具有粒徑小，生物降解逡逑性好，結(jié)構(gòu)設(shè)計的高靈活性以及容易被化學(xué)修飾等優(yōu)點［１０］。一些研宄表明這些聚逡逑合物納米膠束可以顯著提高化療藥物抗腫瘤效率并明顯減少各種副作用［７

法和進(jìn)一步的藥物裝載過程，包載了疏水性藥物ＰＴＸ、兩親性藥物ＤＯＸ、光熱轉(zhuǎn)逡逑換劑ＩＣＧ，并成功連接穿膜肽ＴＡＴ和靶向分子ＬＨＲＨ，從而實現(xiàn)了靶向－化療－光熱逡逑治療的聯(lián)合治療。圖２－１顯示了載藥聚合物囊泡ＤＰＩＮＰｓ的制備過程。經(jīng)薄膜水化逡逑超聲法制備的載ＰＴＸ、ＩＣＧ聚合物囊泡溶液ＰＩＮＰｓ為澄清透明并帶乳光的綠色溶液。逡逑加入ＤＯＸ并在６５邋°Ｃ恒溫攪拌２邋ｈ后成為澄清透明并帶有乳光的紅棕色溶液（圖逡逑２－２Ａ）。通過原子力顯微鏡測得ＤＰＩＮＰｓ的形態(tài)結(jié)構(gòu)為粒徑均一的典型球體（圖２－２Ｂ）。逡逑用ＮａｎｏＺＳ邋Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ粒徑儀測量的ＰＩＮＰｓ聚合物囊泡溶液以及ＤＰＩＮＰｓ聚合物囊泡逡逑溶液的粒徑分別為邋１６７．８７±邋１．８７邋ｎｍ、２３２．４７±邋１．４７邋ｎｍ，ＰＤＩ邋分別為邋０．１１６、０．１２７，逡逑表明親水性ＤＯＸ的載入使聚合物囊泡的粒徑增加了邋６４．６邋ｎｍ但并沒有影響聚合物逡逑囊泡的粒徑分散度。圖２－２Ｃ為ＤＰＩＮＰｓ的粒徑分布，證實了通過薄膜水化超聲法制逡逑得的聚合物囊泡是粒徑分布均一且粒徑在２００邋ｎｍ左右的納米粒。這個粒徑遠(yuǎn)遠(yuǎn)小逡逑于７００邋ｒｎｎ，因此可以獲得良好的被動靶向能力（ＥＰＲ效應(yīng)）。游離ＤＯＸ溶液帶有逡逑明顯的正電荷，因此載入ＤＯＸ后載藥聚合物囊泡的電位從－２３．８７邋ｍＶ增加到－１１．６逡逑ｍＶ。通過高速離心后取上清的方法可有效測出載藥聚合物囊泡的載藥量和包封率。逡逑其中，ＤＯＸ包封率為１３．５５邋％，載藥量為２．０６邋％；邋ＩＣＧ包封率為９６．００邋％，載藥量逡逑為９．８６邋％；邋ＰＴＸ包封率為８６．９０邋％

使用含有１０邋ｍＭ邋ＧＳＨ＋１Ｍ水楊酸鈉的ＰＢＳ溶液（ｐＨ邋７．４）為透析液，ＭＷＣＯ逡逑８，０００－１４，０００邋Ｄａ截留分子量的透析袋，在３７邋°Ｃ恒溫?fù)u床上評估聚合物囊泡ＤＰＩＮＰｓ逡逑的體外釋放行為。圖２－３Ａ顯示ＤＯＸ的釋放曲線呈雙相釋放模式。藥物釋放初期，逡逑吸附在聚合物囊泡表面的親水性ＤＯＸ快速釋放。在釋放４８邋ｈ后，未激光組、激光逡逑組、ＧＳＨ未激光組、ＧＳＨ激光組的ＤＯＸ累積百分釋放率可分別達(dá)４５．２６邋％、４５．８１邋％、逡逑６６．６９％、６８．３１％。隨后，由于ＤＯＸ在聚合物囊泡膜層中的擴散引起之后的緩慢釋逡逑放行為。同時，ＧＳＨ不斷裂解聚合物材料中的－ｓｓ－鍵，因此ＧＳＨ組ＤＯＸ累積百分逡逑釋放率明顯高于不加ＧＳＨ組。激光對ＤＯＸ的釋放行為并沒有明顯的促進(jìn)作用。逡逑聚合物囊泡的ＰＴＸ在釋放初期并沒有突釋行為，而是長期的緩慢持續(xù)釋放（圖逡逑２－３Ｂ）。造成這種現(xiàn)象的原因可能是疏水性ＰＴＸ和疏水性ＰＣＬ膜層之間較強的作用逡逑力。同時ＧＳＨ對ＰＴＸ的釋放也有明顯的促進(jìn)作用，而激光組和未激光組的釋放速逡逑率只能有稍微的差距。體外釋放實驗說明用ＰＣＬ－ｓｓ－ＰＥＧ－ｓｓ－ＰＣＬ合成的聚合物囊泡逡逑具有良好的還原敏感性，同時激光對藥物的體外釋放也有一定的增強作用。逡逑２０逡逑

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10 張麗s

本文編號：2823998