恩替卡韋(entecavir,ETV)是一種乙肝病毒多聚酶抑制劑,其結構中有3個手性中心,可產(chǎn)生8個手性異構體,而臨床用藥有效構型為單一的(1R,3S,4R)構型,本文旨在建立一種新型質譜法實現(xiàn)對ETV八個立體異構體的區(qū)分和定量測定,并通過理論模擬計算研究其區(qū)分機理。根據(jù)質譜動力學方法,在質譜電噴霧離子化過程中形成含有手性化合物、手性配體以及金屬離子的配合物母離子,然后在一定碰撞能量下進行碰撞誘導解離。解離反應中母離子競爭性丟失一分子分析物和手性配體,兩種解離途徑的解離速率與混合物的對映體組成相關,從而可對手性化合物光學純度進行測定。通過篩選合適的手性配體和金屬離子與分析物ETV配位,形成三元配合物進行質譜分析。在進行二級質譜分析時,設置二價配合物離子[M2+(A)(ref*)2]2+(M2+=二價金屬離子,A=分析物,ref*=手性配體)為母離子,通過對比特定子離子相對豐度比值的差異實現(xiàn)ETV手性異構體之間的區(qū)分。理論計算在密度泛函理論基礎上選用B3LYP函數(shù)以及6-31g*和LANL2DZ基組對ETV及其手性異構體的分子結構進行優(yōu)化。然后通過比較兩個競爭性反應的自由能差值△△G、不同配合物結構空間構型以及鍵長和二面角,研究該方法區(qū)分手性異構體的機理。具體研究結果如下:1、通過篩選實驗發(fā)現(xiàn)金屬離子Zn2+和手性配體R-貝西沙星(R-Besivance,R-B)與ETV絡合時,可產(chǎn)生穩(wěn)定的二價配合物離子[Zn2+(ETV)(R-B)2]2+,而且在一定碰撞能量下可以產(chǎn)生動力學裂解反應的產(chǎn)物子離子[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z 278)。2、選用Zn2+和R-B配位對ETV及其立體異構體有較高的區(qū)分度,當選擇目標子離子的豐度比值作為比較指標時,可實現(xiàn)ETV八個手性異構體的區(qū)分,在不同儀器上實驗結果具有重復性。3、選擇[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z278)離子進行定量分析時,發(fā)現(xiàn)目標子離子豐度比值的自然對數(shù)與異構體含量的比例之間呈現(xiàn)良好的線性關系,用于檢測ETV原料中立體異構體雜質的結果與美國藥典方法的檢測結果一致。4、理論計算獲得的ETV各手性異構體與Zn2+和R-B配位形成的配合物的優(yōu)勢構型支持本實驗結果。本文建立的質譜動力學方法可用于手性雜質的區(qū)分而不需要昂貴的色譜柱和復雜的樣品前處理,具有簡單、快速的特點,可以用于多手性中心藥物的異構體雜質檢測。
【學位單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R914

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本文編號：2823902