恩替卡韋(entecavir,ETV)是一種乙肝病毒多聚酶抑制劑,其結(jié)構(gòu)中有3個手性中心,可產(chǎn)生8個手性異構(gòu)體,而臨床用藥有效構(gòu)型為單一的(1R,3S,4R)構(gòu)型,本文旨在建立一種新型質(zhì)譜法實現(xiàn)對ETV八個立體異構(gòu)體的區(qū)分和定量測定,并通過理論模擬計算研究其區(qū)分機理。根據(jù)質(zhì)譜動力學(xué)方法,在質(zhì)譜電噴霧離子化過程中形成含有手性化合物、手性配體以及金屬離子的配合物母離子,然后在一定碰撞能量下進行碰撞誘導(dǎo)解離。解離反應(yīng)中母離子競爭性丟失一分子分析物和手性配體,兩種解離途徑的解離速率與混合物的對映體組成相關(guān),從而可對手性化合物光學(xué)純度進行測定。通過篩選合適的手性配體和金屬離子與分析物ETV配位,形成三元配合物進行質(zhì)譜分析。在進行二級質(zhì)譜分析時,設(shè)置二價配合物離子[M2+(A)(ref*)2]2+(M2+=二價金屬離子,A=分析物,ref*=手性配體)為母離子,通過對比特定子離子相對豐度比值的差異實現(xiàn)ETV手性異構(gòu)體之間的區(qū)分。理論計算在密度泛函理論基礎(chǔ)上選用B3LYP函數(shù)以及6-31g*和LANL2DZ基組對ETV及其手性異構(gòu)體的分子結(jié)構(gòu)進行優(yōu)化。然后通過比較兩個競爭性反應(yīng)的自由能差值△△G、不同配合物結(jié)構(gòu)空間構(gòu)型以及鍵長和二面角,研究該方法區(qū)分手性異構(gòu)體的機理。具體研究結(jié)果如下:1、通過篩選實驗發(fā)現(xiàn)金屬離子Zn2+和手性配體R-貝西沙星(R-Besivance,R-B)與ETV絡(luò)合時,可產(chǎn)生穩(wěn)定的二價配合物離子[Zn2+(ETV)(R-B)2]2+,而且在一定碰撞能量下可以產(chǎn)生動力學(xué)裂解反應(yīng)的產(chǎn)物子離子[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z 278)。2、選用Zn2+和R-B配位對ETV及其立體異構(gòu)體有較高的區(qū)分度,當選擇目標子離子的豐度比值作為比較指標時,可實現(xiàn)ETV八個手性異構(gòu)體的區(qū)分,在不同儀器上實驗結(jié)果具有重復(fù)性。3、選擇[Zn2+(R-B)ETV-H]+(m/z 733)和[Zn2+(R-B)2-H]+(m/z 849)以及[R-B+H]+(m/z 394)和[ETV+H]+(m/z278)離子進行定量分析時,發(fā)現(xiàn)目標子離子豐度比值的自然對數(shù)與異構(gòu)體含量的比例之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,用于檢測ETV原料中立體異構(gòu)體雜質(zhì)的結(jié)果與美國藥典方法的檢測結(jié)果一致。4、理論計算獲得的ETV各手性異構(gòu)體與Zn2+和R-B配位形成的配合物的優(yōu)勢構(gòu)型支持本實驗結(jié)果。本文建立的質(zhì)譜動力學(xué)方法可用于手性雜質(zhì)的區(qū)分而不需要昂貴的色譜柱和復(fù)雜的樣品前處理,具有簡單、快速的特點,可以用于多手性中心藥物的異構(gòu)體雜質(zhì)檢測。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R914

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本文編號：2823902