【摘要】：目的:探討苯海索(trihexyphenidyl,THP)對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,為苯海索在腦卒中應(yīng)用中奠定藥理基礎(chǔ)。方法:選用體重250~300 g SD大鼠行改良Longa線栓法致大鼠腦中動(dòng)脈阻塞再灌注(MCAO/R)模型,造模成功的大鼠(Longa評分≥2分)納入進(jìn)入實(shí)驗(yàn)(約150只);大鼠行MCAO手術(shù)前30分鐘腹腔注射藥物苯海索高劑量(THP HD,0.5 mg·kg~(-1))、苯海索中劑量(THP MD,0.25 mg·kg~(-1))、苯海索低劑量(THP LD,0.125 mg·kg~(-1))、對照組依達(dá)拉奉(Edaravone,3 mg·kg~(-1))和假手術(shù)組(Sham,1 ml PBS);MCAO后24小時(shí)深度麻醉,取出大鼠腦組織對組織進(jìn)行病理學(xué)TTC染色和尼氏染色;分別在24小時(shí)、72小時(shí)取出大鼠腦組織對相關(guān)蛋白進(jìn)行免疫組化以及Western blot分析;中長期實(shí)驗(yàn),大鼠接受MCAO/R后每天給藥一次,連續(xù)16天監(jiān)測大鼠mNSS評分,在進(jìn)行至第9天時(shí)行水迷宮試驗(yàn)。結(jié)果:各組大鼠在MCAO后24小時(shí)TTC染色病理學(xué)分析顯示,預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索的大鼠腦組織損傷側(cè)梗死面積統(tǒng)計(jì)分別為90871.5±26225.13、104577±23075.60,相比較于模型組梗死面積236839.25±35492.94顯著降低(P?0.05),預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索組相對梗死體積分?jǐn)?shù)分別為27.6±7.6%、26.4±8.03%,相比較于模型組43.24±6.28%顯著降低(P?0.05);尼氏染色顯示,預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索對比MCAO/R大鼠,大腦皮層和海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞尼氏小體數(shù)量顯著增多,排列緊密;神經(jīng)功能缺損評分(mNSS)監(jiān)測顯示,預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索的大鼠在MCAO/R 72小時(shí)以后等時(shí)間點(diǎn)顯著降低神經(jīng)功能缺損評分,改善運(yùn)動(dòng)功能和行為;大鼠在MCAO/R后第9天進(jìn)行的水迷宮實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,定位航行實(shí)驗(yàn)中預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索的大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)增加顯著降低潛伏期,第3天(依達(dá)拉奉和高劑量苯海索組的潛伏期分別是54.88±38.32秒、52.8±28.87秒)和第4天(依達(dá)拉奉和高劑量苯海索組的潛伏期分別是26.46±24.61秒、20.12±14.35秒)平均潛伏期相比模型組(第3天潛伏期91.46±29.91秒、第4天潛伏期51.75±26.30秒)顯著降低(P?0.05),空間探索實(shí)驗(yàn)中,依達(dá)拉奉和高劑量苯海索給藥的大鼠經(jīng)過平臺(tái)次數(shù)分別為3±1.41、3.5±1.70,相比較于模型組(1.36±0.75)顯著增加(P?0.05)。MCAO 24小時(shí)后免疫組化和Western blot結(jié)果顯示,預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索增加細(xì)胞核內(nèi)的Nrf2蛋白表達(dá)(依達(dá)拉奉和高劑量苯海索處理組免疫組化Nrf2陽性細(xì)胞IOD值和Western blot的Nrf2的蛋白IOD值相比模型組,P?0.05),激活Nrf2誘導(dǎo)其核易位,激活下游抗氧化蛋白HO-1表達(dá)(依達(dá)拉奉和高劑量苯海索處理組Western blot的HO-1蛋白表達(dá)條帶IOD值均顯著高于模型組,P?0.05),MCAO 72小時(shí)后免疫組化和Western blot結(jié)果顯示預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量苯海索顯著降低腦組織中p-p38、NF-kB、NLRP3和cleaved-caspase-1相關(guān)蛋白表達(dá)(兩組免疫組化p-p38、NF-kB、NLRP3陽性細(xì)胞IOD值均顯著高于模型組,P?0.05)。結(jié)論:高劑量的苯海索(THP HD,0.5 mg·kg~(-1))和依達(dá)拉奉(3 mg·kg~(-1))均可減輕腦缺血再灌注誘發(fā)的病理損傷;大鼠腦缺血再灌注后進(jìn)行長期監(jiān)測,苯海索能改善大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)行為學(xué),改善運(yùn)動(dòng)功能和學(xué)習(xí)記憶功能。MCAO/R損傷的早期,大鼠預(yù)給藥依達(dá)拉奉和高劑量的苯海索藥物均顯著上調(diào)Nrf2/HO-1信號通路,同時(shí)抑制繼發(fā)性炎癥反應(yīng)p38/NF-κB/NLRP3信號通路。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R965
【圖文】：

第一章 大鼠腦缺血再灌注動(dòng)物模型的建立和評價(jià) ECA 殘端方向與 ICA 呈一條直線，在 ECA 靠近 CCA 的分叉處栓，線栓材質(zhì)是 4-0 尼龍線，直徑 28 μm，有一定硬度，且插入膨大的圓球狀，插入深度約 18.5 ±0.5 mm 處時(shí)感到有阻力時(shí)停方結(jié)扎以防血管切口處滲血，取下止血鉗，把分離的組織恢復(fù)保暖。手術(shù)后的大鼠經(jīng)暖燈照射或者加熱墊保暖，保持其肛溫在后，在大鼠再次麻醉狀態(tài)下拔出線栓并將頸外動(dòng)脈下方的細(xì)線適量抗生素并標(biāo)準(zhǔn)縫合。將大鼠放回鼠籠，做好保暖措施，并假手術(shù)組進(jìn)行術(shù)前麻醉，分離 CCA、ECA、ICA，只在 ECA 入線栓，作為無手術(shù)對照。

模型組的 Longa 評分為 2.83 ±0.68，假手術(shù)組評分均為 0，無損傷表現(xiàn)，兩組進(jìn)雙側(cè)檢測 P 0.05，有較顯著差異（如表 1-2 和圖 1-2A）。將模型組大鼠和假手大鼠大腦組織整體進(jìn)行 TTC 染色。結(jié)果如下圖 1-2B 展示，中動(dòng)脈阻塞再灌注后動(dòng)脈控制的大腦顳葉、頂葉部分明顯呈現(xiàn)白色。表 1-2 大鼠在 MCAO/R 后 24 小時(shí)的 Longa 評分（n=6）Tab.1-2 Longa score at 24 h after MCAO/R (n=6)Group Average SDSham 0 0MCAO/R* 2.833333 0.687184271Note: *: P < 0.05 vs. Sham group

鼠腦缺血再灌注 24 小時(shí)后腦組織切片 TTCral ischemia reperfusion in rats, TTC staining 后 24 小時(shí) TTC 染色梗死面積和相對梗死體 area and relative infarct volume percentage ohours after MCAO/R in rats（n=4）Infract size Relative infar3975.50 ±2628.21 9.10 ±236839.25 ±35492.94* 43.24 ±Note: *: P < 0.05 vs. Sham group

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳紅霞;付潤芳;何燕;岳京麗;徐國恒;賈丹輝;可君;;苯海索對凝血酶誘導(dǎo)的人血小板聚集和胞漿游離鈣濃度的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

2 高遠(yuǎn);姬汴生;巴玉峰;賈丹輝;胡香杰;張貴卿;;苯海索對急性腦缺血再灌注大鼠腦組織單胺類遞質(zhì)含量的影響[J];中國臨床康復(fù);2005年37期

3 何美霞，可君，劉方洲;苯海索對大鼠急性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;1998年02期

4 徐國恒，可君;苯海索降低兔局部腦缺血腦鈣積累和鈉、鉀、水轉(zhuǎn)移的作用[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年03期

本文編號：2821280