本文對來源于近海灘涂、紅樹林土壤和深海沉積物的海洋樣品進(jìn)行分離純化,共得到真菌102株,放線菌132株,細(xì)菌10株。通過對所有菌株發(fā)酵產(chǎn)物的TLC和HPLC分析及生物活性篩選,最終選取了 3株不同來源的海洋微生物,包括海洋鏈霉菌SS17F,紅樹林海洋鏈霉菌HNA101,深海海洋細(xì)菌SHA4,并對其進(jìn)行了系統(tǒng)的次級代謝產(chǎn)物及生物活性研究。采用不同發(fā)酵方式對上述三株海洋微生物進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),通過乙酸乙酯對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行提取,綜合運(yùn)用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、MPLC、HPLC等方法對提取物進(jìn)行分離純化,運(yùn)用NMR、LC-MS等技術(shù)對單體化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,并結(jié)合X-ray單晶衍射、ECD、Mosher、Marfey法等技術(shù)手段闡明了新化合物的立體構(gòu)型。在菌株SS17F的不同發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到17個(gè)化合物,其中新化合物5 個(gè),分別是lactoquinomycin D(13)和thioquinomycins A-D(14-17)。從菌株HNA101的不同發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到25個(gè)化合物,其中包括1 1個(gè)新化合物,2-methoxy-xanthorrhorrhoeol(22),EIQ(27),alokicenones A-I(34-42)和 1 個(gè)新的天然產(chǎn)物2-hydroxy-xanthorrhorrhoeol(20)。在菌株SHA4的次級代謝產(chǎn)物中分離得到12個(gè)化合物,包括1個(gè)新化合物acantimycic acid(54)和1個(gè)新的天然產(chǎn)物7-hydroxy-2H-1,4-benzothiazin-3(4H)-one(44)�；钚匝芯匡@示,化合物14-17表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤及蛋白激酶抑制活性化合物�；衔�34和35表現(xiàn)出了顯著的抗腫瘤活性和蛋白激酶抑制活性,對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620和HCT116的IC50值在0.63-3.49 μM之間�；衔�54具有神經(jīng)保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn),采用高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí),具有培養(yǎng)周期短,微生物生長及代謝產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn);而采用大米固體培養(yǎng)基發(fā)酵時(shí),微生物次級代謝產(chǎn)物的產(chǎn)率及豐富度明顯增加,更容易獲得新的天然產(chǎn)物。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R915
【部分圖文】：

邐邐逡逑培養(yǎng)基邐質(zhì)量比邐海鹽水（２．５。／。）逡逑＾邐４０ｇ邐６０邋ｍＬ逡逑②邐豆粕邐４０邋ｇ邐３０邋ｍＬ逡逑③邐大米：豆粕邐２０ｇ：２０ｇ邐５０邐ｍＬ逡逑④邐大米：麥麩邐２０ｇ：２０ｇ邐４０邐ｍＬ逡逑⑤邐豆粕：麥麩邐２０ｇ：２０ｇ邐３０邐ｍＬ逡逑將配置好的培養(yǎng)基，置于５００ｍＬ錐形瓶中，充分混勻，加塞封口后豎直放逡逑置于高壓滅菌鍋中，在１２１邋°Ｃ下濕熱滅菌２０ｍｉｎ，取出，自然冷卻后待用。逡逑將目標(biāo)菌株少ｃｅｓ邋ｓｐ．邋ＳＳ１７Ｆ接種于上述８種培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基逡逑采用２８邋°Ｃ，邋１８０邋ｒ／ｍｉｎ搖床振蕩培養(yǎng)７天，固體培養(yǎng)基在２８邋°Ｃ恒溫室內(nèi)靜置培逡逑養(yǎng)３０天。發(fā)酵完成后，液體培養(yǎng)基的發(fā)酵產(chǎn)物用等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，逡逑固體培養(yǎng)的發(fā)酵產(chǎn)物則用乙酸乙酯浸提，每次浸泡２４小時(shí)；提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)逡逑儀減壓濃縮并回收溶劑，所得浸膏即為不同培養(yǎng)基下的發(fā)酵產(chǎn)物。對各提取物進(jìn)逡逑行ＨＰＬＣ邋（樣品濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）對比分析。逡逑ｕＶ（？１０Ｃ．０００＞邐ｕＶＩｘｌ邋．０００邋０００１邐逡逑

第２章海洋放線菌ＳＳ１７Ｆ次級代謝產(chǎn)物的研究逡逑結(jié)果顯示，采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基作為液體培養(yǎng)基時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)所得的代謝產(chǎn)逡逑物更加豐富（圖２．１Ａ），且產(chǎn)率最高，抗腫瘤活性最好（圖２．２）。固體培養(yǎng)基逡逑中，大米培養(yǎng)基作為固體培養(yǎng)基時(shí)，產(chǎn)物更為豐富（圖２．１Ｂ），產(chǎn)率較高（圖逡逑２．２）；而采用豆粕作為培養(yǎng)基時(shí)，雖然也能在ＨＰＬＣ圖譜中觀察到較為豐富的逡逑產(chǎn)物，但由于豆粕自身的很多物質(zhì)被提取出來，造成油脂含量偏高，粗提物的生逡逑物活性大大降低，也不利于后續(xù)代謝產(chǎn)物的分離；培養(yǎng)基中加入麥麩后，微生物逡逑的生長速度變慢，和單一培養(yǎng)基相比，代謝產(chǎn)物的豐富度和產(chǎn)率也都減少了。因逡逑此，選擇高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基和大米固體培養(yǎng)基作為兩種不同的發(fā)酵方式，進(jìn)行逡逑下一步的研究。逡逑■產(chǎn)率（ｍｇ／瓶）邐■抑制率／％邋（１０ｕｇ／ｍＬ）逡逑６０邐Ｈ邐Ｈ邐＾邐ｈ逡逑５０邐■－逡逑３0邋ｊ邋｜邋Ｊ邋■逡逑＼邋■，邋■邋ＭＭ，邋１，邋■，邋１Ｊ逡逑＾邋＾邋＾邋＾邋＃邋＃逡逑圖２．２不同培養(yǎng)基中菌株ＳＳ１７Ｆ發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)率和對腫瘤細(xì)胞ＮＣＩ－Ｈ１９７５的抑制率逡逑２．１．２不同發(fā)酵方式的研究逡逑進(jìn)一步對兩種發(fā)酵方式進(jìn)行對比

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文邐第２章海洋放線菌■Ｓｆｒｅｐｏｗｙｅ；邋ｓｐ．邋ＳＳ１７Ｆ次級代謝產(chǎn)物的研究逡逑此有必要對大米培養(yǎng)基的發(fā)酵周期進(jìn)行探究。實(shí)驗(yàn)中，保持溫度不變，以１０、逡逑２０、３０、４５和６０天為培養(yǎng)周期對菌株ＳＳ１７Ｆ在大米培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物豐富度逡逑和產(chǎn)量進(jìn)行評估（圖２．４）。結(jié)果表明，在不同的培養(yǎng)時(shí)間下，代謝產(chǎn)物豐度及產(chǎn)逡逑量呈現(xiàn)隨發(fā)酵時(shí)間先上升后趨于穩(wěn)定甚至略有降低的崷勢，結(jié)合肉眼觀察到的微逡逑生物生長狀態(tài)和大米培養(yǎng)基的消耗情況，最終確定菌株ＳＳ１７Ｆ在大米培養(yǎng)基中逡逑的最適宜培養(yǎng)周期為３０天。逡逑ｙｕｉｗａｗｉ邐逡逑

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本文編號(hào)：2821225