目的:評(píng)估苯乙雙胍(Pheformin)對(duì)由佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)以及聚肌胞苷酸(polyinosinic:polycytidylic acid,Poly(I:C))誘導(dǎo)的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞(human oral keratinocytes,HOKs)炎癥反應(yīng)的作用并探究其產(chǎn)生作用的機(jī)制。方法:(1)體外實(shí)驗(yàn)(InVitro):分別采用5ug/mlTPA及10ug/mlPoly(I:C)誘導(dǎo)HOKs炎癥反應(yīng)2小時(shí)后,加入不同濃度(0.5mM/L,1.0mM/L,1.5mM/L)苯乙雙胍干預(yù)22小時(shí),采用熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)檢測(cè)包括白介素 6(interleukin-6,IL-6)、白介素 8(interleukin-8,IL-8)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等相關(guān)炎癥因子以及激活轉(zhuǎn)錄因子 3(activating transcription factor 3,ATF-3)在 RNA 水平的表達(dá)量變化;并通過蛋白質(zhì)印跡法(Westem-Blot)檢測(cè)ATF-3,AMP依賴的蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)及絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)通路中細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在蛋白水平的表達(dá)量變化。(2)半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(ExVivo):采用100ug/mlPoly(I:C)誘導(dǎo)人牙齦組織塊炎癥反應(yīng)2小時(shí)后,加入不同濃度(1.5mM/L,3.0mM/L,6.0mM/L)苯乙雙胍干預(yù)22小時(shí),采用RT-PCR檢測(cè)IL-6、IL-8、TNF-α等相關(guān)炎癥因子在RNA水平的表達(dá)量變化。結(jié)果:(1)體外實(shí)驗(yàn) RT-PCR 和 Elisa 結(jié)果顯示 5ug/ml TPA 及 10ug/ml Poly(I:C)以及0.5mM/L,1.0mM/L,1.5 mM/L苯乙雙胍對(duì)于人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞無明顯毒性;TPA及Poly(I:C)能夠誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞中IL-6、IL-8、TNF-α等相關(guān)炎癥因子在RNA水平的表達(dá)量增加,苯乙雙胍能夠有效抑制這些炎癥因子表達(dá)水平的增加,苯乙雙胍抑制炎癥因子表達(dá)的效果隨著其濃度的增加愈發(fā)明顯。體外實(shí)驗(yàn)RT-PCR和Western-Blot結(jié)果顯示苯乙雙胍促進(jìn)了人角質(zhì)形成細(xì)胞中ATF-3表達(dá)量的增加并且抑制了 MAPK信號(hào)通路中p-Erk蛋白的表達(dá)。(2)半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)RT-PCR結(jié)果顯示苯乙雙胍能夠以濃度依賴的方式抑制由100ug/ml Poly(I:C)誘導(dǎo)的人牙齦組織塊中IL-6、IL-8、TNF-α等相關(guān)炎癥因子在RNA水平的表達(dá)量增加。結(jié)論:苯乙雙胍以濃度依賴性方式促進(jìn)ATF-3的產(chǎn)生以及抑制p-Erk信號(hào)通路,從而能夠?qū)τ蒚PA及Poly(I:C)引起的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥反應(yīng)產(chǎn)生抗炎作用,抑制包括IL-6、IL-8和TNF-α在內(nèi)的炎癥因子表達(dá)。苯乙雙胍在治療牙齦炎和牙周炎等牙周病以及扁平苔蘚和慢性盤狀紅斑狼瘡等口腔頜面部其他炎癥類疾病上具有一定的臨床意義。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

圖１倒置相差顯微鏡觀察分離培養(yǎng)的ＨＯＫｓ（ＸｌＯＯ）．逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ邋ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＨＯＫｓ（ＸｌＯＯ）．逡逑

不同濃度（0．５ｍＭ／Ｌ，邋１．０ｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍＭ低人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞中白介素６邋（Ａ）、白介的表達(dá)量增加的表達(dá)量。＞＜０．０５，＋＞＜０．０１廣＞ｈｏｗｅｄ邋ｔｈａｔ邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（０．５ｍＭ／Ｌ，邋ｌ．Ｏｉｔｅｄ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＩＬ－６（Ａ），邋ＩＬ－８（Ｂ）邋ａｎｄ邋ＴＮＦ－ａａｎｎｅｒ．邋／？＜０．０５，邋＾＜０．０１，邐ｐ＜０．００１．逡逑

Ｔ－ＰＣＲ結(jié)果顯示，不同濃度（０．５ｍＭ／Ｌ，邋ｌ．ＯｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍＭ／Ｌ）苯乙依賴方式降低由５ｕｇ／ｍｌ邋ＴＰＡ誘導(dǎo)的人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥反應(yīng)中白、白介素８邋（Ｂ）、腫瘤壞死因子ａ邋（Ｃ）的表達(dá)量增加。＞＜０．０５／＞＜０．００１．逡逑邋ＲＴ－ＰＣＲ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｈａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（０．５ｍＭ／Ｌ？邋ｌ．ＯｍＭ／Ｌ，邋１．５ｍｏｒｍｉｎ邋ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ邋５ｕｇ／ｍｌ邋ＴＰＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ｐｒｏｉｎｆｌａｍｉｎｅｓ邋ｓｕｃｈ邋ａｓ邋ＩＬ－６（Ａ），邋ＩＬ－８（Ｂ）邋ａｎｄ邋ＴＮＦ－ａ（Ｃ）邋ｉｎ邋ＨＯＫｓ邋ｉｎ邋ａ邋ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｅｒ．邋＊ｐ＜０．０５，邋“ｐ＜０．０１，邋“ｐ＜０．００１．逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 鄒德榮,林松,劉翳雯,戴其昌;牙周炎治療對(duì)患者齦溝液IL-8水平的影響[J];口腔醫(yī)學(xué);2002年04期

2 吳亞菲,趙川江,張靜儀;牙周治療前后齦溝液中白細(xì)胞介素-6水平的變化[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

本文編號(hào)：2821084