目的：建立SD大鼠血清、尿液固有成分標(biāo)簽庫,用以區(qū)分內(nèi)源性代謝物與外源性物質(zhì),為大鼠灌胃四物湯后的代謝組學(xué)研究提供基礎(chǔ)；對(duì)大鼠進(jìn)行單次和多次四物湯灌胃,展開血清、尿液代謝組學(xué)初步研究,探討正常大鼠灌胃四物湯后血清、尿液代謝物的變化,并以內(nèi)源性代謝物的變化情況探索四物湯的藥效機(jī)制。方法：本研究主要采用UPLC-QTOF MS技術(shù),對(duì)正常SD大鼠的血清、尿液成分進(jìn)行檢測(cè)。首先,通過自主建立的Searcher軟件將實(shí)測(cè)結(jié)果與離線HMDB數(shù)據(jù)庫相匹配,進(jìn)而建立包括大鼠血清、尿液成分全部實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)及預(yù)鑒別化學(xué)結(jié)構(gòu)等多種信息在內(nèi)的SD大鼠血清、尿液固有成分?jǐn)?shù)據(jù)庫;再利用UPLC-QTOF MS技術(shù)對(duì)單次和多次灌胃四物湯的SD大鼠血清、尿液進(jìn)行檢測(cè),將給藥組大鼠血清、尿液數(shù)據(jù)與空白組大鼠血清、尿液數(shù)據(jù)分別進(jìn)行PCA, OPLS-DA分析,選取差異化合物與SD大鼠血清、尿液固有成分?jǐn)?shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配；最后對(duì)通過一級(jí)質(zhì)譜精確質(zhì)荷比分析得到的預(yù)鑒別結(jié)構(gòu)進(jìn)行與標(biāo)準(zhǔn)品比較,二級(jí)質(zhì)譜碎片分析,進(jìn)一步驗(yàn)證鑒別結(jié)果。結(jié)果：本研究建立了SD大鼠固有成分?jǐn)?shù)據(jù)庫,不僅包含大鼠血清、尿液成分的全部實(shí)測(cè)數(shù)據(jù),還通過自主建立的預(yù)鑒別軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。血清樣品在正離子模式下得到950個(gè)有效信號(hào),其中155個(gè)信號(hào)可推測(cè)化學(xué)結(jié)構(gòu)；在負(fù)離子模式下得到1280個(gè)有效信號(hào),其中190個(gè)可推測(cè)化學(xué)結(jié)構(gòu);得到15種經(jīng)多態(tài)離子互證的化學(xué)成分。尿液樣品在正離子模式下得到2260個(gè)有效信號(hào),其中1060個(gè)可推測(cè)化學(xué)結(jié)構(gòu)；在負(fù)離子模式下得到3000個(gè)有效信號(hào),其中1270個(gè)可推測(cè)化學(xué)結(jié)構(gòu)；得到92種經(jīng)多態(tài)離子互證的化學(xué)成分。七個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)四物湯單次灌胃給藥后,在大鼠血清中共得到821種差異性成分,其中正離子模式下得到437種差異物,負(fù)離子模式下得到384種差異物。多次灌胃四物湯后,在大鼠血清中共得到182種差異性成分,正離子模式140種,負(fù)離子模式42種。通過與標(biāo)準(zhǔn)品比較和二級(jí)質(zhì)譜分析,進(jìn)一步驗(yàn)證了包含肌酸結(jié)構(gòu)的化合物,檸檬酸,11-脫氫皮甾醇等多種內(nèi)源性成分在血清中的含量發(fā)生了變化。單次和多次灌胃四物湯后的大鼠尿液中,正、負(fù)離子模式下共得到136種和77種差異化合物。通過二級(jí)質(zhì)譜分析進(jìn)一步驗(yàn)證了4-庚酮,癸二酸,3-Hydroxysebacic acid或2-Hydroxydecanedioic acid,甲基腺嘌呤,5-Hydroxy-6-methoxyindole glucuronide或6-Hydroxy-5-methoxyindole glucuronide, N-Acetyl-7-O-acetylneuraminic acid 及 Formylanthranilic acid或Noradrenochrome等多種成分在給予四物湯后在體內(nèi)的含量產(chǎn)生了變化。結(jié)論：本研究建立了SD大鼠血清、尿液固有成分?jǐn)?shù)據(jù)庫,為進(jìn)行四物湯灌胃后的大鼠代謝組學(xué)研究提供了前提條件,有效地區(qū)分了生物體內(nèi)源性成分與四物湯藥源性成分；鑒別并探討了多種灌胃四物湯后在大鼠血清、尿液中發(fā)生含量變化的內(nèi)源性成分及其生理意義,進(jìn)一步推測(cè)了四物湯可能發(fā)揮的功效。本研究從內(nèi)源性代謝物含量變化的角度為探討四物湯的藥理作用提供了參考。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R965;O657.63
【部分圖文】：

２．３正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑２．３．１單次灌胃給藥大鼠血清樣品正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑圖１３Ａ－Ｇ是正離子模式（ＥＳ＋）單次灌胃７個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn)下的給藥組與空白逡逑組大鼠血清樣品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。圖１４Ａ－Ｇ逡逑是負(fù)離子模式（ＥＳ－）單次灌胃７個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn)下的給藥組與空白組大鼠血清樣逡逑品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。Ｓ圖中的每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)逡逑變量，即ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ上在某個(gè)保留時(shí)間出現(xiàn)的某個(gè)質(zhì)荷比信號(hào)的強(qiáng)度。橫逡逑坐標(biāo)代表變量對(duì)模型的貢獻(xiàn)度，越向兩端分布貢獻(xiàn)度越大；縱坐標(biāo)代表變量的可逡逑信度，也就是變量與組別的相關(guān)性，越向兩端分布可信度、與組別的相關(guān)性越大，逡逑取值在－１到１之間橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)的正方向代表空白組信號(hào)強(qiáng)于給藥組，逡逑負(fù)方向代表給藥組信號(hào)強(qiáng)于空白組。Ｓ圖中所標(biāo)記的點(diǎn)，是橫坐標(biāo)絕對(duì)值＞逡逑０．００１，縱坐標(biāo)絕對(duì)值＞０．８，’為標(biāo)準(zhǔn)選擇出的差異性信號(hào)（ｍａｒｋｅｒ），共計(jì)８２１個(gè)，逡逑其中正離子模式（ＥＳ＋）邋４３７個(gè)，負(fù)離子模式（ＥＳ－）邋３８４個(gè)。正離子模式和負(fù)離逡逑子模式下的差異性信號(hào)（ｍａｒｋｅｒ）分別按不同趨勢(shì)下貢獻(xiàn)度（橫坐標(biāo)）的絕對(duì)值逡逑由大到小編號(hào)。逡逑Ｂ邐５５－－Ｊ５逡逑Ａ邐＂邐祖吊１．Ｗ邋巧■邋５１逡逑：：邐：邐薩一－．逡逑■邋．．．逡逑：；邐邋邐邐

２．３．１單次灌胃給藥大鼠血清樣品正交偏最小二乘辨別分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逡逑圖１３Ａ－Ｇ是正離子模式（ＥＳ＋）單次灌胃７個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn)下的給藥組與空白逡逑組大鼠血清樣品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。圖１４Ａ－Ｇ逡逑是負(fù)離子模式（ＥＳ－）單次灌胃７個(gè)給藥時(shí)間點(diǎn)下的給藥組與空白組大鼠血清樣逡逑品ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦＭＳ數(shù)據(jù)ＯＰＬＳ－ＤＡ的Ｓ圖（Ｓ－Ｐｌｏｔ）。Ｓ圖中的每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)逡逑變量，即ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ邋ＭＳ上在某個(gè)保留時(shí)間出現(xiàn)的某個(gè)質(zhì)荷比信號(hào)的強(qiáng)度。橫逡逑坐標(biāo)代表變量對(duì)模型的貢獻(xiàn)度，越向兩端分布貢獻(xiàn)度越大；縱坐標(biāo)代表變量的可逡逑信度，也就是變量與組別的相關(guān)性，越向兩端分布可信度、與組別的相關(guān)性越大，逡逑取值在－１到１之間橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)的正方向代表空白組信號(hào)強(qiáng)于給藥組，逡逑負(fù)方向代表給藥組信號(hào)強(qiáng)于空白組。Ｓ圖中所標(biāo)記的點(diǎn)，是橫坐標(biāo)絕對(duì)值＞逡逑０．００１，縱坐標(biāo)絕對(duì)值＞０．８，’為標(biāo)準(zhǔn)選擇出的差異性信號(hào)（ｍａｒｋｅｒ），共計(jì)８２１個(gè)，逡逑其中正離子模式（ＥＳ＋）邋４３７個(gè)，負(fù)離子模式（ＥＳ－）邋３８４個(gè)。正離子模式和負(fù)離逡逑子模式下的差異性信號(hào)（ｍａｒｋｅｒ）分別按不同趨勢(shì)下貢獻(xiàn)度（橫坐標(biāo)）的絕對(duì)值逡逑由大到小編號(hào)。逡逑Ｂ邐５５－－Ｊ５逡逑Ａ邐＂邐祖吊１．Ｗ邋巧■邋５１逡逑：：邐：邐薩一－．逡逑■邋．．．逡逑：；邐邋邐邐

圖１８巧j#酸標(biāo)準(zhǔn)品與信號(hào)７５在負(fù)離子模式下的選擇離子流圖和二級(jí)質(zhì)譜圖譜逡逑Ａ：巧j#酸標(biāo)準(zhǔn)品負(fù)離子模式下ＴＯＦ邋ＭＳ選擇離子流圖；Ｂ：信號(hào)７５負(fù)商子模式下ＴＯＦ邋ＭＳ逡逑選擇離子流圖；Ｃ；巧j#酸標(biāo)準(zhǔn)品二級(jí)質(zhì)譜圖譜；Ｄ：信號(hào)７５二級(jí)質(zhì)譜圖譜逡逑Ｆｉｇ邋１８邋Ｓｅｌｅｃｔｅｄ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ邋ａｎｄ邋ｉ＊ｅｌａｔｅｄ邋ＭＳ／ＭＳ邋ｏｆ邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ａｎｄ邋Ｓｉｇｎａｌ邋＊７５邋ｉｎ邋ＥＳ—逡逑Ａ：邋Ｓｅｌｅｃ化ｄ邋ｉｏ打邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｉｎｓ邋ｏｆ邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｉｎ邋ＥＳ—；邋Ｂ：邋Ｓｅｌｅｃ記ｄ邋ｉｏｎ邋ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ邋ｏｆ邋Ｓｉｇｎａｌ邋７５逡逑ｉｎ邋ＥＳ—；邋Ｃ：邋Ｃｉｔｒｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｒｅｌａ化ｄＭＳ／ＭＳ；邋Ｄ：邋Ｓｉｇｎａｌ邋７５邋ｒｅｌａ化ｄＭＳ／ＭＳ逡逑，巧邐巧Ｉ。逡逑ｒ．邋ｓ；；逡逑＂，邋Ａ：：逡逑’拍＜＾邐？巧邋１邋Ｋ邐，ｒ，扣’邐ｉ？．邋１，＂逡逑��？，２？邐，；》？：�。哼姡礤澹龋藻义希��；�？，：》，邐b8心１邋廣＊’：邐：？；，《邐…：＂邐…產(chǎn)Ｐ逡逑，．，；口邐Ｉ邋ｊｒ－Ｍ－邐Ｐ邋…：逡逑：：巧；：邐ｐ＊．，．Ｔ邐化‘化邋ｐｍ逡逑２７！邋１ＳＴ邐巧邐ＭＵ＇＂逡逑—，逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2815666