HPLC法與微生物法測定人血漿中去甲萬古霉素濃度的差異比較
發(fā)布時間:2020-09-09 19:22
目的:比較高效液相色譜(HPLC)法與微生物法測定人血漿中去甲萬古霉素濃度的差異。方法:分別使用HPLC法與微生物法對人血漿中去甲萬古霉素濃度進行檢測,回顧性分析兩種技術(shù)的臨床測結(jié)果。結(jié)果:兩種方法所測得結(jié)果的回歸方程為y=0.992 7x+0.155 8(r=0.997 6),比較去甲萬古霉素血藥濃度的檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:HPLC法與微生物法均為較有效且可靠的去甲萬古霉素血藥濃度檢測技術(shù)。各醫(yī)院在對去甲萬古霉素進行血藥濃度檢測時,可根據(jù)醫(yī)院自身的條件選擇相應的檢測方法。
【部分圖文】:
血漿標準溶液,每份4ml,一份置于-20℃冷凍,一份置于室溫條件下,并分別于0、2、4、8、12h取樣,進行離心處理,進樣20μl,對去甲萬古霉素的濃度進行測定,檢測樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,置室溫和冷凍條件下的測定結(jié)果基本一致?芍,在室溫和反復凍融條件下去甲萬古霉素血漿樣本均具有良好的穩(wěn)定性,測定過程中不需要加以特殊保護[2]。2.1.7專屬性試驗分別取患者血漿樣品400μl和空白血漿400μl,加入20%ZnSO4溶液400μl,渦旋混合2min,以轉(zhuǎn)速為500r/min離心10min,取上清液20μl進樣測定,記錄色譜圖(圖1)。由圖1可見,去甲萬古霉素保留時間為7.07min,且色譜峰與空白血漿中內(nèi)源物質(zhì)分離度高,分離效果良好。051015t,minB100806040200-10AUm1251007550250-20AUm212051015t,minA圖1去甲萬古霉素HPLC圖A.空白血漿;B.患者血漿;1.去甲萬古霉素;2.ZnSO4Fig1HPLCchromatogramofnorvancomycinA.blankplasma;B.patient’splasma;1.norvancomycin;2.ZnSO42.2微生物法2.2.1標準溶液的配制準確稱取去甲萬古霉素標準品50mg,用滅菌的磷酸鹽緩沖液(pH6.0)配制成質(zhì)量濃度為1000μg/ml的溶液,并用空白血漿將其稀釋成質(zhì)量濃度為為5、10、15、20、40、60μg/ml的標準溶液[2]。2.2.2菌懸液的配制取CMCC(B)枯草芽孢桿菌,按《中國藥典》2010年版附錄方法[3]配制。2.2.3含菌平板制備將已滅菌的抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅷ號加熱融化,待冷卻至60℃時加入適量枯草芽孢桿菌懸液,搖勻,用滅菌吸管吸取20ml,注入已消毒的直徑為90mm的抗生素測定專用平皿中,攤布均勻,用陶瓦蓋覆蓋,靜置待凝固。2.2.4打孔加樣制好的平皿冷卻凝固后,用內(nèi)徑為3mm的不銹鋼管打6個孔?
中國藥房2015年第26卷第26期ChinaPharmacy2015Vol.26No.262.3統(tǒng)計學方法通過SPSS17.0軟件分析和處理所得數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用χ2檢驗;計量資料以x±s表示,通過單因素方差分析法進行統(tǒng)計學處理。如果所得分析結(jié)果示P<0.05,可以證實兩組數(shù)據(jù)資料比較差異具有統(tǒng)計學意義。2.4HPLC法與微生物法實際血樣測定結(jié)果比較取30名應用去甲萬古霉素患者的血液樣本,分別通過HPLC法與微生物法進行血藥濃度檢測,結(jié)果見表2。以HPLC法測得的結(jié)果為橫坐標,微生物法測得的結(jié)果為縱坐標作圖,并進行線性回歸分析,結(jié)果見圖2。兩種方法所測得結(jié)果的回歸方程為y=0.9927x+0.1558(r=0.9976),表明兩種檢測方法具有較為理想的相關(guān)性。對兩種方法的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析,得P>0.05,表明兩種檢測方法比較差異無統(tǒng)計學意義。表2兩種檢測方法血藥濃度測定結(jié)果(μg/ml)Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamplesby2kindsofmethod(sμg/ml)序號12345678910HPLC法19.327.3111.678.4322.4453.6030.6511.3841.3015.87微生物法19.127.3511.507.7323.0153.1030.7711.8541.9615.12序號11121314151617181920HPLC法13.149.5632.1435.877.5738.4540.2310.546.1059.30微生物法13.059.4532.0135.217.5538.8740.0110.556.0556.11序號21222324252627282930HPLC法14.899.8916.8625.698.4230.3347.1050.5428.3010.55微生物法15.909.1817.6825.208.4428.5647.2050.2027.209.816050403020100得生物法測微血藥濃度,μg/ml020406080HPLC法?
【部分圖文】:
血漿標準溶液,每份4ml,一份置于-20℃冷凍,一份置于室溫條件下,并分別于0、2、4、8、12h取樣,進行離心處理,進樣20μl,對去甲萬古霉素的濃度進行測定,檢測樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,置室溫和冷凍條件下的測定結(jié)果基本一致?芍,在室溫和反復凍融條件下去甲萬古霉素血漿樣本均具有良好的穩(wěn)定性,測定過程中不需要加以特殊保護[2]。2.1.7專屬性試驗分別取患者血漿樣品400μl和空白血漿400μl,加入20%ZnSO4溶液400μl,渦旋混合2min,以轉(zhuǎn)速為500r/min離心10min,取上清液20μl進樣測定,記錄色譜圖(圖1)。由圖1可見,去甲萬古霉素保留時間為7.07min,且色譜峰與空白血漿中內(nèi)源物質(zhì)分離度高,分離效果良好。051015t,minB100806040200-10AUm1251007550250-20AUm212051015t,minA圖1去甲萬古霉素HPLC圖A.空白血漿;B.患者血漿;1.去甲萬古霉素;2.ZnSO4Fig1HPLCchromatogramofnorvancomycinA.blankplasma;B.patient’splasma;1.norvancomycin;2.ZnSO42.2微生物法2.2.1標準溶液的配制準確稱取去甲萬古霉素標準品50mg,用滅菌的磷酸鹽緩沖液(pH6.0)配制成質(zhì)量濃度為1000μg/ml的溶液,并用空白血漿將其稀釋成質(zhì)量濃度為為5、10、15、20、40、60μg/ml的標準溶液[2]。2.2.2菌懸液的配制取CMCC(B)枯草芽孢桿菌,按《中國藥典》2010年版附錄方法[3]配制。2.2.3含菌平板制備將已滅菌的抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅷ號加熱融化,待冷卻至60℃時加入適量枯草芽孢桿菌懸液,搖勻,用滅菌吸管吸取20ml,注入已消毒的直徑為90mm的抗生素測定專用平皿中,攤布均勻,用陶瓦蓋覆蓋,靜置待凝固。2.2.4打孔加樣制好的平皿冷卻凝固后,用內(nèi)徑為3mm的不銹鋼管打6個孔?
中國藥房2015年第26卷第26期ChinaPharmacy2015Vol.26No.262.3統(tǒng)計學方法通過SPSS17.0軟件分析和處理所得數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用χ2檢驗;計量資料以x±s表示,通過單因素方差分析法進行統(tǒng)計學處理。如果所得分析結(jié)果示P<0.05,可以證實兩組數(shù)據(jù)資料比較差異具有統(tǒng)計學意義。2.4HPLC法與微生物法實際血樣測定結(jié)果比較取30名應用去甲萬古霉素患者的血液樣本,分別通過HPLC法與微生物法進行血藥濃度檢測,結(jié)果見表2。以HPLC法測得的結(jié)果為橫坐標,微生物法測得的結(jié)果為縱坐標作圖,并進行線性回歸分析,結(jié)果見圖2。兩種方法所測得結(jié)果的回歸方程為y=0.9927x+0.1558(r=0.9976),表明兩種檢測方法具有較為理想的相關(guān)性。對兩種方法的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析,得P>0.05,表明兩種檢測方法比較差異無統(tǒng)計學意義。表2兩種檢測方法血藥濃度測定結(jié)果(μg/ml)Tab2Resultsofcontentdeterminationofsamplesby2kindsofmethod(sμg/ml)序號12345678910HPLC法19.327.3111.678.4322.4453.6030.6511.3841.3015.87微生物法19.127.3511.507.7323.0153.1030.7711.8541.9615.12序號11121314151617181920HPLC法13.149.5632.1435.877.5738.4540.2310.546.1059.30微生物法13.059.4532.0135.217.5538.8740.0110.556.0556.11序號21222324252627282930HPLC法14.899.8916.8625.698.4230.3347.1050.5428.3010.55微生物法15.909.1817.6825.208.4428.5647.2050.2027.209.816050403020100得生物法測微血藥濃度,μg/ml020406080HPLC法?
【參考文獻】
相關(guān)期刊論文 前3條
1 季閩春;薛楊勇;唐建國;楊春輝;楊耀芳;;反相高效液相色譜法測定人血清中萬古霉素的濃度[J];中國臨床藥理學雜志;2009年04期
2 彭斯維;陳永剛;鄒吉利;;酶放大免疫法測定去甲萬古霉素的血藥濃度[J];廣東藥學院學報;2014年05期
3 黃蘭淇;周魏華;陳義旺;張凌怡;萬益群;張維冰;;萬古霉素鍵合固定相的分離性能[J];色譜;2013年09期
【共引文獻】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 袁孔現(xiàn);黃義澤;毛名揚;李國忠;;RP-HPLC法測定萬古霉素血藥濃度[J];安徽醫(yī)藥;2010年02期
2 李紅宇;徐小燕;張莉;陳太權(quán);張會杰;;HPLC法測定萬古霉素和去甲萬古霉素血清藥物濃度[J];湖北民族學院學報(醫(yī)學版);2010年02期
3 張文娟;宋新文;汪洋;許瓊;劉p
本文編號:2815368
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