作為全球發(fā)病率第一的慢性疾病,糖尿病嚴重威脅了人類的健康與生活質(zhì)量。Ⅱ型糖尿病是一種異質(zhì)性內(nèi)分泌紊亂,其中高血糖癥是統(tǒng)一的特征,并伴隨著一些其他的并發(fā)癥,例如胰島素抵抗,高血壓和血脂異常。此外,糖尿病還會導致一些死亡率高的疾病,如心血管疾病或中風。目前,治療糖尿病的藥物通常是化學合成藥物和胰島素,化學藥物治療存在很多不良反應,并且目前胰島素只能注射,會帶來很多安全隱患。近年來研究發(fā)現(xiàn),從天然產(chǎn)物中提取的多糖,顯示出具有抗糖尿病的活性,且安全無毒,有望開發(fā)成為天然降糖藥。本文從不同產(chǎn)地的傳統(tǒng)降糖中藥麥冬中分離出治療Ⅱ型糖尿病最佳的活性多糖組分,并初步探究其構(gòu)效關(guān)系。多糖的口服生物利用度差,是導致其市場缺失的主要原因,本課題擬用多囊脂質(zhì)體來包裹多糖以提高其治療Ⅱ型糖尿病的活性。第一章綜述本章節(jié)綜述了Ⅱ型糖尿病藥物的研究進展,并總結(jié)了生物藥、化學合成藥以及多糖類藥物的作用機理及優(yōu)缺點,重點介紹了具有降血糖活性的麥冬多糖,并展望了麥冬多糖相關(guān)制劑研究新方向。第二章不同產(chǎn)地麥冬多糖的提取分離及純化本章節(jié)研究了兩種產(chǎn)地(四川和湖北)的麥冬塊根,經(jīng)水提、醇沉、除蛋白得到麥冬精多糖,再通過D101大孔吸附樹脂和DEAE-52纖維素陰離子交換層析柱成功從四川麥冬多糖中分離出單一多糖組分OJP-S-1,從湖北麥冬多糖中分離出兩種多糖組分OJP-H-1和OJP-H-2。并對其純度進行了一系列的鑒定,通過紫外分光光度法和蛋白質(zhì)含量測定可以看出三種純化的麥冬多糖組分OJP-S-1,OJP-H-1和OJP-H-2無蛋白質(zhì)、核酸干擾,蛋白含量均小于0.2%。從高效液相凝膠色譜分析可以看出,OJP-S-1,OJP-H-1和OJP-H-2的分子量分布范圍集中,無小分子物質(zhì)干擾,純度較高,且這三種組分的總糖含量均高達97%,為篩選最佳抗Ⅱ型糖尿病活性的麥冬多糖組分奠定了基礎(chǔ)。第三章麥冬多糖不同組分抗Ⅱ型糖尿病活性研究與結(jié)構(gòu)解析本章節(jié)成功建立了STZ誘導的Ⅱ型糖尿病小鼠模型,比較了三種麥冬多糖組分(OJP-S-1、OJP-H-1和OJP-H-2)在相同劑量下(200 mg/kg)抗Ⅱ型糖尿病的效果。與模型組相比OJP-S-1,OJP-H-1和OJP-H-2均能顯著降低Ⅱ型糖尿病小鼠的空腹血糖水平(p0.01),有效改善口服葡萄糖耐量(p0.01),并緩解胰島素抵抗癥狀,表明這三種麥冬多糖組分均有一定的降血糖效果。比較這三組的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),OJP-S-1要比OJP-H-1和OJP-H-2的降血糖效果更明顯。由于多糖的結(jié)構(gòu)與藥效之間存在一定的關(guān)系,多糖的分子量、單糖組成、糖苷鍵類型、支鏈、異頭碳構(gòu)型和高級結(jié)構(gòu)與其活性具有高度的關(guān)聯(lián)性。本章對三種麥冬多糖組分的初步結(jié)構(gòu)進行了解析,并結(jié)合其抗Ⅱ型糖尿病的效果初步探討分析了構(gòu)效關(guān)系。結(jié)構(gòu)解析發(fā)現(xiàn)OJP-S-1組分有著發(fā)揮其降糖活性所需的更合適的分子量,還原性糖苷鍵(1→3)的比例更高,并且同時具有α和β構(gòu)型,這些結(jié)構(gòu)使得OJPS-1組分具有更加明顯的抗Ⅱ型糖尿病的活性。第四章麥冬多糖多囊脂質(zhì)體的處方工藝研究及質(zhì)量評價麥冬多糖是水溶性藥物,穩(wěn)定性較差、生物利用度不高以及對某些細胞穿透能力不強,這些都限制了它的臨床應用,因此本文選取了適合水溶性大分子物質(zhì)的多囊脂質(zhì)體制劑來解決這些問題。本章節(jié)擬用抗Ⅱ型糖尿病活性最佳的多糖組分OJP-S-1,建立了苯酚硫酸法測定麥冬多糖含量的分析方法,并進行了方法學考察。結(jié)果表明,該分析方法,系統(tǒng)適用性好;在0.1-1 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;日內(nèi)及日間精密度的RSD值均小于2%;方法回收率高(RSD3%),可用于麥冬多糖OJP-S-1的定量分析。以復乳法制備麥冬多糖多囊脂質(zhì)體(OJPMVLs),單因素法篩選處方,Box-Behnken響應面設(shè)計法優(yōu)化處方,優(yōu)選的處方為麥冬多糖OJP-S-1 24 mg,維生素E 5 mg,DOPC 20 mg,DPPG 4 mg,膽固醇16 mg,三油酸甘油酯10 mg,吐溫80 10 mg,制得的麥冬多糖多囊脂質(zhì)體包封率高(81.24±2.11%)。體外表征表明,制備的多囊脂質(zhì)體呈圓形,粒度圓整,大小均一,每個多囊脂質(zhì)體由許多小囊泡堆積而成,多室結(jié)構(gòu)清晰可見。平均粒徑為15.37μm,粒徑分布范圍較窄,Zeta電位為-38.38±3.26 mV。麥冬多糖多囊脂質(zhì)體初步穩(wěn)定性良好,未出現(xiàn)明顯的絮凝或沉淀現(xiàn)象,包封率未有明顯變化,且粒徑變化不顯著。第五章麥冬多糖多囊脂質(zhì)體抗Ⅱ型糖尿病藥理作用研究制備麥冬多糖多囊脂質(zhì)體,旨在于增加麥冬多糖在體內(nèi)的穩(wěn)定性,并且多囊脂質(zhì)體有著良好的緩釋效果,能提高藥物在體循環(huán)時間,提高生物利用度,進而提高藥效。本章節(jié)系統(tǒng)性地評價了麥冬多糖(OJP-S-1)及其多囊脂質(zhì)體抗Ⅱ型糖尿病的效果。OJP-MVLs組(100 mg/kg)、OJP-MVLs組(200 mg/kg)和OJPS-1組(200 mg/kg)都能顯著降低Ⅱ型糖尿病小鼠的FBG水平(p0.01),改善口服糖耐量(p0.01)和胰島素抵抗的癥狀(p0.01),且OJP-MVLs組(高、低劑量)效果優(yōu)于OJP-S-1組(200 mg/kg)。OJP-S-1與OJP-MVLs組(高、低劑量)都能顯著的降低Ⅱ型糖尿病小鼠的TC、TG和LDL(P0.01),以及不同程度的增加HDL及HDL/LDL(P0.01)。且高劑量組的OJP-MVLs改善脂代謝紊亂的效果要優(yōu)于陽性藥二甲雙胍組。證實麥冬多糖多囊脂質(zhì)體能夠有效緩解血脂代謝紊亂的癥狀,預防心血管疾病的發(fā)生并緩解其癥狀。此外,OJP-S-1和OJP-MVLs高、低劑量組都能顯著的增加Ⅱ型糖尿病小鼠肝葡萄糖激酶的活性(P0.01)同時減弱G-6-Pase的活性(P0.01),而且能顯著的增加肝糖原含量(P0.01)。多囊脂質(zhì)體的作用效果遠勝于原料藥,其中OJP-MVLs高劑量組改善糖代謝的效果更勝于二甲雙胍組。證實麥冬多糖多囊脂質(zhì)體能加速葡萄糖氧化代謝和抑制糖異生反應,并增強肝臟將血糖轉(zhuǎn)化為糖原的能力。肝臟是脂代謝和糖代謝的主要器官和重要場所,因此功能良好的肝臟對Ⅱ型糖尿病的治療也是至關(guān)重要的。肝組織的切片結(jié)果表明,麥冬多糖多囊脂質(zhì)體比原料藥能更好的修復因STZ誘導的Ⅱ型糖尿病而受損的肝組織,有效緩解糖尿病型肝臟病變。
【學位單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R914;R96
【部分圖文】：

麥冬多糖及其多囊脂質(zhì)體抗Ⅱ型糖尿病活性研究作得到產(chǎn)地為湖北的麥冬粗多糖。2.1.2 三氯乙酸除蛋白將四川麥冬粗多糖和湖北麥冬粗多糖均配置成 20 %的水溶液，加入 20 %三氯乙酸溶液使體系中三氯乙酸最終濃度為 7 %，磁力攪拌 30 min，離心 30 min（10000 r/min）去除蛋白沉淀，收集上清液并用氫氧化鈉溶液調(diào) pH 至中性，減壓濃縮后，裝入透析袋中（截留分子量為 3500Da），在蒸餾水中透析 4 天，勤換水。合并濃縮，凍干得四川麥冬精多糖 OJP-S 和湖北麥冬精多糖 OJP-H。麥冬多糖提取分離的具體流程見圖 2.1。

圖 2.2 OJP-S 和 OJP-H 的純化流程圖Figure 2.2 The purification flowchart of OJP-S and OJP-H.2.3 純度鑒定2.3.1 紫外分光光度分析將各純化組分 OJP-S-1, OJP-H-1, OJP-H-2 配置成 1 mg/mL 的溶液，以蒸餾水為空白，在 200-800nm 范圍內(nèi)進行全波長掃描，檢測各組分在波長 280nm 和260 nm 處是否有蛋白和核酸的吸收。OJP-S-1, OJP-H-1, OJP-H-2 在 200-800 nm 范圍內(nèi)的紫外全波長掃描如圖2.11 所示，在 200 nm 處均顯示出明顯的多糖特征紫外吸收峰，三種麥冬多糖組分在 280 nm 和 260 nm 處均無明顯的紫外吸收，說明其不含蛋白與核酸。2.3.2 高效液相凝膠色譜分析色譜條件：預柱為 TSK-GUARDCOLUMNPWH(7.5×75nm)，分離柱為 TSK-

圖 2.3 OJP-S 的 D101 柱層析洗脫曲線Figure 2.3 The D101 column chromatography elution curve of OJP-S.圖 2.4 OJP-S 的高效液相凝膠色譜圖Figure 2.4 High-performance gel filtration chromatography (HPGFC) profile of OJP-S.為驗證這一點將這四個組分合并為 OJP-S-1，旋蒸，過 DEAE-52 柱層析，結(jié)果如圖 2.5 所示，結(jié)果只有水洗脫部位 (1-50 管) 含有多糖成分，各個濃度的NaCl 洗脫液幾乎不含多糖，說明四川麥冬精多糖中只有中性多糖，將水洗部分濃縮進樣，得到的色譜圖 2.6 依然是相對均一的組分，所以推測四川麥冬精多糖中只含有一種均一多糖組分即 OJP-S-1。

【參考文獻】

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1 衛(wèi)晉菲;周亮;王曉青;王心慧;張鑫;王明媚;;41例瑞格列奈致不良反應的文獻分析[J];臨床藥物治療雜志;2015年06期

2 曹爽;付紹智;王永多;譚全邦;;麥冬多糖藥理作用研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2015年28期

3 范云鵬;馬琳;張為民;宋曉平;郭超;侯偉峰;童德文;;麥冬多糖脂質(zhì)體增強雛雞免疫功能的分析[J];畜牧獸醫(yī)學報;2015年07期

4 胡川梅;陸明;邵泓;陳鋼;;SEC-MALLS法測定多糖相對分子量的不確定度分析[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2015年05期

5 韋少恒;;胰島素治療糖尿病的研究進展[J];中外醫(yī)學研究;2015年13期

6 楊冬梅;程景;丁伯平;黃幀檜;;磺酰脲類降糖藥在治療Ⅱ型糖尿病中的作用[J];醫(yī)學理論與實踐;2014年09期

7 劉阿娟;張靜;張化朋;張鵬;梁濤;;虎奶菇菌核多糖SHNP的分離純化及形貌觀測[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學刊);2013年18期

8 李競;毛拓華;;糖尿病微血管病變[J];微循環(huán)學雜志;2013年02期

9 趙玉萍;陳曉旺;沈鵬偉;;Box-Behnken實驗設(shè)計及響應面分析優(yōu)化錳過氧化物酶培養(yǎng)基條件[J];食品工業(yè)科技;2013年04期

10 呂寧;浦軍平;金鳳燮;魚紅閃;;麥冬多糖OPF-1的結(jié)構(gòu)分析[J];大連工業(yè)大學學報;2012年04期

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2 馬瑩;胰島素類似物Aspart30在2型糖尿病治療中的應用[D];吉林大學;2008年

3 張婭芳;麥冬多糖的結(jié)構(gòu)分析及其體外抗氧化活性研究[D];陜西師范大學;2007年

本文編號：2813149