牛肝菌(Boletus edulis)和羊肚菌(Morchella esculenta)均是經(jīng)典的藥食兩用真菌,根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,牛肝菌對(duì)體內(nèi)抗氧化作用具有積極意義,而羊肚菌則被證實(shí)對(duì)因酒精引起的急性胃黏膜損傷具有保護(hù)作用。本論文嘗試進(jìn)行牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物對(duì)肝保護(hù)活性的研究,并將其制備成牛肝菌和羊肚菌口服液。主要研究工作如下:首先,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期的工作結(jié)果,將牛肝菌與羊肚菌菌粉按照2:1的比例進(jìn)行混合制備復(fù)合水提取物。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中將復(fù)合水提取物中的多糖作為檢測(cè)指標(biāo)依據(jù),最終確定了牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物的最優(yōu)工藝結(jié)果為:溫度為80℃、熱水浴時(shí)間為2 h,料液比達(dá)到1:20 mgmL~(-1),并提取兩次,這時(shí)牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物的多糖提取得率達(dá)到最高。接著,又對(duì)牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物進(jìn)行進(jìn)一步成分測(cè)定,結(jié)果顯示提取物中還包括還原糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸、甘露醇等多種生物有效活性成分。在此基礎(chǔ)上,本論文初步探究了牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物對(duì)ALD的保護(hù)作用。通過(guò)使小鼠攝入大量酒精從而建立ALD模型,將水飛薊賓素作為陽(yáng)性對(duì)照得出牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物可以顯著降低由于酒精過(guò)量攝入而導(dǎo)致的ALT以及AST指標(biāo)的升高。隨后又進(jìn)行了氧化應(yīng)激相關(guān)水平的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)復(fù)合水提取物可以提升由于過(guò)量的酒精攝入而導(dǎo)致的抗氧化酶類SOD、GSH-P_X活性的降低。另外MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的重要產(chǎn)物之一,而TG水平的高低也是衡量肝功能的重要依據(jù)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)也可以發(fā)現(xiàn)復(fù)合水提取物的確可以使因酒精過(guò)量攝入而升高的指標(biāo)下降。從結(jié)果觀察,牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物不僅可以提高機(jī)體的抗氧化功能降低脂質(zhì)過(guò)氧化,還能改善肝細(xì)胞的損傷程度。最后,對(duì)復(fù)合水提取物口服液的制備進(jìn)行研究。確定最佳制備工藝為:10%的殼聚糖作為澄清劑,并在60℃的條件下設(shè)置攪拌速度為650 r/min,0.4 g/kg山梨酸鉀,濃度為3%的羥丙基-β-環(huán)糊精。此時(shí)口服液的外觀性狀都達(dá)到最好。根據(jù)口感評(píng)價(jià)確定了當(dāng)5%木糖醇的情況下時(shí)加入0.063 g檸檬酸的口味以及在5%砂糖的情況下加入0.077 g檸檬酸的口味大家覺得更適宜可口。另外又對(duì)口服液穩(wěn)定性做了考察,根據(jù)光照實(shí)驗(yàn)、室溫實(shí)驗(yàn)以及加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果,認(rèn)為復(fù)合水提取物口服液適宜在室溫或低溫避免光照的條件下進(jìn)行保存。本論文認(rèn)為牛肝菌和羊肚菌復(fù)合水提取物可以降低氧化因子含量,提高抗氧化作用從而抑制因酒精引起的脂質(zhì)過(guò)氧化,起到保肝效果。這一結(jié)果也將會(huì)為后續(xù)對(duì)牛肝菌與羊肚菌的活性功能評(píng)價(jià)的工作奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R943;R965
【部分圖文】：

心、嘔吐、行動(dòng)笨拙、語(yǔ)言表述含糊不清、步態(tài)不穩(wěn)等，如若嚴(yán)重還會(huì)引起昏迷、休克甚至死亡[4]。1.1.2 酒精性肝損傷發(fā)病機(jī)理酒精進(jìn)入到人體被吸收之后，被胃吸收一小部分，其余大部分酒精會(huì)被大腸吸收并通過(guò)門靜脈運(yùn)輸至肝臟進(jìn)行代謝[5]，如圖 1.1 所示。酒精的代謝主要有三種方式，第一種途徑也是最主要的是乙醇通過(guò)乙醇脫氫酶（ADH）分解成乙醛后再進(jìn)行水解消除；第二種途徑尤其是在酒精含量達(dá)到比較高濃度時(shí)，則涉及到微粒體乙醇氧化系統(tǒng)（MEOS）,其中還包括有細(xì)胞色素 P450 來(lái)參與代謝[6]；第三種途徑是由 Handler 等人建立通過(guò)過(guò)氧化氫酶（Catalase）進(jìn)行氧化分解[7]。這三種途徑的中間步驟都是將乙醇首先分解成乙醛，再通過(guò)乙醛脫氫酶（ALDH）來(lái)進(jìn)一步氧化分解成毒性較低的醋酸鹽。

配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2 g/L）：稱取 0.05 g 烘干后的無(wú)水葡萄糖，溶mL 容量瓶?jī)?nèi)并用水定容。將溶液充分混勻后精確稱取 10 mL，再用去離至 50 mL 后放置-4℃?zhèn)溆谩?3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL 和 1試管中，分別用去離子水將溶液定容至 1.0 mL。在避光的條件下向每各加入 5%的苯酚溶液 1.0 mL 和濃硫酸溶液 5.0 mL，混勻。靜置 10 m30 ℃水浴中冷卻。將測(cè)得的吸光度值于 490 nm 的波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度，并萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為橫坐標(biāo)，吸光度值做為縱坐標(biāo)，以此為依據(jù)繪制成圖，再根據(jù)計(jì)算得到線性回歸方程。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（c，mg/橫坐標(biāo)，以溶液 490 nm 處的吸光度（A）作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 2.1 所示。

圖 2.2 提取溫度對(duì)復(fù)合水提取物中多糖得率的影響 2.2 Effect of extraction temperature on yield of polysaccharides in composite water ext由圖 2.2 可以看出，當(dāng)固定水浴時(shí)間為 2 小時(shí)并超聲 15 min，料液比為mL-1，提取一次作為條件時(shí)，溫度在 60 ℃到 80 ℃內(nèi)提取濃度逐漸升高到 80℃之間迅速上升，在 80 ℃時(shí)達(dá)到最大值。而隨著溫度逐漸升高，反而降低。這可能是因溫度太高導(dǎo)致多糖的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)發(fā)生變化，致使降低。因此，確定 80 ℃為最佳提取溫度。.2 提取時(shí)間對(duì)復(fù)合水提取物中多糖得率的影響準(zhǔn)確稱取 1.0 g 混合菌粉，同樣使用去離子水作為溶劑，將在 80.0 ℃的進(jìn)行加熱并超聲 15 min，料液比為 1:20 mgmL-1作為條件。分別設(shè)置 0h、1.5 h、2.0 h、2.5 h 和 3.0 h 作為變量進(jìn)行檢測(cè)，提取一次。再根據(jù)吸復(fù)合水提取物中的多糖濃度并計(jì)算多糖的得率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖 2.3 所

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本文編號(hào)：2811709