【摘要】：隨著腫瘤發(fā)病率的逐年攀升,放射治療后引起的放射性腸損傷發(fā)病率也越來越高,目前對于急性放射性腸損傷的治療多采用綜合療法,相關藥物多無針對性及特異性,且療效欠佳,因此對于急性放射性腸損傷治療靶點和藥物的發(fā)現(xiàn)十分重要。已有研究表明,放射導致細胞凋亡是放射性腸炎形成的重要機制。小腸隱窩底部存在小腸干細胞,干細胞經(jīng)過大約3~5天即可分化成為小腸上皮其它所有細胞,隱窩干細胞和小腸上皮細胞對放射線十分敏感,受照射后,很快發(fā)生凋亡,阻斷或減少凋亡的發(fā)生有望成為急性放射性腸損傷的有效防治靶點。已有研究表明,胰高血糖素樣肽-2(Glucagon Like Peptide-2,GLP-2)可修復照射引起的急性放射性腸損傷,但本實驗前期發(fā)現(xiàn)照射后立即給予GLP-2,急性重度放射性腸損傷大鼠出現(xiàn)死亡時間早,死亡率高,表明單獨應用GLP-2治療效果差。caspase-3在凋亡過程中有非常重要的作用,Ac-DEVD-CHO化學結構中含有醛基,加入氧化劑后,醛基中的碳氫鍵斷裂,氧化劑中的氧原子分別與碳和氫組成8個電子的共價鍵,形成更穩(wěn)定的羧基,在體內更好發(fā)揮作用。因此本實驗采用GLP-2和caspase-3抑制劑Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用來探討其保護作用及機制。并通過GLP-2和caspase-3激動劑PAC-1聯(lián)合應用反證其作用。實驗方法:1.急性放射性腸損傷模型的建立大鼠麻醉后固定于自制木板上,暴露腹部,鉛磚屏蔽其他部位,~(60)Coγ射線進行全腹部單次照射,劑量15Gy,建立急性放射性腸損傷模型。IEC-6細胞株,采用~(60)Coγ射線進行照射,劑量10Gy,建立急性放射性腸損傷模型。2.GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷的保護作用研究Wistar雄性大鼠75只,隨機將其分為對照組(C組)、單純照射組(R組)、GLP-2組(G組)、GLP-2聯(lián)合激動劑PAC-1組(P組)和GLP-2聯(lián)合抑制劑Ac-DEVD-CHO組(D組)共5組,每組15只。于照射后立即分別給予生理鹽水溶液、GLP-2溶液、PAC-1溶液和Ac-DEVD-CHO溶液,實驗過程中對各組大鼠一般狀態(tài)、體重和死亡率詳細記錄。分別于照射后1d、3d、5d和14d活殺取材,記錄腸長度及腸重量。HE染色觀察空腸、十二指腸和回腸組織結構變化及空腸絨毛長度和隱窩深度,免疫組織化學法檢測空腸組織中Bmi-1的表達。選用IEC-6細胞株,照射前1h給予GLP-2溶液、PAC-1溶液和Ac-DEVD-CHO溶液,于照射后3h、6h和24h應用CCK8法檢測IEC-6細胞的增殖情況。3.GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷的機制研究采用原位末端標記、免疫印跡法檢測空腸組織中細胞凋亡和切割caspase-3、切割PARP-1的表達,IEC-6細胞照射后3h應用流式細胞儀檢測IEC-6細胞的凋亡情況。實驗結果:1.GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷的保護作用研究GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用可顯著提高照射后大鼠生存率:照射后R組在第10天開始出現(xiàn)死亡,死亡率15%,G組于照射后第4天出現(xiàn)死亡,P組于照射后第1天就出現(xiàn)死亡,死亡率最高,而D組無死亡。GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用可減輕照射后大鼠小腸組織損傷:照射后第1天,R組出現(xiàn)大量凋亡細胞,G組損傷較R組輕,P組損傷較R組重,D組在所有組中損傷最輕;照射后第3天,R組腸絨毛縮短、倒伏、缺失,G組絨毛損傷及長度變化較R組輕,D組在所有組中最輕,恢復最好。照射后第5天,R組腸絨毛損傷及長度有所恢復,G組較R組輕,P組較R組重,D組在所有組中最輕,恢復最好。照射后第14天,R組腸絨毛損傷及長度恢復至正常,G組較R組恢復好,P組恢復至正常,D組較C組、R組和P組恢復好GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用可減輕照射后大鼠空腸組織超微結構損傷:照射后第3天,R組出現(xiàn)凋亡細胞,微絨毛缺失,線粒體空化,嵴斷裂,G組損傷較R組輕,P組損傷較R組重,D組損傷最輕。GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用減少照射后大鼠空腸組織細胞凋亡:照射后第1天,R組凋亡細胞數(shù)顯著高于C組,G組凋亡細胞數(shù)低于R組,P組顯著高于R組,D組低于R組和P組,但高于G組;照射后第3天,R組凋亡細胞數(shù)顯著高于C組,G組低于R組,P組接近R組,D組顯著低于R組;照射后第5天,R組凋亡細胞數(shù)顯著高于C組,G組低于R組,P組高于R組,D組顯著低于R組;照射后第14天,R組凋亡細胞數(shù)高于C組,G組低于R組,P組低于R組,D組顯著低于R組。GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用增加照射后大鼠空腸組織中Bmi-1表達:照射后第1天,與C組比,R組Bmi-1的表達顯著降低;與R組比,G組顯著升高,D組顯著升高,G組和D組均顯著低于C組。照射后第3天,與C組比,R組Bmi-1的表達顯著降低;與R組比,G組顯著升高,D組顯著低于C組。照射后第5天,與C組比,R組降低;與R組比,D組顯著升高,P組顯著低于C組。照射后第14天,與C組比,R組降低;與R組比,D組組織中Bmi-1的表達顯著升高。GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用提高照射后IEC-6細胞增殖活力:照射后3h,與C組比,R組細胞增殖活力下降;與R組比,G組增殖活力顯著升高,P組增殖活力顯著降低,D組增殖活力顯著降低,P組和D組增殖活力也均低于C組。照射后6h,P組細胞增殖活力顯著低于C組和R組。照射后24h,與C組比,R組降低;與R組比,G組和P組均顯著降低,D組細胞增殖活力顯著升高,也顯著高于C組。2.GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷的機制研究GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對照射后大鼠空腸組織中切割caspase-3和切割PARP-1的表達有影響:照射后第1天,與C組比,R組空腸組織中切割caspase-3表達升高,D組表達顯著高于C組。照射后第3天,R組表達降低,G組、P組和D組表達顯著降低。照射后第14天,各組的表達無差異。照射后第1天,與C組比,R組空腸組織中切割PARP-1表達升高;與R組比,P組的表達顯著升高,D組的表達也顯著升高。照射后第3天,與C組比,R組的表達顯著升高。照射后第14天,P組的表達顯著高于R組。GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用減少照射后IEC-6細胞凋亡:照射后3h,與C組比,R組晚期凋亡率顯著升高;與R組比,G組顯著降低。照射后3h,與C組比,R組早期凋亡率顯著升高;與R組比,G組和D組均降低,但無統(tǒng)計學差異,P組高于R組。結論:1 GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷有保護作用,效果明顯優(yōu)于GLP-2單獨應用。2 GLP-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用可能通過降低cleaved caspase-3和cleaved PARP-1的表達起保護作用。
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉松濤;劉玉龍;;放射性腸損傷研究現(xiàn)狀[J];輻射防護通訊;2016年05期

2 許文;;間充質干細胞治療放射性腸損傷研究進展[J];中外醫(yī)學研究;2017年06期

3 吳畏難;劉軍;;腹部閉合性腸損傷術后腹部并發(fā)癥的臨床治療觀察[J];中國繼續(xù)醫(yī)學教育;2016年05期

4 姜宇;;腹部鈍性創(chuàng)傷繼發(fā)腸損傷的診斷延遲原因及其影響分析[J];基層醫(yī)學論壇;2015年17期

5 陳宇寧;曹輝瓊;張毅;;奧曲肽對胰腺炎相關性腹水所致腸損傷的療效觀察[J];中國處方藥;2014年06期

6 鄭志強;;63例醫(yī)源性腸損傷原因分析[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2006年03期

7 吳予平;趙發(fā);;閉合性腸損傷[J];河北醫(yī)學院學報;1987年05期

8 張鍔;盧先州;張樹友;;間充質干細胞在放射性腸損傷治療中的應用前景[J];社區(qū)醫(yī)學雜志;2015年02期

9 金威;易成建;李元軍;陳揚;;閉合性腸損傷術后腹部并發(fā)癥的分析與臨床研究[J];中國醫(yī)藥指南;2015年28期

10 龔國道;;腹部鈍性外傷繼發(fā)腸損傷的診斷延遲原因及其對預后的影響[J];臨床醫(yī)學;2014年04期

相關會議論文 前10條

1 高亞兵;彭瑞云;陳浩宇;馬俊杰;王德文;;小鼠全腸制片法及其在中子輻射致腸損傷中的應用[A];第十一屆中國體視學與圖像分析學術會議論文集[C];2006年

2 范霞;朱俊宇;楊雪;嚴軍;梁華平;;吳茱萸堿對酵母多糖誘導的腸損傷的保護作用[A];2015第十一屆全國中西醫(yī)結合災害醫(yī)學大會、江蘇省中西醫(yī)結合學會第二屆災害醫(yī)學學術會議、中華衛(wèi)生應急電子雜志第二屆編委會會議暨2015江蘇國際醫(yī)療器械科技博覽會學術論文集[C];2015年

3 杜利靜;劉佳蕙;馬辛;方捷;宋正梅;陳欣欣;相錕;崔陽冬;王艷雯;王海芳;;腸損傷對小鼠攝入納米氧化鋅的影響[A];中國毒理學會第六屆全國毒理學大會論文摘要[C];2013年

4 蘆惠;薛辛東;;基質金屬蛋白酶2，9在新生鼠腸損傷的動態(tài)表達及意義[A];浙江省醫(yī)學會圍產(chǎn)醫(yī)學分會成立大會暨“圍產(chǎn)醫(yī)學熱點問題”學術會議論文匯編[C];2008年

5 蘆惠;薛辛東;;表皮生長因子、轉化生長因子α及其受體在新生鼠腸損傷中的動態(tài)變化及意義[A];浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2005年

6 蘆惠;薛辛東;;基質金屬蛋白酶2，9在新生鼠腸損傷的動態(tài)表達及意義[A];2007年浙江省兒科學、小兒外科學學術年會論文匯編[C];2007年

7 何莎莎;高志民;余進;萬長榮;徐宵龍;郭世寧;許劍琴;;香葦二石口服液對熱應激大鼠空腸損傷的預防作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會中獸醫(yī)學分會2013年學術年會論文集[C];2013年

8 陳鳴艷;呂賓;陳漢卿;張爍;;實時熒光定量PCR檢測非甾體抗炎藥腸損傷小腸組織中PAR-2 mRNA的表達[A];第二十三屆全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2011年

9 趙效國;李莉;徐沛茹;黃暉;楊劍;;放射性腸損傷動物模型的建立[A];第四屆第二次中國毒理學會食品毒理專業(yè)委員會學術會議論文集[C];2006年

10 伊小婷;孫瑩杰;;α7nAChR激動劑對體外循環(huán)大鼠腸神經(jīng)膠質細胞的影響[A];2016中國中西醫(yī)結合麻醉學會[CSIA]年會暨第三屆全國中西醫(yī)結合麻醉學術研討會、河南省中西醫(yī)結合學會麻醉專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2016年

相關重要報紙文章 前1條

1 記者 譚嘉 實習記者 劉洋;早期腸內營養(yǎng)可減輕重癥患者腸損傷[N];健康報;2009年

相關博士學位論文 前8條

1 王永旺;程序性壞死在肝臟冷缺血再灌注誘發(fā)腸損傷的作用機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2018年

2 趙振國;經(jīng)腸道的抗生素預處理對小鼠急慢性放射性腸損傷的保護作用及其機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2018年

3 常鵬宇;脂肪間充質干細胞修復放射性腸損傷的實驗研究[D];吉林大學;2014年

4 王津晗;天然產(chǎn)物對急性放射性腸損傷的防護作用與抑制腫瘤干細胞標志物ALDH1A1作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2017年

5 吳建濃;急性腸損傷大鼠體內Ghrelin及受體的表達和電針干預作用的關聯(lián)[D];浙江中醫(yī)藥大學;2014年

6 熊玉霞;瀉心湯有效組分對重癥急性胰腺炎相關性腸/肺損傷的保護作用與機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2009年

7 焦麗;iPLA_2β對于ConA和DSS誘導的免疫性肝損傷和腸損傷的保護作用及其機制的研究[D];吉林大學;2016年

8 于杰;PI3K/AKT傳導通路抑制劑Wortmanin在重癥急性胰腺炎腸損傷中的作用及機制[D];武漢大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 王加宇;胰高血糖素樣肽-2和Ac-DEVD-CHO聯(lián)合應用對于急性放射性腸損傷的保護作用及其機制研究[D];河北北方學院;2019年

2 劉軒辰;多不飽和脂肪酸對放射性腸損傷的保護作用[D];吉林大學;2018年

3 谷蒙蒙;VND3207對小鼠放射性腸損傷的防護作用及其機制研究[D];蘇州大學;2018年

4 高志買;間充質干細胞高分子量分泌成分對輻射性腸損傷的修復作用[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

5 韓娟;大黃對新生鼠壞死性小腸結腸炎模型腸損傷防治作用的研究[D];南方醫(yī)科大學;2008年

6 王巖巖;四君子湯抗放射性腸損傷作用及其主要化學成分的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

7 任樂樂;腹腔鏡手術治療慢性放射性腸損傷并梗阻的回顧性隊列研究[D];南京大學;2014年

8 周歡;經(jīng)轉化生長因子-α刺激的骨髓間充質干細胞治療急性放射性腸損傷的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2013年

9 徐強;N-3多不飽和脂肪酸防治慢性放射性腸損傷的研究[D];蘇州大學;2009年

10 陳達威;γ-氨基丁酸對腸干細胞增殖分化的調節(jié)及在腸損傷中的保護作用的探究[D];山東大學;2016年

本文編號：2805028