【摘要】：目的:RP-1是一種晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)拮抗肽,體外試驗(yàn)表明其具有緩解Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性的功能。本論文探討以聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA)納米粒作為RP-1的載體,以穿膜肽TAT和腦靶向肽Angiopep-2修飾納米粒表面,構(gòu)建腦靶向載RP-1納米粒,為將RP-1用于阿爾茨海默癥(AD)治療的后續(xù)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:采用乳化溶媒蒸發(fā)法制備PLGA空白納米粒,對納米粒制備條件進(jìn)行單因素考察,進(jìn)而確定對納米粒粒徑有影響的4個(gè)因素,每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平,以納米粒粒徑為評價(jià)指標(biāo),建立四因素三水平正交表進(jìn)行正交試驗(yàn),通過極差分析確定納米粒的最佳制備工藝條件,并對最佳工藝進(jìn)行驗(yàn)證,測定空白納米粒(NP)的粒徑、Zeta電位和多分散系數(shù)(PdI)。以最佳制備工藝制備納米粒,通過透射電鏡(TEM)進(jìn)行形態(tài)觀察;對納米粒表面采用穿膜肽TAT和腦靶向肽Angiopep-2進(jìn)行修飾,得到TAT-NP和ANG-NP,采用總巰基檢測試劑盒分別測定穿膜肽TAT與腦靶向Angiopep-2的修飾效率,并對修飾后的納米粒進(jìn)行表征,測定其粒徑和Zeta電位。建立香豆素-6的HPLC分析方法,采用離心取樣法測定載香豆素-6納米粒(Cou-6/NP)的包封率(Entrapping efficiency,EE)和載藥量(Drug loading capacity,DLC),并測定納米粒48 h內(nèi)體外釋放特性;建立RP-1的HPLC體外分析方法,測定載RP-1納米粒(RP-1/NP)的包封率(EE)和載藥量(DLC);制備NP、TAT-NP、ANG-NP、TAT/ANG-NP四種納米粒,CCK-8法考察納米粒對腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(b.End3細(xì)胞)的體外毒性。制備載近紅外染料Di R的納米粒(Di R/NP),考察Di R不同投藥量對Di R/NP包封率(EE)和載藥量(DLC)的影響;采用離心取樣法考察48 h內(nèi)Di R/NP的體外釋放特性;選擇C57BL/6小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,分別等劑量尾靜脈注射Di R/NP、ANG-Di R/NP和TAT/ANG-Di R/NP三種不同納米粒,活體熒光成像考察1 h后不同納米粒入腦情況。結(jié)果:PLGA-PEG-Mal和PLGA-Me PEG的總量、超聲時(shí)間、分散相膽酸鈉溶液的濃度以及內(nèi)水相膽酸鈉溶液的濃度對納米粒的粒徑具有不同程度的影響;通過正交試驗(yàn)進(jìn)行條件優(yōu)化,最佳工藝條件制備所得的納米粒粒徑為142.8 nm,Zeta電位為-11.93 m V,多分散系數(shù)(Pd I)為0.161。對納米粒進(jìn)行形態(tài)觀察,在透射電鏡下,納米粒大小均一,外觀圓整;TAT-NP和ANG-NP的修飾率分別為65.4%和71.1%;經(jīng)修飾后的納米粒,表面Zeta電位發(fā)生了變化。制備Cou-6/NP、TAT-Cou-6/NP和ANG-Cou-6/NP三種納米粒,得到納米粒的包封率分別為38.210%、27.311%和38.377%,載藥量分別為0.229%、0.164%和0.230%;測定納米粒48 h內(nèi)體外釋藥特性,結(jié)果香豆素-6在48 h內(nèi)的累積釋放率小于8%;制備載RP-1的納米粒,其包封率為33.847%,載藥量為0.847%;通過CCK-8法考察NP、TAT-NP、ANG-NP、TAT/ANG-NP四種納米粒的體外細(xì)胞毒性,納米粒在12.5-800μg/ml的濃度范圍內(nèi)基本無細(xì)胞毒性。按照不同Di R投藥量制備Di R/NP,結(jié)果表明在投藥量為2%時(shí),載藥量和包封率均較大;對Di R/NP的體外釋藥特性進(jìn)行考察,在48 h內(nèi),Di R/NP的累積釋放率約為30%;通過活體熒光成像實(shí)驗(yàn)觀察Di R/NP、ANG-Di R/NP和TAT/ANG-Di R/NP在給藥1 h時(shí)的入腦情況,結(jié)果在1 h時(shí),三種納米粒的入腦量分別為TAT/ANG-Di R/NPANG-Di R/NPDi R/NP。結(jié)論:1.通過單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)對納米粒的制備工藝條件進(jìn)行篩選,納米粒的最佳制備工藝條件是:內(nèi)水相中膽酸鈉濃度為1.5%,PLGA-Me PEG與PLGA-PEG-Mal總用量為5 mg,PLGA-PEG-Mal與Me PEG-PLGA比例為1:9,分散相膽酸鈉濃度為0.1%。2.采用TAT和Angiopep-2對納米粒成功進(jìn)行表面修飾,修飾率分別為65.4%和71.1%。3.單位時(shí)間內(nèi)載藥納米粒的累積釋放率較低,其穩(wěn)定性較好。4.在12.5-800μg/ml的濃度范圍內(nèi)無細(xì)胞毒性,制備所得的納米�？梢宰鳛榘踩哪X靶向藥物載體。5.經(jīng)TAT和Angiopep-2修飾的納米粒腦靶向性能較好,適合作為藥物腦靶向遞送的載體。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R943
【圖文】：

PLGA的水解Fig2ThehydrolysisofPLGA

圖 1 聚乳酸羥基乙酸共聚物的結(jié)構(gòu) Polylactide-glycolic acid copolymer stru圖 2 PLGA 的水解Fig 2 The hydrolysis of PLGA，刺激性小，毒副作用小。PLGA透過性和靶向性，可保護(hù)被包封的體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)行為和組織分布。具有諸多優(yōu)點(diǎn)，然而，對于未經(jīng)修局限。PLGA 納米粒表面所帶有的

暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文表 8 最佳工藝驗(yàn)證結(jié)果Tab 8. The result of authenticate test. Particle size/nm Particle size distribution Index（PDI） Zeta（140.1 0.209 -11.146.6 0.128 -11.141.6 0.147 -12SD 142.8±3.40 0.161±0.042 -11.93結(jié)果最佳工藝條件制備得到的納米粒粒徑分布區(qū)間窄，集中分布在 90內(nèi)，平均粒徑為 142.8 nm，平均 Zeta 電位為-11.93 mV，平均多分散系數(shù)（P.161。

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本文編號(hào)：2805216