【摘要】：目的:RP-1是一種晚期糖基化終末產物受體(RAGE)拮抗肽,體外試驗表明其具有緩解Aβ誘導的神經(jīng)細胞毒性的功能。本論文探討以聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA)納米粒作為RP-1的載體,以穿膜肽TAT和腦靶向肽Angiopep-2修飾納米粒表面,構建腦靶向載RP-1納米粒,為將RP-1用于阿爾茨海默癥(AD)治療的后續(xù)研究提供實驗基礎。方法:采用乳化溶媒蒸發(fā)法制備PLGA空白納米粒,對納米粒制備條件進行單因素考察,進而確定對納米粒粒徑有影響的4個因素,每個因素設定3個水平,以納米粒粒徑為評價指標,建立四因素三水平正交表進行正交試驗,通過極差分析確定納米粒的最佳制備工藝條件,并對最佳工藝進行驗證,測定空白納米粒(NP)的粒徑、Zeta電位和多分散系數(shù)(PdI)。以最佳制備工藝制備納米粒,通過透射電鏡(TEM)進行形態(tài)觀察;對納米粒表面采用穿膜肽TAT和腦靶向肽Angiopep-2進行修飾,得到TAT-NP和ANG-NP,采用總巰基檢測試劑盒分別測定穿膜肽TAT與腦靶向Angiopep-2的修飾效率,并對修飾后的納米粒進行表征,測定其粒徑和Zeta電位。建立香豆素-6的HPLC分析方法,采用離心取樣法測定載香豆素-6納米粒(Cou-6/NP)的包封率(Entrapping efficiency,EE)和載藥量(Drug loading capacity,DLC),并測定納米粒48 h內體外釋放特性;建立RP-1的HPLC體外分析方法,測定載RP-1納米粒(RP-1/NP)的包封率(EE)和載藥量(DLC);制備NP、TAT-NP、ANG-NP、TAT/ANG-NP四種納米粒,CCK-8法考察納米粒對腦血管內皮細胞(b.End3細胞)的體外毒性。制備載近紅外染料Di R的納米粒(Di R/NP),考察Di R不同投藥量對Di R/NP包封率(EE)和載藥量(DLC)的影響;采用離心取樣法考察48 h內Di R/NP的體外釋放特性;選擇C57BL/6小鼠為實驗動物,分別等劑量尾靜脈注射Di R/NP、ANG-Di R/NP和TAT/ANG-Di R/NP三種不同納米粒,活體熒光成像考察1 h后不同納米粒入腦情況。結果:PLGA-PEG-Mal和PLGA-Me PEG的總量、超聲時間、分散相膽酸鈉溶液的濃度以及內水相膽酸鈉溶液的濃度對納米粒的粒徑具有不同程度的影響;通過正交試驗進行條件優(yōu)化,最佳工藝條件制備所得的納米粒粒徑為142.8 nm,Zeta電位為-11.93 m V,多分散系數(shù)(Pd I)為0.161。對納米粒進行形態(tài)觀察,在透射電鏡下,納米粒大小均一,外觀圓整;TAT-NP和ANG-NP的修飾率分別為65.4%和71.1%;經(jīng)修飾后的納米粒,表面Zeta電位發(fā)生了變化。制備Cou-6/NP、TAT-Cou-6/NP和ANG-Cou-6/NP三種納米粒,得到納米粒的包封率分別為38.210%、27.311%和38.377%,載藥量分別為0.229%、0.164%和0.230%;測定納米粒48 h內體外釋藥特性,結果香豆素-6在48 h內的累積釋放率小于8%;制備載RP-1的納米粒,其包封率為33.847%,載藥量為0.847%;通過CCK-8法考察NP、TAT-NP、ANG-NP、TAT/ANG-NP四種納米粒的體外細胞毒性,納米粒在12.5-800μg/ml的濃度范圍內基本無細胞毒性。按照不同Di R投藥量制備Di R/NP,結果表明在投藥量為2%時,載藥量和包封率均較大;對Di R/NP的體外釋藥特性進行考察,在48 h內,Di R/NP的累積釋放率約為30%;通過活體熒光成像實驗觀察Di R/NP、ANG-Di R/NP和TAT/ANG-Di R/NP在給藥1 h時的入腦情況,結果在1 h時,三種納米粒的入腦量分別為TAT/ANG-Di R/NPANG-Di R/NPDi R/NP。結論:1.通過單因素試驗及正交試驗對納米粒的制備工藝條件進行篩選,納米粒的最佳制備工藝條件是:內水相中膽酸鈉濃度為1.5%,PLGA-Me PEG與PLGA-PEG-Mal總用量為5 mg,PLGA-PEG-Mal與Me PEG-PLGA比例為1:9,分散相膽酸鈉濃度為0.1%。2.采用TAT和Angiopep-2對納米粒成功進行表面修飾,修飾率分別為65.4%和71.1%。3.單位時間內載藥納米粒的累積釋放率較低,其穩(wěn)定性較好。4.在12.5-800μg/ml的濃度范圍內無細胞毒性,制備所得的納米�？梢宰鳛榘踩哪X靶向藥物載體。5.經(jīng)TAT和Angiopep-2修飾的納米粒腦靶向性能較好,適合作為藥物腦靶向遞送的載體。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943
【圖文】：

PLGA的水解Fig2ThehydrolysisofPLGA

圖 1 聚乳酸羥基乙酸共聚物的結構 Polylactide-glycolic acid copolymer stru圖 2 PLGA 的水解Fig 2 The hydrolysis of PLGA，刺激性小，毒副作用小。PLGA透過性和靶向性，可保護被包封的體內的動力學行為和組織分布。具有諸多優(yōu)點，然而，對于未經(jīng)修局限。PLGA 納米粒表面所帶有的

暨南大學碩士學位論文表 8 最佳工藝驗證結果Tab 8. The result of authenticate test. Particle size/nm Particle size distribution Index（PDI） Zeta（140.1 0.209 -11.146.6 0.128 -11.141.6 0.147 -12SD 142.8±3.40 0.161±0.042 -11.93結果最佳工藝條件制備得到的納米粒粒徑分布區(qū)間窄，集中分布在 90內，平均粒徑為 142.8 nm，平均 Zeta 電位為-11.93 mV，平均多分散系數(shù)（P.161。

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本文編號：2805216