【摘要】：隨著動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis,AS)發(fā)病率及死亡率逐年增高,經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈支架置入術(shù)成為治療史上的一大突破,現(xiàn)已成為治療AS的常規(guī)手段。介入術(shù)后3個(gè)月內(nèi)20%左右的支架內(nèi)再狹窄(in-stent restenosis,ISR)率可導(dǎo)致其它不良心血管事件發(fā)生,藥物涂層支架(drug-eluting stents,DES)的廣泛應(yīng)用使ISR率有所下降,但10%~20%的ISR率仍然是制約DES置入后臨床效果的主要因素。國(guó)內(nèi)外上市的DES攜帶的涂層藥物主要為紫杉醇和雷帕霉素,二者均通過(guò)抑制平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)過(guò)度增殖而預(yù)防ISR。然而,這兩種藥物是否會(huì)通過(guò)引發(fā)支架置入處炎癥反應(yīng)而影響SMC功能并由此導(dǎo)致ISR形成目前尚不清楚。本論文以人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(human arterial smooth muscle cell,HA-VSMC)為細(xì)胞模型,采用細(xì)胞生物學(xué)、ELISA、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù),對(duì)DES涂層藥物是否影響SMC功能進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)主要包括:1)使用不同濃度氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)誘導(dǎo)HA-VSMC不同時(shí)間,確定建立AS體外細(xì)胞模型最佳誘導(dǎo)條件;2)檢測(cè)不同濃度DES涂層藥物作用后,AS體外細(xì)胞模型炎性細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞增殖能力;3)抗體干預(yù)法降低炎性細(xì)胞因子表達(dá),并檢測(cè)其對(duì)DES涂層藥物作用下的AS體外細(xì)胞模型增殖能力影響,從而分析基于SMC的ISR形成機(jī)制。主要得到以下研究結(jié)果:1)不同濃度ox-LDL誘導(dǎo)HA-VSMC不同時(shí)間,通過(guò)檢測(cè)總膽固醇含量、膽固醇酯含量和生長(zhǎng)活力發(fā)現(xiàn),20μg/mL ox-LDL誘導(dǎo)細(xì)胞48h,細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯/總膽固醇超過(guò)50%,且此時(shí)細(xì)胞處于活力較高的增殖期,因此可作為建立AS體外細(xì)胞模型的最佳誘導(dǎo)時(shí)間和濃度。2)DES涂層藥物可引發(fā)并加重炎癥反應(yīng)并導(dǎo)致SMC異常增殖。DES涂層藥物紫杉醇和雷帕霉素作用下的AS體外細(xì)胞模型,促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)顯著增加(隨藥物濃度增加逐漸升高),抑炎性細(xì)胞因子IL-10、IL-35、TGF-β表達(dá)顯著降低(隨著藥物濃度增加逐漸降低);在涂層藥物濃度增至1μg/ml時(shí),細(xì)胞增殖能力降至最低點(diǎn),卻仍高于正常SMC。3)人為干擾炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平后檢測(cè)AS體外細(xì)胞模型增殖能力發(fā)現(xiàn),IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β為置入DES后引發(fā)ISR的潛在直接因子;紫杉醇通過(guò)增加促炎因子IL-6、TNF-α和降低抑炎因子IL-10、TGF-β的表達(dá)使SMC異常增殖;雷帕霉素通過(guò)增加促炎因子IL-6、IL-1β和降低抑炎因子IL-10、TGF-β的表達(dá)使SMC異常增殖。DES涂層藥物紫杉醇和雷帕霉素可引發(fā)并加重病態(tài)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),并由此導(dǎo)致SMC異常增殖,由此表明支架涂層藥物可能會(huì)通過(guò)引發(fā)并加重支架置入處炎癥反應(yīng)而引起ISR。這與ISR發(fā)生機(jī)制密切相關(guān),并可能提示了ISR發(fā)生的潛在機(jī)制。本研究結(jié)果揭示了早期抗炎治療有益于DES置入后臨床效果和預(yù)后,并提供潛在ISR治療靶點(diǎn),對(duì)ISR防治具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96
【圖文】：

圖 1- 1 支架置入后 ISR 發(fā)生概述Figure 1-1 The overview of ISR after stent placement.3 對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化支架內(nèi)再狹窄預(yù)防的探索研究發(fā)現(xiàn)不同的支架置入后（包括 BMS 和不同藥物涂層的 DES），ISR 發(fā)生間和程度有明顯差別，但目前對(duì)存在差別的原因仍不甚清楚。有學(xué)者認(rèn)為，S 或 DES 置入后不同的病理修復(fù)過(guò)程導(dǎo)致了 ISR 形成時(shí)間與程度差別。BMS后會(huì)出現(xiàn)三個(gè)時(shí)期生物反應(yīng)：早期 ISR（6 個(gè)月以內(nèi)）、中期 ISR 緩解（6 個(gè)3 月）、晚期血管腔 ISR 復(fù)發(fā)（4 年以后）[76]。BMS 置入初期，血管壁會(huì)形成較厚的新生內(nèi)膜，造成一定程度上的管腔丟失；隨著時(shí)間的增加，血管會(huì)進(jìn)膜重建和細(xì)胞外基質(zhì)重吸收的中期修復(fù)階段，減輕早期由內(nèi)膜增生和管腔丟致的 ISR；隨著時(shí)間的進(jìn)一步推進(jìn)，支架內(nèi)形成纖維增生和 ISNA，從而使 再次發(fā)生。而與此不同的是 DES 置入后血管生理反應(yīng)和修復(fù)模式。DES 置

圖 2- 1 第二章實(shí)驗(yàn)方案Figure 2-1 experimental scheme實(shí)驗(yàn)試劑與材料表 2- 1 實(shí)驗(yàn)試劑與材料Table 2-1 experiment reagent and meterial試劑與材料 來(lái)源SMC清酶鏈霉素雙抗M/F12 培養(yǎng)基昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原微生物實(shí)驗(yàn)室SigmaSigmaHyCloneHyClone四川西隴化工有限公司

x-LDL 誘導(dǎo)不同時(shí)間 HA-VSMC 內(nèi) TC 含量變化s in the total cholesterol content of HA-VSMC from different time of L induction過(guò)程中，CE 的積累起著不可忽視的作用，因此進(jìn)一步檢出 CE 含量。與 TC 含量結(jié)果相似的是，與對(duì)照組相比，μg/ml、20μg/ml）誘導(dǎo) HA-VSMC 不同時(shí)間（36h、48h、60使 FC 含量下降，CE 含量大幅增加（P<0.05），并與時(shí)間、圖 2-5）。

【參考文獻(xiàn)】

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1 韓雅玲;梁明;康建;齊巖梅;;雌激素洗脫支架植入兔腹主動(dòng)脈對(duì)內(nèi)膜增生及內(nèi)皮化的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2005年06期

本文編號(hào)：2804874