【摘要】：鋁(aluminum,Al)具有神經(jīng)毒性,過(guò)量攝入可引起神經(jīng)系統(tǒng)損傷,導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是鋁神經(jīng)毒性的病理基礎(chǔ)和核心機(jī)制。前期掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)貫葉金絲桃素(hyperforin,HF)可顯著減少Al暴露PC12細(xì)胞表面凋亡小體的形成和細(xì)胞膜完整度下降,故提出HF通過(guò)抑制氧化應(yīng)激和神經(jīng)細(xì)胞凋亡來(lái)緩解鋁神經(jīng)毒性的假說(shuō)。本試驗(yàn)選用PC12細(xì)胞為研究對(duì)象,用梯度濃度HF處理PC12細(xì)胞,并設(shè)不同時(shí)間,通過(guò)細(xì)胞活性試驗(yàn),篩選出HF干預(yù)實(shí)驗(yàn)的最佳劑量和時(shí)間;而后用最適濃度(1μM)的HF預(yù)處理PC12細(xì)胞12 h,再加500μM Al-malt,作用48 h,建立HF干預(yù)Al-malt暴露的PC12細(xì)胞模型。試驗(yàn)共設(shè)4組,即對(duì)照組(C組)、染麥芽酚鋁組(500μM Al-malt)、HF干預(yù)組(500μM Al-malt+1μM HF)和HF組(1μM),通過(guò)觀測(cè)PC12細(xì)胞的活力、LDH釋放量和細(xì)胞形態(tài),氧化與抗氧化狀態(tài)(ROS和MDA水平、SOD和GSH-Px活性),細(xì)胞凋亡(細(xì)胞凋亡率,MMP,Cyt-c蛋白表達(dá),Caspase-3活性,Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA表達(dá)),驗(yàn)證HF對(duì)鋁暴露PC12細(xì)胞氧化損傷和凋亡的保護(hù)作用,并闡明其相關(guān)機(jī)制,為鋁神經(jīng)毒性的解除研究提供理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)染鋁組PC12細(xì)胞活力顯著低于對(duì)照組(p0.01),LDH釋放量顯著高于對(duì)照組(p0.01);HF干預(yù)組PC12細(xì)胞活力顯著高于染鋁組(p0.01),LDH釋放量顯著低于染鋁組(p0.01);HF組與對(duì)照組相比PC12細(xì)胞活力和LDH釋放量無(wú)顯著差異,表明HF可緩解鋁誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷,且HF對(duì)PC12細(xì)胞無(wú)毒性作用。(2)掃描電鏡觀察可見(jiàn),對(duì)照組和HF組PC12細(xì)胞生長(zhǎng)良好,呈星形或金字塔形,細(xì)胞間連接完整;染鋁組PC12細(xì)胞變圓,細(xì)胞體收縮,細(xì)胞膜完整性喪失,細(xì)胞表面形成凋亡小體;HF干預(yù)組PC12細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞間連接恢復(fù)正常,且凋亡小體減少,表明HF可緩解鋁誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞形態(tài)損傷。(3)染鋁組PC12細(xì)胞ROS和MDA水平顯著高于對(duì)照組(p0.01),SOD和GSH-px活性顯著低于對(duì)照組(p0.01);而HF干預(yù)組PC12細(xì)胞ROS和MDA水平顯著低于染鋁組(p0.01),SOD和GSH-Px活性顯著高于染鋁組(p0.01),表明HF可緩解鋁誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。(4)染鋁組PC12細(xì)胞凋亡率、Cyt-c蛋白表達(dá)量、Capsase-3活性及Bax、Bcl-2和Caspase-3mRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(p0.01),MMP顯著低于對(duì)照組(p0.01);而HF干預(yù)組PC12細(xì)胞凋亡率、Cyt-c蛋白表達(dá)量、Capsase-3活性及Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA表達(dá)量顯著低于染鋁組(p0.01),MMP顯著高于染鋁組(p0.01),表明HF可有效緩解鋁誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡。上述結(jié)果說(shuō)明,HF可有效緩解鋁誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷和凋亡,研究結(jié)果可為緩解鋁的神經(jīng)毒性提供理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R99
【圖文】：

9圖 2-1 技術(shù)路線(xiàn)圖Fig. 2-1 Experimental design roadmap麥芽酚鋁溶液配置l-malt 溶液的配制：依據(jù)李偉慶的方法進(jìn)行配制，將 AlCl3配制成濃度為 20 mm，將 Maltolate 配置成終濃度為 60 mmol/L 的水溶液，隨后將兩種溶液等體積混為 10 mmol/L 的 Al-malt 溶液，用 NaHCO3調(diào)溶液 pH 到 7.4，并用 0.22 μm 濾濾滅菌，Al-malt 溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配，全程用滅菌超純水配制溶液[137]。PC12 細(xì)胞培養(yǎng) PC12 細(xì)胞培養(yǎng)于含有 10%胎牛血清、100 IU mL-1青霉素和 100 IU mL-1鏈M 培養(yǎng)基中，于 37℃、飽和濕度及 5% CO2濃度培養(yǎng)，隔日換液，2~3 d 傳代一

注：“**”表示與對(duì)照組相比差異極顯著（p<0.01）。Note: ** indicates extremely significant difference from the corresponding control (p<0.01)圖 3-1 Al-malt 對(duì) PC12 細(xì)胞活力的影響Fig. 3-1 The effects of Al-malt on PC12 cells viability“**”表示與對(duì)照組相比差異極顯著（p<0.01）；“##”表示與染鋁組相比差異極顯著（p<0: ** indicates extremely significant difference from the corresponding control (p<0.01), ## inextremely significant difference from the corresponding control (p<0.01).

3.4 HF 對(duì) Al-malt 處理 PC12 細(xì)胞形態(tài)的影響掃描電鏡觀察可見(jiàn)，對(duì)照組 PC12 細(xì)胞生長(zhǎng)良好，呈星形或金字塔形，細(xì)胞間連接完整（圖 3-5）。Al-malt 組 PC12 細(xì)胞變圓，細(xì)胞體收縮，細(xì)胞膜完整性喪失，細(xì)胞表面形成氣泡樣結(jié)構(gòu)，即凋亡小體（箭頭所示）（圖 3-6）。HF 干預(yù)組與 Al-malt 組相比，PC12 細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞間連接恢復(fù)正常，且凋亡小體減少（圖 3-7）。HF 組與對(duì)照組相似，無(wú)顯著變化（圖3-8）。

【參考文獻(xiàn)】

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1 本刊訊;;治療帕金森病的腦部植入器械[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)進(jìn)展;2015年02期

2 汪范君;;國(guó)家禁止膨化食品使用含鋁食品添加劑[J];烹調(diào)知識(shí);2014年11期

3 辛林偉;唐際存;李朝旭;王梨明;;金屬顆粒引起人單核細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平變化研究[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年08期

4 喬夢(mèng);劉萍;任曉菲;張震;馮彤;;�；撬釋�(duì)鋁染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的保護(hù)作用[J];環(huán)境與健康雜志;2014年05期

5 張勤麗;教霞;徐麗;李娜;牛僑;;Caspase-3 shRNA對(duì)染鋁神經(jīng)細(xì)胞凋亡的干預(yù)[J];毒理學(xué)雜志;2012年04期

6 梁春穗;胡曙光;王晶;李海;;食品中鋁的分析方法改進(jìn)及在風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用[J];中國(guó)食品衛(wèi)生雜志;2012年02期

7 郁軍超;薛連璧;;機(jī)體ROS的產(chǎn)生及對(duì)生物大分子的毒性作用[J];山東醫(yī)藥;2012年08期

8 吳陽(yáng)欣蔚;劉萍;;去鐵酮對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中甘氨酸和γ-氨基丁酸及鋁和必需元素的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2012年02期

9 焦俊霞;高維娟;;Bcl-2、Bax和Cyt-c在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2011年24期

10 楊芳;谷薇薇;;姜黃素對(duì)三氯化鋁所致大鼠神經(jīng)損傷的保護(hù)效應(yīng)[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2011年05期

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1 溫曉薇;陳歡直;解軍;;ROS在干細(xì)胞中的作用[A];第五屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2015年

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1 曹崢;貫葉連翹提取物對(duì)三氯化鋁暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護(hù)作用及機(jī)制[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 王慶利;幾種天然化合物的神經(jīng)保護(hù)作用及其作用機(jī)理研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

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1 莊翠翠;鋁通過(guò)HPA軸激活NF-κB調(diào)控大鼠脾臟淋巴細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 李歡;納米氧化鋁顆粒對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 施薇;催化活化氧氣產(chǎn)生高活性自由基體系的構(gòu)建及其效能研究[D];武漢紡織大學(xué);2015年

4 禚金花;DFP對(duì)鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎組織保護(hù)作用的機(jī)理研究[D];山東大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2795444