【摘要】：鋁(aluminum,Al)具有神經(jīng)毒性,過量攝入可引起神經(jīng)系統(tǒng)損傷,導致神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。氧化應激和細胞凋亡被認為是鋁神經(jīng)毒性的病理基礎和核心機制。前期掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)貫葉金絲桃素(hyperforin,HF)可顯著減少Al暴露PC12細胞表面凋亡小體的形成和細胞膜完整度下降,故提出HF通過抑制氧化應激和神經(jīng)細胞凋亡來緩解鋁神經(jīng)毒性的假說。本試驗選用PC12細胞為研究對象,用梯度濃度HF處理PC12細胞,并設不同時間,通過細胞活性試驗,篩選出HF干預實驗的最佳劑量和時間;而后用最適濃度(1μM)的HF預處理PC12細胞12 h,再加500μM Al-malt,作用48 h,建立HF干預Al-malt暴露的PC12細胞模型。試驗共設4組,即對照組(C組)、染麥芽酚鋁組(500μM Al-malt)、HF干預組(500μM Al-malt+1μM HF)和HF組(1μM),通過觀測PC12細胞的活力、LDH釋放量和細胞形態(tài),氧化與抗氧化狀態(tài)(ROS和MDA水平、SOD和GSH-Px活性),細胞凋亡(細胞凋亡率,MMP,Cyt-c蛋白表達,Caspase-3活性,Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA表達),驗證HF對鋁暴露PC12細胞氧化損傷和凋亡的保護作用,并闡明其相關機制,為鋁神經(jīng)毒性的解除研究提供理論依據(jù)。試驗結(jié)果如下:(1)染鋁組PC12細胞活力顯著低于對照組(p0.01),LDH釋放量顯著高于對照組(p0.01);HF干預組PC12細胞活力顯著高于染鋁組(p0.01),LDH釋放量顯著低于染鋁組(p0.01);HF組與對照組相比PC12細胞活力和LDH釋放量無顯著差異,表明HF可緩解鋁誘導的PC12細胞損傷,且HF對PC12細胞無毒性作用。(2)掃描電鏡觀察可見,對照組和HF組PC12細胞生長良好,呈星形或金字塔形,細胞間連接完整;染鋁組PC12細胞變圓,細胞體收縮,細胞膜完整性喪失,細胞表面形成凋亡小體;HF干預組PC12細胞形態(tài)和細胞間連接恢復正常,且凋亡小體減少,表明HF可緩解鋁誘導的PC12細胞形態(tài)損傷。(3)染鋁組PC12細胞ROS和MDA水平顯著高于對照組(p0.01),SOD和GSH-px活性顯著低于對照組(p0.01);而HF干預組PC12細胞ROS和MDA水平顯著低于染鋁組(p0.01),SOD和GSH-Px活性顯著高于染鋁組(p0.01),表明HF可緩解鋁誘導的氧化應激。(4)染鋁組PC12細胞凋亡率、Cyt-c蛋白表達量、Capsase-3活性及Bax、Bcl-2和Caspase-3mRNA表達量顯著高于對照組(p0.01),MMP顯著低于對照組(p0.01);而HF干預組PC12細胞凋亡率、Cyt-c蛋白表達量、Capsase-3活性及Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA表達量顯著低于染鋁組(p0.01),MMP顯著高于染鋁組(p0.01),表明HF可有效緩解鋁誘導的PC12細胞凋亡。上述結(jié)果說明,HF可有效緩解鋁誘導的PC12細胞氧化損傷和凋亡,研究結(jié)果可為緩解鋁的神經(jīng)毒性提供理論基礎和試驗依據(jù)。
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R99
【圖文】：

9圖 2-1 技術路線圖Fig. 2-1 Experimental design roadmap麥芽酚鋁溶液配置l-malt 溶液的配制：依據(jù)李偉慶的方法進行配制，將 AlCl3配制成濃度為 20 mm，將 Maltolate 配置成終濃度為 60 mmol/L 的水溶液，隨后將兩種溶液等體積混為 10 mmol/L 的 Al-malt 溶液，用 NaHCO3調(diào)溶液 pH 到 7.4，并用 0.22 μm 濾濾滅菌，Al-malt 溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配，全程用滅菌超純水配制溶液[137]。PC12 細胞培養(yǎng) PC12 細胞培養(yǎng)于含有 10%胎牛血清、100 IU mL-1青霉素和 100 IU mL-1鏈M 培養(yǎng)基中，于 37℃、飽和濕度及 5% CO2濃度培養(yǎng)，隔日換液，2~3 d 傳代一

注：“**”表示與對照組相比差異極顯著（p<0.01）。Note: ** indicates extremely significant difference from the corresponding control (p<0.01)圖 3-1 Al-malt 對 PC12 細胞活力的影響Fig. 3-1 The effects of Al-malt on PC12 cells viability“**”表示與對照組相比差異極顯著（p<0.01）；“##”表示與染鋁組相比差異極顯著（p<0: ** indicates extremely significant difference from the corresponding control (p<0.01), ## inextremely significant difference from the corresponding control (p<0.01).

3.4 HF 對 Al-malt 處理 PC12 細胞形態(tài)的影響掃描電鏡觀察可見，對照組 PC12 細胞生長良好，呈星形或金字塔形，細胞間連接完整（圖 3-5）。Al-malt 組 PC12 細胞變圓，細胞體收縮，細胞膜完整性喪失，細胞表面形成氣泡樣結(jié)構(gòu)，即凋亡小體（箭頭所示）（圖 3-6）。HF 干預組與 Al-malt 組相比，PC12 細胞形態(tài)和細胞間連接恢復正常，且凋亡小體減少（圖 3-7）。HF 組與對照組相似，無顯著變化（圖3-8）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 本刊訊;;治療帕金森病的腦部植入器械[J];生物醫(yī)學工程學進展;2015年02期

2 汪范君;;國家禁止膨化食品使用含鋁食品添加劑[J];烹調(diào)知識;2014年11期

3 辛林偉;唐際存;李朝旭;王梨明;;金屬顆粒引起人單核細胞內(nèi)氧化應激水平變化研究[J];醫(yī)學研究生學報;2014年08期

4 喬夢;劉萍;任曉菲;張震;馮彤;;�；撬釋︿X染毒大鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)的保護作用[J];環(huán)境與健康雜志;2014年05期

5 張勤麗;教霞;徐麗;李娜;牛僑;;Caspase-3 shRNA對染鋁神經(jīng)細胞凋亡的干預[J];毒理學雜志;2012年04期

6 梁春穗;胡曙光;王晶;李海;;食品中鋁的分析方法改進及在風險監(jiān)測中的應用[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2012年02期

7 郁軍超;薛連璧;;機體ROS的產(chǎn)生及對生物大分子的毒性作用[J];山東醫(yī)藥;2012年08期

8 吳陽欣蔚;劉萍;;去鐵酮對鋁染毒大鼠腦組織中甘氨酸和γ-氨基丁酸及鋁和必需元素的影響[J];環(huán)境與健康雜志;2012年02期

9 焦俊霞;高維娟;;Bcl-2、Bax和Cyt-c在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中作用機制的研究進展[J];中國老年學雜志;2011年24期

10 楊芳;谷薇薇;;姜黃素對三氯化鋁所致大鼠神經(jīng)損傷的保護效應[J];中醫(yī)藥導報;2011年05期

相關會議論文 前1條

1 溫曉薇;陳歡直;解軍;;ROS在干細胞中的作用[A];第五屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術交流會論文集[C];2015年

相關博士學位論文 前2條

1 曹崢;貫葉連翹提取物對三氯化鋁暴露大鼠海馬腦區(qū)的保護作用及機制[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2017年

2 王慶利;幾種天然化合物的神經(jīng)保護作用及其作用機理研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

相關碩士學位論文 前4條

1 莊翠翠;鋁通過HPA軸激活NF-κB調(diào)控大鼠脾臟淋巴細胞凋亡機制的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2017年

2 李歡;納米氧化鋁顆粒對小鼠免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的影響[D];山西醫(yī)科大學;2015年

3 施薇;催化活化氧氣產(chǎn)生高活性自由基體系的構(gòu)建及其效能研究[D];武漢紡織大學;2015年

4 禚金花;DFP對鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎組織保護作用的機理研究[D];山東大學;2008年

本文編號：2795444