【摘要】：膠質(zhì)瘤是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤,由于其浸潤能力極強,使得手術(shù)切除這一手段難以將其根除。在血腦屏障和多藥耐藥的存在下,使得傳統(tǒng)的化療手段也無法達到理想的治療效果。RNA干擾技術(shù)作為現(xiàn)代生物工程的重要里程碑之一,已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于研究腫瘤的治療當中。研究聯(lián)合用藥,協(xié)同抗癌,是應(yīng)對惡性腫瘤的新型策略。聚合物膠束是一種可以實現(xiàn)化療藥物和siRNA共載的藥物載體,具有生物相容性高,生物安全性好的特點,但由于結(jié)構(gòu)限制使得其存在所載藥物過早或過遲釋放的缺點。利用細胞內(nèi)外還原型谷胱甘肽濃度差異,不同細胞器pH值的差異,我們設(shè)計并且合成制備了一種可以穩(wěn)定載藥,并且在特定條件下觸發(fā)快速釋藥的載藥型聚合物膠束:疏水內(nèi)核具有pH敏感性,用來包載化療藥物阿霉素;陽離子夾層用來荷載YAP-siRNA,引入二硫鍵,具有氧化還原敏感性。最外層的親水端選用PEG,起遮蔽作用的同時,有助于實現(xiàn)載體在體內(nèi)的長循環(huán)。課題主要包含以下三個部分:第一部分,兩種聚合物 PMAPEGx-PMACYSy-PDPAz/PMAPEGx-PMACYNm-PDPAn的合成,表征與自組裝。利用可逆-加成斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合反應(yīng)(RAFT)合成兩種組成相似,結(jié)構(gòu)相似的聚合物,一種含有-S-S-鍵,一種不含。用凝膠滲透色譜,核磁共振氫譜和傅里葉變換紅外光譜對聚合物的分子量和結(jié)構(gòu)組成進行表征。再用芘熒光探針法檢測兩種聚合物的臨界聚集濃度分別為0.01349(mg/ml),0.002992(mg/ml)。第二部分,載藥聚合物膠束的制備與表征。用透析法制備載阿霉素聚合物膠束(DOX-PSD/DOX-PND),紫外分光光度法測定其包封率均為80%左右,最大載藥量為17.6%左右。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示所制備的聚合物膠束可以攜載siRNA,。體外藥物釋放實驗證明,所制備的載藥聚合物膠束具有氧化還原和pH雙重刺激響應(yīng)性釋藥特征,在pH 5.0和10 mM還原性GSH刺激下72小時后,DOX-PSD中阿霉素的累積釋放率為81.4%,而DOX-PND中僅為47.1%。siRNA的刺激響應(yīng)性釋放效果則更為明顯。第三部分,DOXPXD/siRNA和DOX-PXD的體內(nèi)外抗腦膠質(zhì)瘤活性的研究。利用流式細胞術(shù)和共聚焦顯微鏡考察納米載體的細胞攝取,胞內(nèi)分布以及細胞內(nèi)的阿霉素釋放情況,q-rtPCR檢測攜載siRNA的納米載體的基因,沉默效果。MTT實驗檢測了不同載藥膠束對腫瘤細胞的殺傷能力,最后用裸鼠構(gòu)建了異位腦膠質(zhì)瘤模型,檢測了不同載藥膠束的體內(nèi)抗腫瘤能力。結(jié)果顯示,所制備的DOXPXD/siRNA和DOX-PXD對所攜載的藥物有良好的共遞送作用,可以在細胞水平降低U87細胞中YAP蛋白的mRNA水平。MTT結(jié)果顯示DOX與siRNA共載有顯著的協(xié)同抗癌效果,可以降低DOX的IC50,且DOXPSD/siRNA與DOXPND/siRNA相比抗癌能力更強,具有顯著性差異。體內(nèi)分布實驗證明,經(jīng)尾靜脈注射給藥后,載藥膠束可通過EPR效應(yīng)被動靶向到腫瘤組織,抑瘤實驗結(jié)果顯示siRNA與DOX共載可以顯著提高載阿霉素膠束的抗癌效率,DOXPSD/siRNA與DOXPND/siRNA相比,具有更顯著的抑瘤效果。
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943
【圖文】：

邐Ｖ＇＝＊丨ｒ邋，邐／邋；逡逑？邋ｌｉａ（ｋ＞ｓｏｍａｌ邋ｐｉ邋｝－ｒｃｓｐｏｎ＞ｉ＼ｃ邋ｄｍｊｉ邋ｒｅｌｅａｓｅ邐＼、、逡逑？邐ＩｓｉｒａｃｃＨｕｌａｒ邋ｒｃｄｏｘ－ｎ．＊＾Ｈ？？ｉｖｃ邋ｄｒｕｇ邋ｒｃｔｅｅ逡逑圖１－２環(huán)境響應(yīng)型聚合物膠束的作用原理逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ邋ｐｏｌｙｍｅｒ邋ｍｉｃｅｌｌｅｓ＾３６＇逡逑通過對聚合物的結(jié)構(gòu)進行巧妙的設(shè)計，可以制備出對腫瘤組織的微環(huán)境具有逡逑響應(yīng)性的聚合物膠束。這種環(huán)境響應(yīng)型聚合物膠束，在一定生物條件的刺激下，逡逑結(jié)構(gòu)會發(fā)生改變，從而導致膠束溶解或坍塌，進而促進其中藥物在特定部位的釋逡逑放［３６＿３９】。（１）如利用腫瘤組織的ｐＨ值為６．５－７．２；細胞內(nèi)溶酶體的ｐＨ值為５．０左逡逑１７

圖２－４大分子鏈轉(zhuǎn)移劑ＰＭＡＰＥＧ的１Ｈ－ＮＭＲ圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－４邋＾－ＮＭＲ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ＰＭＡＰＥＧ逡逑聚合物ＰＭＡＰＥＧｘ－ＰＭＡＣＹＳ／Ｂｏｃ－：ＰＤＰＡｚ的核磁共振氫譜如圖２－５所示，其逡逑中化學位移Ｓ在７．２６ｐｐｍ處的峰，為ＣＤＣ１３的溶劑峰。Ｓ４＿１４邋（２４Ｈ，－Ｃ／／？－０Ｈ）逡逑對應(yīng)的是單體甲基丙烯酸酯聚乙二醇的特征峰；Ｓ邋３．０對應(yīng)的是單體２－二異丙基逡逑氨基甲基丙烯酸乙酯中次甲基的質(zhì)子峰，也是該單體的特征峰；５２．８２對應(yīng)單體逡逑ＭＡＣＹＳ＊Ｂｏｃ中與二硫鍵相連的兩個亞甲基的質(zhì)子峰，是這部分單體的特征峰。逡逑該聚合物的１Ｈ－ＮＭＲ圖譜中，其余各峰歸屬如下：逡逑】Ｈ－ＮＭＲ邋（６００邋ＭＨｚ）邋Ｓ邋７．２８邋（ＣＤＣ１３），Ｓ邋４．１４邋（２４Ｈ，－ＣＨ？－０Ｈ，邋ＰＭＡＰＥＧ），逡逑５邋３．４７邋（邋－Ｃ＾－ＮＨ－Ｃ＝０，ＰＭＡＰＥＧ邋），Ｓ邋３．０１（－ＫＣＨ３）２，ＤＰＡ），邋５邋２．９ｌ（－ＣＨ７．Ｑ－逡逑Ｃ＝０，ＰＭＡＰＥＧ），邋５邋２．Ｓ２（－ＣＨ？－Ｓ－Ｓ－ＣＨ？－ＭＡＣＹＳ＊Ｂｏｃ＼邋５邋２．６５（－Ｃ＾．０－Ｃ＝０，ＤＰＡ），邋５逡逑１．８３（－Ｃ－ＣＨ２－Ｃ－）

圖２－７聚合物ＰＳＤ和ＰＮＤ的傅里葉變換紅外光譜逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－７邋ＦＴ－ＩＲ邋ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ＰＳＤ邋ａｎｄ邋ＰＮＤ逡逑如圖２－７所示，聚合物ＰＳＤ和ＰＮＤ的傅里葉變換紅外光譜中，ｖｃ＿0邋１７４５邋ｃｎＴ］逡逑為酯基團Ｃ＝０雙鍵的伸縮振動峰＝Ｖ＾１２８４Ｃｍ＿１為酯基團Ｃ－０單鍵的伸縮振動逡逑峰。ｖｅ－0１２０８ｃｍ＿１為醇輕基中Ｃ－０單鍵的伸縮振動峰。ｖｃ－0１６４２ｃｍ＿１和１６３８邋ｃｍ逡逑分別為ＰＳＤ和ＰＮＤ酰胺基團當中Ｃ＝０雙鍵的伸縮振動峰。５ＣＨ邋１４６５ｃｍｄ為逡逑烷烴鏈ＣＨ：．中Ｃ－Ｈ單鍵的彎曲振動峰。ｖｃ＿Ｎ邋１０３８ｃｍ＿］為與伯胺相連，Ｃ－Ｎ鍵的逡逑伸縮振動峰。值得注意的是在聚合物ＰＳＤ的紅外光譜中出現(xiàn)了邋ＰＮＤ沒有的ｖｃ．ｓ逡逑１２５８ＣＨＴ１邋Ｃ－Ｓ單鍵的伸縮振動峰。兩種聚合物幾乎相同的ＦＴ－ＩＲ光譜再一次證明，逡逑它們的化學組成是相似的。逡逑３３逡逑

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