發(fā)布時(shí)間：2020-08-10 15:43

【摘要】：課題組前期研究從綠側(cè)花�？蝎@得一條5個(gè)氨基酸寡肽(Anthopleura anjunae Peptide,AAP-H),其對(duì)肝細(xì)胞可能具有增殖活性。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定AAP-H的抗氧化活性,研究AAP-H對(duì)正常人肝細(xì)胞Chang Liver細(xì)胞化學(xué)性損傷的保護(hù)作用,并探討AAP-H對(duì)四氯化碳(CCl_4)引起的小鼠急性肝損傷模型的保護(hù)作用及其機(jī)制。首先,測(cè)定AAP-H對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基和超氧陰離子自由基的清除率,以維生素C(Vc)的清除率為對(duì)照,分別計(jì)算AAP-H與Vc對(duì)各自由基的清除率的IC_(50),對(duì)比抗氧化能力。結(jié)果表明,AAP-H及Vc分別對(duì)DPPH自由基清除率的IC_(50)為10.3 mg/mL、7.54μg/mL;對(duì)ABTS自由基清除率的IC_(50)為6.29μg/mL、4.80μg/mL;對(duì)羥自由基清除率的IC_(50)為0.983mg/mL、1.16 mg/mL;對(duì)超氧陰離子自由基清除率的IC_(50)為116μg/mL、52.6μg/mL。其次,建立由CCl_4誘導(dǎo)的Chang Liver細(xì)胞化學(xué)損傷模型,采用MTT法測(cè)定AAP-H作用后的增殖率,用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化及修復(fù)能力。以8Mm CCl_4對(duì)Chang Liver細(xì)胞造成肝損傷模型,200μg/mL AAP-H對(duì)其的增殖率為40.4%,倒置顯微鏡觀察的形態(tài)及劃痕實(shí)驗(yàn)表明,AAP-H對(duì)Chang Liver細(xì)胞由CCl_4造成的損傷具有一定修復(fù)作用。最后,建立急性CCl_4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型。檢測(cè)其血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性水平,肝組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量,肝臟組織石蠟切片,進(jìn)行病理學(xué)觀察和微觀結(jié)構(gòu)觀察,Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果表明,AAP-H可降低血清中ALT、AST活性,抑制肝組織中MDA上升,上調(diào)SOD和GSH-Px,降低Bax、Caspase-3、Caspase-9、AIF和Fatty Acid Synthase蛋白表達(dá),升高Bcl-2蛋白表達(dá),并且在病理學(xué)變化及微觀結(jié)構(gòu)中可見(jiàn),其對(duì)小鼠肝組織的修復(fù)作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

2.2.5 數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用 x±s 表示，采用 SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行 ANOVA 分析和Probit 分析。2.3 結(jié)果2.3.1 DPPH 自由基清除率的測(cè)定由圖 2-1 可知，Vc 對(duì) DPPH 自由基的清除能力很強(qiáng)，在微克級(jí)別，而 AAP-H幾乎要達(dá)到毫克級(jí)別才能用本方法測(cè)定出對(duì) DPPH 自由基的清除能力，AAP-H與 Vc 的 IC50分別為 10.3 mg/mL、7.54 μg/mL。與對(duì)照組 Vc 相比，AAP-H 的 IC50遠(yuǎn)大于 Vc，AAP-H 具有較弱的清除 DPPH 自由基的能力。

隨著濃度的增加，Vc度ABTS自由基的清除率相比AAP-H增加更快相同條件下，當(dāng) Vc 濃度為 7 μg/mL 時(shí)清除率已接近最大值因此 Vc 的 IC50較 AAP-H 更低。兩者 IC50分別為 6.29 μg/mL、4.80 μg/mL。與對(duì)照組 Vc 相比，AAP-H 的 IC50是Vc 的 1.3 倍，AAP-H 具有較強(qiáng)的清除 ABTS 自由基的能力。

圖 2-3AAP-H 與 Vc 對(duì)羥自由基的清除率Fig.2-3 Scavenging rate of ·OH free radicals by the polysaccharide from AAP-H and Vc2.3.4 超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定由圖 2-4 可知，隨濃度的增加，Vc 對(duì)超氧陰離子自由基的清除率的變化率逐漸降低，及低濃度時(shí)變化率較快，高濃度時(shí)增加率緩慢，濃度為 200 μg/mL 時(shí)才打到峰值。而 AAP-H 在一定濃度范圍內(nèi)，對(duì)超氧陰離子的清除率幾乎為一級(jí)反應(yīng)（線性關(guān)系），當(dāng)濃度為 80 μg/mL 左右時(shí)即打到峰值。但由于這種特性，Vc 的 IC50仍舊較高，兩者 IC50分別為 116 μg/mL、52.6 μg/mL。與對(duì)照組 Vc 相比，AAP-H 的 IC50是 Vc 的 2.2 倍，AAP-H 具有較強(qiáng)的清除超氧陰離子自由基的能力。

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2 ;鮮艷美麗的�？鸞J];課外閱讀;2008年08期

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本文編號(hào)：2788293