【摘要】：納米脂質(zhì)載體(nanostructured lipid carrier,NLC)是一種基于脂質(zhì)的納米級的藥物載體,其作為一種極具發(fā)展和應(yīng)用前景的遞藥系統(tǒng),具有低毒、低免疫原性、代謝周期長和易于修飾等特點,且具有較好的生物學(xué)特性,包括生物相容性,生物降解性,以及能夠負載親水性和疏水性藥物的能力。脂質(zhì)載體包括脂質(zhì)體、聚合物囊泡和膠束等載體形式。脂質(zhì)體(liposome,LP)是指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型囊泡。脂質(zhì)體作為一種藥物載體,能夠提高藥物的溶解度,增加穩(wěn)定性,降低毒副作用,提高治療效果。因此,脂質(zhì)體在腫瘤治療領(lǐng)域,特別在遞送及靶向釋放化療藥物方面具有極大的優(yōu)勢。毒素肽(toxin peptide)作為一種線性陽離子肽,能夠誘導(dǎo)脂質(zhì)膜滲透,并與脂質(zhì)膜自組裝形成孔道型結(jié)構(gòu),小分子藥物能夠通過孔道從脂質(zhì)體膜內(nèi)快速釋放,進而發(fā)揮療效。親水性聚合物聚乙二醇(polyethylene glycols,PEG)的親水層能夠阻礙網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對納米載體的識別和清除作用,能夠?qū)崿F(xiàn)納米載體的長循環(huán)作用。PEG對載體生物性能的影響較低,因此被廣泛用于修飾納米載體�；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一種蛋白水解酶,MMP-2和MMP-9在多種惡性腫瘤中高表達,能促進腫瘤生長因子分泌,加速腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。本課題以毒素肽和PEG為原料,通過邁克爾加成反應(yīng)合成功能肽,并將合成的功能肽修飾于脂質(zhì)體的表面。采用薄膜分散法制備空白脂質(zhì)體,以阿霉素(doxorubicin,DOX)為模型藥物,采用硫酸銨梯度法進行DOX的包載,以粒徑、多分散系數(shù)(polydispersity index,PDI)、Zeta電位及包封率(encapsulation efficiency,EE)等指標(biāo)對脂質(zhì)體進行表征。采用透析法對制備的脂質(zhì)體進行酶敏感性能評價,通過四甲基偶氮唑藍(methyl thiazolyl terazolium,MTT)法考察脂質(zhì)體對人乳腺癌MCF-7細胞體外毒性作用。第一部分脂質(zhì)體制備和表征目的:合成一系列功能性聚合物,制備DOX脂質(zhì)體和毒素肽修飾的DOX脂質(zhì)體,并對兩類脂質(zhì)體進行表征。方法:通過邁克爾加成反應(yīng),將含有巰基的毒素肽與含有馬來酰亞胺基團的PEG共軛連接,反應(yīng)過程中借助TLC法監(jiān)測進程。采用薄膜分散法制備空白脂質(zhì)體,將化療藥物DOX通過硫酸銨梯度法進行包載,制備DOX脂質(zhì)體�；谙盗泄δ苄跃酆衔�,對脂質(zhì)體進行表面修飾。結(jié)果:合成反應(yīng)共得到5種功能性聚合物,經(jīng)TLC法監(jiān)測,合成反應(yīng)均較為完全。兩類DOX脂質(zhì)體色澤均一,且粒徑呈正態(tài)單峰分布,粒徑均較小(100~200 nm),PDI均較低,包封率均大于70%。結(jié)論:本部分成功合成5種功能性聚合物,構(gòu)建了兩類DOX脂質(zhì)體,制備方法簡單,重現(xiàn)性良好,且包封率較高。第二部分脂質(zhì)體酶敏感性能評價目的:通過測定DOX的釋放水平,對毒素肽修飾的脂質(zhì)體酶敏感性能進行初步評價。方法:首先通過透析法考察毒素肽類似物修飾的DOX脂質(zhì)體的通透性,然后在膠原酶存在的條件下,采用透析袋法對其進行酶敏感性能評價。結(jié)果:脂質(zhì)體酶敏感性能評價試驗表明,無膠原酶存在時,脂質(zhì)體對藥物的通透性較低;當(dāng)一定濃度膠原酶存在時,脂質(zhì)體可以實現(xiàn)不同程度的酶敏釋藥。結(jié)論:借助課題組建立的脂質(zhì)體通透性和酶敏感性能評價方法,本部分篩選出了酶敏感性相對較高的脂質(zhì)體組。第三部分脂質(zhì)體體外活性初步評價目的:通過檢測系列DOX脂質(zhì)體對于人乳腺癌細胞的藥理效應(yīng),評價比較不同修飾脂質(zhì)體的體外活性。方法:采用MTT法分析致孔肽修飾的DOX脂質(zhì)體對MCF-7細胞的毒性作用,考察不同孵育時間、不同DOX濃度以及不同膠原酶濃度對細胞毒性的影響。通過比較各組細胞存活率和IC_(50)值以評價載體細胞毒性,并篩選出最優(yōu)脂質(zhì)體組。結(jié)果:在膠原酶的作用下,毒素肽類似物修飾的DOX脂質(zhì)體的細胞毒性呈現(xiàn)出不同程度的增強。其中T-PEG1-DOX-LP的細胞毒性變化最為顯著,細胞存活率降低了49.81%。結(jié)論:本部分采用MTT法考察不同功能聚合物修飾對于DOX脂質(zhì)體酶敏感性的影響,篩選得到T-PEG1-DOX-LP組具備相對更高的酶敏感特性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96
【圖文】：

毒素肽修飾的阿霉素脂質(zhì)體酶敏感機制Fig.1-1Theenzyme-sensitivemechanismofDoxliposomemodifiedwith

腫瘤部位毒素肽修飾的阿霉素脂質(zhì)體酶敏感機制Fig.1-2Theenzyme-sensitivemechanismofDoxliposomemodifiedwith

功能性聚合物T-PEG1的TLC檢測結(jié)果

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張祺照;;脂質(zhì)體制備方法研究概況[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2013年12期

2 張文濤;黃慶柏;林麗峰;李為理;;多烯紫杉醇脂質(zhì)體包封率的測定[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2008年14期

本文編號：2787918