【摘要】：目的:基于氧化應(yīng)激的角度,探討氯胺酮導(dǎo)致的腎臟氧化損傷及抗氧化劑褪黑素在其中的保護(hù)作用機(jī)制。方法:選取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠32只,按照隨機(jī)數(shù)字表法平均分為4組即空白對(duì)照組、氯胺酮干預(yù)組、褪黑素干預(yù)組及氯胺酮+褪黑素干預(yù)組,每天各組大鼠分別予以生理鹽水、氯胺酮30mg/kg、褪黑素5mg/kg和氯胺酮30mg/kg+褪黑素5mg/kg。采用腹腔注射每天一次,每只大鼠注射量總體積為1ml,連續(xù)12周,注射量根據(jù)每周兩次測(cè)大鼠體重以調(diào)整。每次給藥后觀察大鼠活動(dòng)約1小時(shí),12周后麻醉處死大鼠取出腎臟組織,采用比色法檢測(cè)腎組織氧化相關(guān)指標(biāo)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量,行組織學(xué)蘇木精-伊紅染色法(HE)及馬松染色(Masson)觀察腎組織病理改變,通過TUNEL法檢測(cè)腎臟組織細(xì)胞的凋亡情況,應(yīng)用Western Blotting檢測(cè)抗氧化蛋白核轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)和血紅素氧化酶-1(HO-1)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:給藥12周后,氯胺酮干預(yù)組大鼠的體型與體重量均明顯較其余各組小,排尿次數(shù)及活動(dòng)增多,氯胺酮+褪黑素干預(yù)組發(fā)現(xiàn)增加褪黑素干預(yù)后可明顯改善大鼠排尿及活動(dòng)增多癥狀。與空白對(duì)照組比,氯胺酮干預(yù)組中肌酐、尿素氮及MDA含量升高而SOD及GSH-Px降低,腎組織中可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),多處局灶性壞死,甚至出現(xiàn)腎小球萎縮、封閉,間質(zhì)有條索狀纖維及出現(xiàn)明顯的腎組織細(xì)胞凋亡。褪黑素干預(yù)組大鼠腎組織僅示SOD、GSH-Px及Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)升高,未見腎損害。與氯胺酮干預(yù)組相比,氯胺酮+褪黑素干預(yù)組中MDA含量明顯下降,SOD、GSH-Px及Nrf2、HO-1表達(dá)量顯著升高,少見炎癥腎組織浸潤(rùn)、腎小球萎縮、間質(zhì)纖維化及細(xì)胞凋亡等腎損害。結(jié)論:氯胺酮長(zhǎng)期作用可導(dǎo)致大鼠腎臟氧化應(yīng)激損傷,引起大量炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn),腎單位破壞,上皮細(xì)胞凋亡甚至間質(zhì)纖維化等病理改變。褪黑素可有效拮抗氯胺酮導(dǎo)致的腎臟氧化應(yīng)激損傷,可顯著提高抗氧化蛋白表達(dá)保護(hù)腎組織,改善腎功能以及減少上皮細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與增加Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)水平有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

圖 1 各組大鼠血清肌酐及尿素氮水平條圖Figure1 serum creatinine and urea nitrogen levels in each group注：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ s ）表示，與空白對(duì)照組比，＊P <0.05；與氯胺酮干預(yù)組比，＃P <0.05；與褪黑素干預(yù)組比，￡P(guān) <0.05，（n=8/組）。

氯胺酮+褪黑素干預(yù)組中大鼠炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，腎小球及腎小管尚完整，間質(zhì)破壞不明顯（圖 2D）。Masson 染色切片示，與空白對(duì)照組相比，氯胺酮干預(yù)組可見腎間質(zhì)膠原纖維含量增多染色加深（圖2a/b），而與空白對(duì)照組比，褪黑素干預(yù)組與氯胺酮+褪黑素干預(yù)組膠原染色幾乎無(wú)明顯差別，未見明顯的間質(zhì)纖維化，僅在黏膜下層和肌層之間有少量染成藍(lán)色的正常纖維組織（圖 2c/d）。氯胺酮長(zhǎng)期作用下可導(dǎo)致腎組織結(jié)構(gòu)破壞甚至導(dǎo)致纖維增生，而褪黑素對(duì)腎組織有保護(hù)作用。圖 2 大鼠腎組織 HE 染色(A-D)及 Masson 染色結(jié)果(a-d)Figure2 renal HE staining(A-D)and Masson staining(a-d)results in rats注：氯胺酮干預(yù)組可見腎組織大量炎癥細(xì)胞（細(xì)箭頭所示），腎小球萎縮、封閉（星號(hào)所示），可見膠原染色加深及有條索狀纖維形成（粗箭頭）；氯胺酮+褪黑素干預(yù)組則可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少（細(xì)箭頭所示），腎小球及腎小管尚完整，與空白對(duì)照組幾乎無(wú)差別（粗箭頭）。

圖 3 各組大鼠腎組織凋亡細(xì)胞病理圖及半定量結(jié)果。Figure3 apoptosis cytopathology and semi-quantitative results of renal tissue in each group注：各組腎組織凋亡細(xì)胞病理圖在 400 倍鏡下觀察，陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色，染色質(zhì)濃縮；數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，與空白對(duì)照組比，＊P < 0.05；與氯胺酮干預(yù)組比，＃P < 0.05；與褪黑素干預(yù)組比，￡P(guān) < 0.05。

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