【摘要】：臨床上每個病人的病癥情況各不相同,對藥物在體內(nèi)的代謝會產(chǎn)生一定影響,因此治療方案也應(yīng)因人而異。某些病人由于吸收或代謝等因素,血藥濃度達不到有效濃度;也有病人由于藥物在體內(nèi)分解和消除較為緩慢,導(dǎo)致血藥濃度持續(xù)過高甚至出現(xiàn)毒副反應(yīng)。因此對血液中藥物的濃度監(jiān)測對藥代動力學(xué)研究有著重要意義。西妥昔(JMT101)屬于單克隆抗體藥物,它可以靶向誘導(dǎo)毒免疫效應(yīng)細(xì)胞,使其作用于表達表皮生長因子(EGFR)的腫瘤細(xì)胞,對結(jié)直腸癌有著顯著的療效。本課題以西妥昔(JMT101)為研究藥物,基于ELISA檢測方法進,建立了血清中藥物濃度的檢測方法,為西妥昔(JMT101)藥代動力學(xué)研究提供技術(shù)支持。經(jīng)方法學(xué)驗證結(jié)果顯示:該檢測方法的最低定量檢測限為40ng/mL,在40-4,000ng/mL的檢測范圍內(nèi)重復(fù)性良好,批內(nèi)精密度CV%≤10%,批間精密度CV%≤15%,準(zhǔn)確度Bia%≤15%,標(biāo)準(zhǔn)曲線批間重現(xiàn)性良好。除了準(zhǔn)確度和精密度實驗外,基質(zhì)效應(yīng)、穩(wěn)定性、方法耐用性、稀釋線性等實驗均符合藥物代謝研究的要求,與參比工藝比對一致性良好。國內(nèi)市場目前同類型藥物日益增多,但與此相對應(yīng)的檢測技術(shù)卻相對薄弱。本研究對ELISA檢測方法進行了一系列的工藝優(yōu)化,包括對抗干擾試劑酪蛋白的工藝摸索,即高壓溫度為120°C,高壓時間為30 min,pH8.0在1MPa的條件處理酪蛋白為最適工藝。改進偶聯(lián)工藝提升試劑性能和延長有效讀數(shù)時間,成功將目前藥物代謝研究所用主流的進口試劑進行替代。通過改變緩沖液配方從而減少基質(zhì)效應(yīng)與鉤狀效應(yīng),提升了試劑對人抗鼠抗體(HAMA)、類風(fēng)濕因子(RF)、高含量的膽紅素、甘油三酯的抗干擾能力,同時將試劑靈敏度由過去的80ng/mL提高到了40ng/mL。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R969
【圖文】：

上海交通大學(xué)工程碩士學(xué)位論文表 1-1（續(xù)）名稱 小分子藥物 大分子藥物血清結(jié)合 白蛋白 特異載體蛋白檢測方法HPLC,LC 法等色譜法ELISA,CLIA 等免疫分析法由于體液中藥物及代謝產(chǎn)物含量極微，又與大量內(nèi)源性成分相混雜，因此只析方法可靠才能保證分析結(jié)果準(zhǔn)確。ELISA 法以適用范圍廣、靈敏度高、選擇的檢測器的開發(fā)和應(yīng)用見圖 1-1，在諸多分析方法中后來居上，成為分析體內(nèi)藥謝產(chǎn)物不可缺少的手段之一。

底物被酶催化反應(yīng)，形成顯色產(chǎn)物（圖1-2）。顯色產(chǎn)物的濃度與待測物質(zhì)的量直接或線性相關(guān)，因此可直接進行定量計算或定性分析。此方法具有快捷簡便、高通量、結(jié)果重復(fù)性高的優(yōu)點，尤其是對于大

7圖 1-3 EGFR 的蛋白序列Fig. 1-3 Protein sequence of EGFRGFR 包被抗原為粉末狀固體，實驗前需將粉末用純水分裝凍存。包被時，按一定比例用緩沖溶液稀釋至工8℃孵育過夜或 37℃孵育 2h。次日進行封閉。，使用較高濃度的其他蛋白質(zhì)進行再次包被的工藝過程板具有較強的吸附能力，不僅能吸附所包被的蛋白質(zhì)

【參考文獻】

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本文編號：2785175