【摘要】：研究目的:癲癇是一種復(fù)雜的神經(jīng)系統(tǒng)綜合征,神經(jīng)元異常放電引起的癲癇發(fā)作是其主要臨床表現(xiàn),藥物治療是控制癲癇發(fā)作的主要手段�，F(xiàn)有藥物主要作用于突觸離子通道和神經(jīng)遞質(zhì)受體從而抑制癲癇發(fā)作,但是對疾病本身及認(rèn)知功能降低等神經(jīng)精神并發(fā)癥無效,甚至可能加重神經(jīng)精神癥狀。越來越多的研究證實代謝紊亂與癲癇發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其中星形膠質(zhì)細(xì)胞代謝紊亂可能起到重要作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn),糖酵解中間產(chǎn)物1,6-二磷酸果糖(FBP)具有顯著抗癲癇作用,不僅能抑制癲癇發(fā)作而且可以改善慢性癲癇動物的認(rèn)知功能。本課題旨在圍繞核心科學(xué)假說——FBP可以協(xié)同調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞的糖代謝和谷氨酸代謝,從而發(fā)揮防治癲癇發(fā)作、修復(fù)腦損傷的作用——闡明FBP的新穎抗癲癇機制,從而揭示FBP較現(xiàn)有抗癲癇藥物的特點及優(yōu)勢。研究內(nèi)容:(1)FBP對慢性癲癇的治療作用及其作用特點:用毛果蕓香堿誘導(dǎo)的慢性自發(fā)性顳葉癲癇模型,對比研究一線抗癲癇藥包括丙戊酸鈉和左乙拉西坦,和FBP于給藥期間和停藥后的抗癲癇發(fā)作藥效;用Morris水迷宮試驗評價一線抗癲癇藥和FBP對癲癇動物學(xué)習(xí)記憶能力的影響。(2)探究FBP抑制糖酵解作用與其抑制癲癇發(fā)作的關(guān)系:采用清醒動物腦微透析的方法研究FBP對慢性癲癇動物發(fā)作間期和發(fā)作期乳酸水平和神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響;隨后于毛果蕓香堿誘導(dǎo)的急性癲癇發(fā)作模型中利用靶向工具藥阻斷乳酸穿梭,以觀察其對急性癲癇發(fā)作、乳酸水平和神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響,從而對比分析FBP的作用方式和作用特點。(3)探究FBP對星形膠質(zhì)細(xì)胞糖代謝和谷氨酸代謝的影響:利用同位素標(biāo)記的谷氨酸鈉聯(lián)合質(zhì)譜檢測分析FBP處理對谷氨酸在人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA細(xì)胞中多條代謝通路的影響,包括進(jìn)入三羧酸循環(huán)代謝、流向谷胱甘肽(GSH)合成和經(jīng)由經(jīng)典通路轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺等。(4)采用免疫組織化學(xué)的方法考察FBP對慢性癲癇動物海馬區(qū)的神經(jīng)保護作用。實驗結(jié)果:(1)FBP在慢性癲癇模型中表現(xiàn)出相較于陽性藥物更快速、更穩(wěn)定、更持久的抑制癲癇發(fā)作的效果,特別是在停藥后僅有FBP組動物能夠維持抗癲癇效果;同時僅有FBP對慢性癲癇動物的學(xué)習(xí)能力具有改善作用。(2)FBP可以對抗癲癇發(fā)作誘導(dǎo)因素引起的慢性癲癇動物海馬區(qū)乳酸水平升高,維持發(fā)作間期谷氨酸水平處于正常水平,并恢復(fù)谷氨酸能神經(jīng)元對外界刺激的正常響應(yīng);兩個不同靶點的乳酸穿梭阻斷劑均能顯著對抗癲癇發(fā)作,其中單羧酸轉(zhuǎn)運體抑制劑強烈升高細(xì)胞間隙乳酸水平而乳酸脫氫酶抑制劑表現(xiàn)出明顯抑制,二者均顯著抑制谷氨酸水平使其大大低于正常水平;這種不同指出,FBP并非單純地抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞糖酵解或乳酸穿梭而是調(diào)控其代謝活動和與此關(guān)聯(lián)的神經(jīng)遞質(zhì)代謝過程。(3)FBP可差別地調(diào)控HA細(xì)胞的糖代謝和谷氨酸代謝:FBP抑制糖酵解活動并促進(jìn)葡萄糖進(jìn)入三羧酸循環(huán),但不影響其流向GSH合成通路;促進(jìn)谷氨酸進(jìn)入三羧酸循環(huán)氧化分解或進(jìn)一步流向天冬氨酸合成,選擇性促進(jìn)胞外谷氨酸流向GSH合成并釋放到細(xì)胞外,也同時促進(jìn)谷氨酸轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺。(4)FBP改善慢性癲癇動物海馬腦區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元隨疾病發(fā)展而出現(xiàn)的退化。研究結(jié)論:一方面,FBP通過調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞糖酵解穩(wěn)定慢性癲癇動物腦內(nèi)乳酸水平從而有利于抑制癲癇急性發(fā)作;另一方面FBP促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞三羧酸循環(huán),增強其谷氨酸清除能力并促進(jìn)谷氨酸轉(zhuǎn)化為腦內(nèi)重要的抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽,從而將引發(fā)癲癇發(fā)作及神經(jīng)退化的毒性物質(zhì)快速轉(zhuǎn)化為具有神經(jīng)保護作用的物質(zhì)。以上作用合理地解釋了 FBP兼具抑制癲癇發(fā)作和促進(jìn)癲癇腦組織結(jié)構(gòu)和功能修復(fù)的藥效特色和優(yōu)勢。研究結(jié)果不僅為后續(xù)開發(fā)FBP為新型抗癲癇藥物提供了藥效和理論依據(jù),也為研發(fā)更加安全有效的新型抗癲癇藥物提供了線索。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96
【圖文】：

大學(xué)碩士學(xué)位論文邐ＦＢＰ對慢性癲癇的治療作用及其作用特點逡逑藥物ＶＰＡ控制作用差異性明顯，尤其是在停藥后可見動物癲癇發(fā)作情況組內(nèi)逡逑異很大。由此可見，ＦＢＰ給藥組抗癲癇效果起效更快，作用更穩(wěn)定，尤為重要的逡逑撤去藥物后一段時間內(nèi)仍可保持一定藥效，這是目前臨床抗癲癇藥物所不具逡逑的特點。逡逑

邐ＦＢＰ對慢性癲癇的治療作用及其作用特點逡逑慢性癲癇動物學(xué)習(xí)能力和癲癇發(fā)作情況的相關(guān)性進(jìn)行了研究，結(jié)果如圖２．２，動物逡逑發(fā)作頻率與學(xué)習(xí)得分呈顯著相關(guān)（ｒ２邋＝－０．４６６，邋ｐ邋＝邋０．００７），發(fā)作頻率越高則動物逡逑的學(xué)習(xí)評分越低：對于正常姐動物，學(xué)習(xí)得分為２．６１邋±０．３２分，Ｉ類癲癇動物（３．００逡逑±０．００次）學(xué)習(xí)得分１．５０邋±邋０．３１分，ＩＩ類癲癇動物（３．３８邋±０＿６２次）學(xué)習(xí)得分１．５４邋±０．２８逡逑分，ＩＩＩ類癲癇動物（４．５０±０．５０次）學(xué)習(xí)得分０．００±０．００分，ＩＶ類癲癇動物（１１．２７士逡逑６．４０次）學(xué)習(xí)得分０．００邋±０．００分。而在高架十字迷宮試驗中，可觀察到癲癇動物在逡逑開放臂中停留的時間比例（７２．５邋±３．７邋％，邋ｎ邋＝邋３２）相較于正常動物（２７．８邋±６．１邋％，逡逑ｎ＝１８）提高進(jìn)兩倍，有極顯著差異（ｐ＜０．００１），但是不同級別的癲癇動物之間逡逑未見顯著相關(guān)性（ｒ２邋＝邋０．２２１

為了進(jìn)一步考察ＦＢＰ及各種抗癲癇藥物對癲癇動物學(xué)習(xí)能力的影響，另選取逡逑一批毛果蕓香堿誘導(dǎo)的慢性癲癇動物（ｎ＝５６），均R腫椴醋楸鸞形冢保堤戾義系母�，测定空间学习能力，并以正常动午U哉鍘Ｊ笛榻峁繽跡玻矗６哉斟義隙镎業(yè)揭仄教ǖ鈉驕穎芮狽謔牽叮矗保稿

本文編號：2785076