【摘要】：7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38)是鹽酸伊立替康(CPT-11)在體內(nèi)被羧酸酯酶(CES)轉化的活性代謝產(chǎn)物,是一種高效廣譜抗腫瘤藥物。SN-38作為DNA的拓撲異構酶I抑制劑,在一系列腫瘤治療過程中顯示抗增殖和促凋亡作用。但是由于活性內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性差,溶解性不好等缺點,臨床應用受到很大限制。為解決上述問題,本研究采用機械球磨法制備了以甘草酸二鈉(Na_2GA)作為輔料的SN-38無定型固體分散體(Na_2GA/SN-38-BM),并評估其在體外和體內(nèi)的抗腫瘤作用。本研究對Na_2GA/SN-38-BM進行三部分研究:(1)無定型固體分散體的制備與表征。Na_2GA與SN-38以質(zhì)量比100:1混合球磨制備獲得Na_2GA/SN-38-BM。當Na_2GA/SN-38-BM溶于水中時,Na_2GA自組裝成膠束負載SN-38,其在水中呈球狀體。通過采用動態(tài)光散射和透射電鏡對其進行了觀察,Na_2GA/SN-38-BM在水中形成的納米粒子粒徑為69.41 nm,多分散性指數(shù)PDI為0.255,粒子的ζ電位為-42.01 mV。此外,還制備了一種普通混合處理的Na_2GA與SN-38的混合物(Na_2GA/SN-38-UM)和純藥SN-38,作為對照組與Na_2GA/SN-38-BM進行比較。通過偏振光顯微鏡(PLM)、X射線衍射(XRD)和掃描電鏡(SEM)對固體粉末樣品的物理性質(zhì)進行了表征。PLM、XRD和SEM分析表明,球磨機將SN-38由晶體轉變?yōu)榉蔷w狀態(tài),提高了溶解度。(2)體外抗腫瘤活性研究:考察了Na_2GA/SN-38-BM固體分散體在細胞中的攝取、抑瘤活性、以及多細胞腫瘤球體外抑制能力實驗。細胞攝取實驗結果顯示,Na_2GA/SN-38-BM能被腫瘤細胞迅速內(nèi)吞,并定位于腫瘤細胞的細胞質(zhì)內(nèi)。MTT法驗證了與純藥SN-38和Na_2GA/SN-38-UM相比,Na_2GA/SN-38-BM擁有對Bcap-37乳腺癌細胞,A549肺癌細胞和HepG_2肝癌細胞三種腫瘤細胞更為顯著的抑制能力。3D多細胞腫瘤球體模型實驗中,Na_2GA/SN-38-BM組的細胞相對直徑下降最多,約為46%,進一步說明其對腫瘤微環(huán)境的毒性有顯著的抑制能力。(3)動物體內(nèi)抗腫瘤能力的研究。進一步在動物體內(nèi)進行了體內(nèi)抗腫瘤能力、藥代動力學和動物組織內(nèi)藥物分布實驗研究。體內(nèi)抗腫瘤研究結果表明,與對照組相比,Na_2GA/SN-38-BM組在整個治療過程中表現(xiàn)出更好的腫瘤抑制能力,有著接近53.70%的腫瘤抑制率。藥代動力學顯示,Na_2GA/SN-38-BM在大鼠體內(nèi)的生物利用度提高了4倍左右。體內(nèi)組織中藥物分布發(fā)現(xiàn),在使用純SN-38懸浮液治療的裸鼠的腫瘤中,累積的SN-38幾乎檢測不到,而用Na_2GA/SN-38-UM和Na_2GA/SN-38-BM處理的腫瘤中累積的藥物比用SN-38懸浮液治療處理的腫瘤分別高32和56倍。綜上所述,Na_2GA/SN-38-BM在體外和體內(nèi)均顯著增強了SN-38的抗癌作用,機械球磨的方法對Na_2GA/SN-38-BM的溶出行為、藥代動力學特性和腫瘤抑制作用均有顯著的改善。
【學位授予單位】：浙江工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96;R943
【圖文】：

各種拓撲異構酶在 DNA 復制過程中執(zhí)行維持與 DNA 拓撲相關的廣泛功能，并且是多種抗微生物轉錄和癌癥化學治療劑的靶標。圖1-1 人類拓撲異構酶結構[1]Figure 1-1. Structures of human topoisomerases1.1.1 抑制拓撲異構酶的機制DNA 拓撲異構酶的抑制可以通過幾種公認的分子機制發(fā)生[1-3]。其中一種潛在的機制是底物競爭性抑制，即抑制劑化合物與拓撲異構酶活性位點結合，阻止酶與DNA 底物相結合。目前還沒有拓撲異構酶特異性抑制劑通過這種機制發(fā)揮作用的顯著例子，但關于 DNA 競爭性抑制劑與其他 DNA 結合蛋白的報道表明，這種機制也可能在 DNA 拓撲異構酶中發(fā)揮作用[4]。另一種常見機制是形成所謂的“拓撲異構酶毒藥”，其由三元蛋白質(zhì)-DNA-藥物復合物組成，該復合物可防止 DNA 重連并將酶鎖在一個“裂解復合物”中。該復合物可以讓細胞內(nèi)形成高濃度的細胞裂解復合物，并阻止酶循環(huán)。第三種機制是通過競爭性抑制 ATP 的結合位點，這種機制只在 II 型拓撲異構酶中存在

SN-38 固體分散體的制備及其抗腫瘤活性研究柱：C18逆向柱 ODS-3，4.6×250 mm；particle size 5 μm相：甲醇:水（含 0.2%甲酸，pH3.0）= 80:20波長：380 nm：1 mL/min：35 ℃量：20 μL標準曲線的繪制曲線結果詳見圖 2-1。結果表明，以濃度 x(μg/mL) 為橫坐標，峰標，繪制非布索坦液相標準曲線，得線性回歸方程為：y=78035x+9999。SN-38 在 2.40-120.00 μg/mL 范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好

Na2GA/SN-38-UM, Na2GA/SN-38-BM and GA/SN-38-BM體外溶（n=3）re 2-2. In vitro release profiles of SN-38, Na2GA/SN-38-UM, Na2GA/SN-38-BGA/SN-38-BM (n=3)度，形態(tài)學分析及穩(wěn)定性Na2GA/SN-38-BM 溶解在水中時，Na2GA 包封 SN-38 以形成膠量納米膠束的尺寸分布，如圖 2-3 所示。在 25℃時，平均粒徑分nm。Na2GA / SN-38-BM 的 PDI 值約為 0.255（<0.3）。另外，粒.01 mV。平均粒徑<200 nm 被認為是適合逃避 RES 器官過濾的范吸收[90]。通常，上述 ζ-電位±30mV 可以形成穩(wěn)定的粒子[91]。負易逃避 RES 系統(tǒng)的捕獲，因此在腫瘤部位積累更多。通過 TEM 粒度，如圖 2-4 所示。納米膠束是球形的，具有中等均勻的粒度 的尺寸測量一致。通過尼羅紅嵌入的方法繪制 Na2GA/SN-38-BM（Figure2-5），得出 Na2GA/SN-38-BM 的 CMC 為 99.26μg/mLA/SN-38-BM 在水中形成的納米粒子的穩(wěn)定性，把樣品溶解在 PB

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本文編號：2782429