【摘要】：7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN-38)是鹽酸伊立替康(CPT-11)在體內(nèi)被羧酸酯酶(CES)轉(zhuǎn)化的活性代謝產(chǎn)物,是一種高效廣譜抗腫瘤藥物。SN-38作為DNA的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑,在一系列腫瘤治療過程中顯示抗增殖和促凋亡作用。但是由于活性內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性差,溶解性不好等缺點(diǎn),臨床應(yīng)用受到很大限制。為解決上述問題,本研究采用機(jī)械球磨法制備了以甘草酸二鈉(Na_2GA)作為輔料的SN-38無定型固體分散體(Na_2GA/SN-38-BM),并評(píng)估其在體外和體內(nèi)的抗腫瘤作用。本研究對(duì)Na_2GA/SN-38-BM進(jìn)行三部分研究:(1)無定型固體分散體的制備與表征。Na_2GA與SN-38以質(zhì)量比100:1混合球磨制備獲得Na_2GA/SN-38-BM。當(dāng)Na_2GA/SN-38-BM溶于水中時(shí),Na_2GA自組裝成膠束負(fù)載SN-38,其在水中呈球狀體。通過采用動(dòng)態(tài)光散射和透射電鏡對(duì)其進(jìn)行了觀察,Na_2GA/SN-38-BM在水中形成的納米粒子粒徑為69.41 nm,多分散性指數(shù)PDI為0.255,粒子的ζ電位為-42.01 mV。此外,還制備了一種普通混合處理的Na_2GA與SN-38的混合物(Na_2GA/SN-38-UM)和純藥SN-38,作為對(duì)照組與Na_2GA/SN-38-BM進(jìn)行比較。通過偏振光顯微鏡(PLM)、X射線衍射(XRD)和掃描電鏡(SEM)對(duì)固體粉末樣品的物理性質(zhì)進(jìn)行了表征。PLM、XRD和SEM分析表明,球磨機(jī)將SN-38由晶體轉(zhuǎn)變?yōu)榉蔷w狀態(tài),提高了溶解度。(2)體外抗腫瘤活性研究:考察了Na_2GA/SN-38-BM固體分散體在細(xì)胞中的攝取、抑瘤活性、以及多細(xì)胞腫瘤球體外抑制能力實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Na_2GA/SN-38-BM能被腫瘤細(xì)胞迅速內(nèi)吞,并定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。MTT法驗(yàn)證了與純藥SN-38和Na_2GA/SN-38-UM相比,Na_2GA/SN-38-BM擁有對(duì)Bcap-37乳腺癌細(xì)胞,A549肺癌細(xì)胞和HepG_2肝癌細(xì)胞三種腫瘤細(xì)胞更為顯著的抑制能力。3D多細(xì)胞腫瘤球體模型實(shí)驗(yàn)中,Na_2GA/SN-38-BM組的細(xì)胞相對(duì)直徑下降最多,約為46%,進(jìn)一步說明其對(duì)腫瘤微環(huán)境的毒性有顯著的抑制能力。(3)動(dòng)物體內(nèi)抗腫瘤能力的研究。進(jìn)一步在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行了體內(nèi)抗腫瘤能力、藥代動(dòng)力學(xué)和動(dòng)物組織內(nèi)藥物分布實(shí)驗(yàn)研究。體內(nèi)抗腫瘤研究結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,Na_2GA/SN-38-BM組在整個(gè)治療過程中表現(xiàn)出更好的腫瘤抑制能力,有著接近53.70%的腫瘤抑制率。藥代動(dòng)力學(xué)顯示,Na_2GA/SN-38-BM在大鼠體內(nèi)的生物利用度提高了4倍左右。體內(nèi)組織中藥物分布發(fā)現(xiàn),在使用純SN-38懸浮液治療的裸鼠的腫瘤中,累積的SN-38幾乎檢測不到,而用Na_2GA/SN-38-UM和Na_2GA/SN-38-BM處理的腫瘤中累積的藥物比用SN-38懸浮液治療處理的腫瘤分別高32和56倍。綜上所述,Na_2GA/SN-38-BM在體外和體內(nèi)均顯著增強(qiáng)了SN-38的抗癌作用,機(jī)械球磨的方法對(duì)Na_2GA/SN-38-BM的溶出行為、藥代動(dòng)力學(xué)特性和腫瘤抑制作用均有顯著的改善。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96;R943
【圖文】：

各種拓?fù)洚悩?gòu)酶在 DNA 復(fù)制過程中執(zhí)行維持與 DNA 拓?fù)湎嚓P(guān)的廣泛功能，并且是多種抗微生物轉(zhuǎn)錄和癌癥化學(xué)治療劑的靶標(biāo)。圖1-1 人類拓?fù)洚悩?gòu)酶結(jié)構(gòu)[1]Figure 1-1. Structures of human topoisomerases1.1.1 抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶的機(jī)制DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶的抑制可以通過幾種公認(rèn)的分子機(jī)制發(fā)生[1-3]。其中一種潛在的機(jī)制是底物競爭性抑制，即抑制劑化合物與拓?fù)洚悩?gòu)酶活性位點(diǎn)結(jié)合，阻止酶與DNA 底物相結(jié)合。目前還沒有拓?fù)洚悩?gòu)酶特異性抑制劑通過這種機(jī)制發(fā)揮作用的顯著例子，但關(guān)于 DNA 競爭性抑制劑與其他 DNA 結(jié)合蛋白的報(bào)道表明，這種機(jī)制也可能在 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶中發(fā)揮作用[4]。另一種常見機(jī)制是形成所謂的“拓?fù)洚悩?gòu)酶毒藥”，其由三元蛋白質(zhì)-DNA-藥物復(fù)合物組成，該復(fù)合物可防止 DNA 重連并將酶鎖在一個(gè)“裂解復(fù)合物”中。該復(fù)合物可以讓細(xì)胞內(nèi)形成高濃度的細(xì)胞裂解復(fù)合物，并阻止酶循環(huán)。第三種機(jī)制是通過競爭性抑制 ATP 的結(jié)合位點(diǎn)，這種機(jī)制只在 II 型拓?fù)洚悩?gòu)酶中存在

SN-38 固體分散體的制備及其抗腫瘤活性研究柱：C18逆向柱 ODS-3，4.6×250 mm；particle size 5 μm相：甲醇:水（含 0.2%甲酸，pH3.0）= 80:20波長：380 nm：1 mL/min：35 ℃量：20 μL標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制曲線結(jié)果詳見圖 2-1。結(jié)果表明，以濃度 x(μg/mL) 為橫坐標(biāo)，峰標(biāo)，繪制非布索坦液相標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為：y=78035x+9999。SN-38 在 2.40-120.00 μg/mL 范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好

Na2GA/SN-38-UM, Na2GA/SN-38-BM and GA/SN-38-BM體外溶（n=3）re 2-2. In vitro release profiles of SN-38, Na2GA/SN-38-UM, Na2GA/SN-38-BGA/SN-38-BM (n=3)度，形態(tài)學(xué)分析及穩(wěn)定性Na2GA/SN-38-BM 溶解在水中時(shí)，Na2GA 包封 SN-38 以形成膠量納米膠束的尺寸分布，如圖 2-3 所示。在 25℃時(shí)，平均粒徑分nm。Na2GA / SN-38-BM 的 PDI 值約為 0.255（<0.3）。另外，粒.01 mV。平均粒徑<200 nm 被認(rèn)為是適合逃避 RES 器官過濾的范吸收[90]。通常，上述 ζ-電位±30mV 可以形成穩(wěn)定的粒子[91]。負(fù)易逃避 RES 系統(tǒng)的捕獲，因此在腫瘤部位積累更多。通過 TEM 粒度，如圖 2-4 所示。納米膠束是球形的，具有中等均勻的粒度 的尺寸測量一致。通過尼羅紅嵌入的方法繪制 Na2GA/SN-38-BM（Figure2-5），得出 Na2GA/SN-38-BM 的 CMC 為 99.26μg/mLA/SN-38-BM 在水中形成的納米粒子的穩(wěn)定性，把樣品溶解在 PB

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本文編號(hào)：2782429