【摘要】：喜樹堿(CPT)是一種從中國特有的珙桐科植物喜樹(Camptotheca acuminata)中提取出來的一種天然生物堿,具有強大的抗腫瘤活性。但由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性,水溶性差,血漿蛋白結(jié)合率低,口服生物利用度較差且多變,導(dǎo)致了不可預(yù)測的毒性。E2和G2是課題組合成的兩個新型膽酸偶聯(lián)喜樹堿衍生物,在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了較佳的抗腫瘤活性,且其細胞毒性小于喜樹堿,并且對肝細胞具有良好的靶向性作用。目的:通過研究膽酸偶聯(lián)喜樹堿衍生物E2、G2在大鼠肝微粒體中的轉(zhuǎn)化情況以及它們在大鼠血漿、人工胃液、人工腸液中的穩(wěn)定性預(yù)測其在生物體內(nèi)的代謝特性。方法:首先建立并優(yōu)化了用于E2、G2定量檢測的高效液相(HPLC)方法。以此為分析手段考察了E2、G2在大鼠血漿、人工胃液、人工腸液中的穩(wěn)定性。其后使用大鼠肝微粒體體外模型對E2、G2的代謝特性進行考察,包括代謝穩(wěn)定性、酶動力學(xué)、代謝酶亞型的確定以及代謝產(chǎn)物的初步推測。結(jié)果:(1)生物穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明通過偶聯(lián)膽酸得到的喜樹堿衍生物E2、G2在大鼠血漿以及人工胃腸液中均具有高于喜樹堿的穩(wěn)定性,同時內(nèi)酯環(huán)穩(wěn)定性也顯著增強,證明偶聯(lián)膽酸能夠有效地提高喜樹堿結(jié)構(gòu)以及活性的穩(wěn)定;(2)大鼠肝微粒體代謝結(jié)果表明E2、G2在含NADPH的Ⅰ相代謝體系中具有最顯著的消除率,表明由NADPH誘導(dǎo)的Ⅰ相氧化反應(yīng)可能是E2、G2的代謝主要途徑,且與G2相比,E2的消除速率更快,但底物消除百分比略低于G2;(3)化學(xué)抑制結(jié)果表明CYP2D6、CYP21A2可能是E2主要作用酶亞型,CYP2B6參與一小部分;CYP2C8、CYP3A4、CYP2B6、CYP1A2均可能是G2相關(guān)作用酶亞型,其中CYP2C8、CYP3A4更為主要。兩者代謝相關(guān)酶亞型存在明顯差異。酶促反應(yīng)動力學(xué)結(jié)果顯示雖然E2和G2具有相似的最大反應(yīng)速率,但E2的K_m值約為G2的三倍,G2的固有清除率約為E2的三倍,表明G2與CYP酶之間具有更高的親和力,更易被代謝轉(zhuǎn)化,而E2具有更高的代謝穩(wěn)定性;(4)最終鑒定得到10個E2代謝產(chǎn)物,14個G2代謝產(chǎn)物。兩者代謝途徑高度一致,主要通過水解作用以及小比例的羥基化作用得到Ⅰ相代謝物并發(fā)生后續(xù)葡糖苷酸化得Ⅱ相代謝物進而消除,但可能由于代謝穩(wěn)定性不同存在微小差異。結(jié)論:綜上所述,相對于喜樹堿,通過偶聯(lián)膽酸得到的衍生物E2和G2在生物環(huán)境下能夠明顯提高其生物穩(wěn)定性及活性。兩者分別通過酯鍵和酰胺鍵與膽酸連接,具有高度相似的代謝途徑,但由于其結(jié)構(gòu)差異在一定程度上也影響了其代謝酶亞型,代謝穩(wěn)定性以及生成的代謝物等代謝特性有所差異。但總體而言兩者在大鼠肝微粒體作用下的固有清除率均較低,具有較強的代謝穩(wěn)定性。故猜測兩者可能能夠絕大部分以原形在體內(nèi)發(fā)揮作用,實現(xiàn)其肝靶向性,具有一定的研究價值。其中通過酰胺鍵連接得到的化合物E2在大鼠血漿,人工胃腸液與大鼠肝微粒體中均表現(xiàn)出了優(yōu)于G2的穩(wěn)定性,表明酰胺鍵作為連接鍵對于維持物質(zhì)體內(nèi)穩(wěn)定性更具優(yōu)勢。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965
【圖文】：

1 引言癌癥是現(xiàn)今社會威脅人類健康的一大難題，由人體正常細胞分裂機制發(fā)生，分裂失控導(dǎo)致，且癌細胞會隨體循環(huán)轉(zhuǎn)移到身體各個部位[1]，故其治愈率，致死率位居世界第二，全球每年約有 700 多萬人死于惡性腫瘤疾病，約占亡人數(shù) 1/3。藥物一直是控制病情的重要工具，其中化學(xué)藥物療法應(yīng)用最為，幾乎涵蓋了所有癌癥治療，然而傳統(tǒng)化療藥物主要作為烷化劑或抗代謝藥正常分裂快的細胞也有較強的抑制性，導(dǎo)致了較高的毒性，影響癌癥病人在過程中的正常生活。隨著對抗癌藥物的研究發(fā)展，一些具有抗癌作用的天然進入了人們的視線，它們具有極高效的抗癌效果且通過特殊的作用機制實現(xiàn)中效果最為明顯的為紫杉醇與喜樹堿類藥物[2]。

浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文性明顯提高。此外喜樹堿類化合物的低水溶性一直是困擾研究者們的一大難題，導(dǎo)致了已應(yīng)用于臨床或進入臨床試驗的藥物始終無法通過口服入藥。而膽酸作為內(nèi)源性的天然配基，具有良好的生物相容性，適合于口服藥物的前藥設(shè)計。通過化學(xué)手段將喜樹堿與內(nèi)源性物質(zhì)膽酸進行耦合，得到的新化合物能夠被細胞上特異性的轉(zhuǎn)運蛋白識別，提高它的吸收效率，增強藥物的活性。此外新化合物能夠被膽酸特異性轉(zhuǎn)運體識別，參與膽酸特有的肝腸循環(huán)，極大地提高生物利用度。

浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文同階段，在此簡要總結(jié)了臨床研究中具有代表性的喜樹堿衍生物（Figure 1-3）。伊立替康（CPT-11）：是第一種進入臨床試驗的水溶性半合成喜樹堿衍生物， 1996 年被食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)并用于治療結(jié)腸直腸癌和其他癌癥。體內(nèi)，CPT-11 被肝羧酸酯酶轉(zhuǎn)化為活性代謝物 SN-38。這種代謝物未發(fā)現(xiàn)伊立康的毒性反應(yīng)，包括腸毒性和中性粒細胞減少等[39]，并且顯示出比伊立替康更的細胞毒活性[40]。然而，SN-38 水溶性差，不能直接用于臨床。

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1 馮新江,張殊佳,王彥廣;(20S)-O-硒代乙酰喜樹堿衍生物的合成及其抗腫瘤活性研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2004年04期

2 申桂英;喜樹堿衍生物的制備[J];精細與專用化學(xué)品;2001年23期

3 崔嵐,王平全;抗腫瘤藥物喜樹堿衍生物的研究現(xiàn)狀及前景[J];中國藥房;2000年01期

4 劉曉梅;新的喜樹堿衍生物CPT-11對小鼠自發(fā)和實驗性轉(zhuǎn)移癌的抑制作用[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1988年06期

5 吳洪;許錦泉;高平章;呂鳳嬌;;A環(huán)取代喜樹堿衍生物抗腫瘤的構(gòu)效關(guān)系[J];泉州師范學(xué)院學(xué)報;2013年06期

6 李弟灶,王存英,潘顯道,劉紅巖,付招娣,吳松;六環(huán)喜樹堿衍生物的合成與抗腫瘤活性研究(英文)[J];藥學(xué)學(xué)報;2005年03期

7 朱杰,張萬年,周有駿,季海濤,張銳豪,朱駒,呂加國;7,9,10,11位取代喜樹堿衍生物的二維定量構(gòu)效關(guān)系研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1999年07期

8 高旭東;趙曉博;胡s

本文編號：2775243