【摘要】：制備并表征殼聚糖交聯(lián)的果膠阿霉素肝癌靶向納米傳遞體系(CS-PDC-M),并對其功能進(jìn)行評價,具體內(nèi)容如下:CS-PDC-M的制備和表征研究:采用課題組前期研究工作已得到大分子前藥PDC偶合物(結(jié)構(gòu)驗證已完成),殼聚糖的分子中含有氨基(-NH2),果膠的分子中含有羧基(-COOH),通過正負(fù)電荷交聯(lián),最終得到目標(biāo)產(chǎn)物CS-PDC-M,實現(xiàn)肝癌靶向傳遞。用掃描電鏡觀察CSPDC-M呈不規(guī)則的球形。馬爾文Zeta-Sizer納米粒度儀檢測CS-PDCM的粒徑為221.2 nm、具有均勻的粒徑分布,Zeta電位為-14.6 m V,并且穩(wěn)定性良好。紫外分光光度法表征載藥量為55.6%,包封率為23.23%。采用動態(tài)擴(kuò)散法,研究在三種不同p H模擬條件下CS-PDCM的體外釋藥率,結(jié)果表明CS-PDC-M具有一定緩釋性。CS-PDC-M的體外生物相容性研究:選取人血紅細(xì)胞為模型,采用溶血性試驗檢測DOX和CS-PDC-M的溶血率;選取牛血清白蛋白為模型,用Bradford法驗檢測阿霉素和CS-PDC-M納米傳遞體系的BSA蛋白吸附率;選取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和L02細(xì)胞為細(xì)胞模型,采用MTT法觀察DOX和CS-PDC-M對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和L02細(xì)胞的細(xì)胞存活率。結(jié)果表明與DOX相比,CS-PDC-M具有更好的細(xì)胞相容性和低毒性。CS-PDC-M的體外抗腫瘤作用研究:選取Hep G2人肝癌細(xì)胞,MCF-7人乳腺癌細(xì)胞以及A549人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞為細(xì)胞模型,采用MTT法觀察DOX和CS-PDC-M對三種癌細(xì)胞的細(xì)胞存活率。結(jié)果表明與MCF-7細(xì)胞和A549細(xì)胞比較,CS-PDC-M對Hep G2細(xì)胞的細(xì)胞毒性更大。通過熒光拍照與流式細(xì)胞術(shù)運用競爭結(jié)合實驗測定Hep G2細(xì)胞,MCF-7細(xì)胞以及A549細(xì)胞對DOX和CS-PDC-M的攝取情況,結(jié)果表明CS-PDC-M具有肝癌靶向性。通過熒光拍照與流式細(xì)胞術(shù)運用時間依賴實驗測定Hep G2細(xì)胞為細(xì)胞DOX和CS-PDCM的細(xì)胞攝取情況,結(jié)果表明CS-PDC-M具有一定緩釋性能。通過細(xì)胞黏附實驗和細(xì)胞劃痕實驗,發(fā)現(xiàn)交聯(lián)殼聚糖后,可以提高CSPDC-M對腫瘤細(xì)胞的黏附性,抑制腫瘤細(xì)胞遷移。CS-PDC-M的體內(nèi)抗腫瘤作用研究:建立Hep G2肝癌荷瘤裸鼠模型,通過尾靜脈注射給藥,以裸鼠腫瘤體積變化,體重變化,最終瘤重及生存率為指標(biāo),并對腫瘤組織與心臟組織進(jìn)行切片HE染色,考察CS-PDC-M對腫瘤的抑制作用。結(jié)果顯示CS-PDC-M對裸鼠腫瘤具有較強的抑制作用,并且降低了DOX的心臟毒性。CS-PDC-M的體內(nèi)器官損傷研究:選取SD大鼠為動物模型,尾靜脈注射給藥,通過大鼠眼眶靜脈叢取血,用全自動生化儀檢測ALT、AST、CK等血生化指標(biāo),考察CS-PDC-M的體內(nèi)器官損傷情況。結(jié)果顯示DOX組大鼠的ALT值與CK-MB值均高于空白組,而CSPDC-M組的各個參數(shù)大體上維持在正常水平,表明CS-PDC-M降低了DOX的毒性,不會對大鼠的肝臟、腎臟和心臟造成嚴(yán)重?fù)p害。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R943
【圖文】：

圖 1.1 CS-PDC-M 納米傳遞體系的示意圖Figure 1.1 Schematic illustration of CS-PDC-M.本課題通過將帶正電荷的殼聚糖與帶負(fù)電的PDC-M進(jìn)行交聯(lián)，成功制備CS-PDC-M 納米傳遞體系。CS-PDC-M 納米傳遞體系的制備與研究思路如圖 1.1 所示，本課題的實驗流程圖 1.2 所示。用掃描電鏡(FE-SEM)觀察 CS-PDC-M 的形貌。采用馬爾文納米粒度儀表征 CS-PDC-M 的粒徑大小、分布情況、Zeta 電位以及穩(wěn)定性能。紫外分光光度法(UV)檢測 CS-PDC-M 的載藥量和包封率。采用動態(tài)擴(kuò)散法，研究 CS-PDC-M 在三種不同 pH 環(huán)境下的體外釋藥性能。體外生物相容性試驗：采用 MTT 法觀察 DOX 和 CS-PDC-M 處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和 L02細(xì)胞 24h 后的細(xì)胞存活率；采用溶血性試驗檢測 DOX 和 CS-PDC-M 的溶血率；用 Bradford 法檢測阿霉素和 CS-PDC-M 納米傳遞體系的 BSA 蛋白吸附率。選取HepG2 細(xì)胞，MCF-7 細(xì)胞以及 A549 細(xì)胞為細(xì)胞模型，采用 MTT 法觀察 DOX和 CS-PDC-M 處理三個癌細(xì)胞 48h 和 72h 后的細(xì)胞毒性作用。通過熒光拍照與

圖 2.1 CS-PDC-M 的掃描電鏡圖Figure 2.1 SEM images of CS-PDC-M.-PDC-M 的粒徑及 zeta 電位測定驗采用馬爾文納米粒度儀檢測 CS-PDC-M 的粒徑大小，多分散位。圖 2.2 為 CS-PDC-M 的粒徑及其分布圖。從圖中可以 PDI 為 0.185，呈正態(tài)單峰分布，平均粒徑為 220nm 左右，一致。如圖 2.3 和表 2.1，CS-PDC-M 的平均粒徑為 220nm，徑 140.6nm 比較有所增大。CS-PDC-M 的 Zeta 電位為-14.1ma 電位-28.1mV 相比有所升高。這兩者表明殼聚糖分子中含膠分子中含有的羧基(-COOH)成功的通過正負(fù)電荷交聯(lián)后，粒徑和表面電荷有所改變。

圖 2.1 CS-PDC-M 的掃描電鏡圖Figure 2.1 SEM images of CS-PDC-M.DC-M 的粒徑及 zeta 電位測定用馬爾文納米粒度儀檢測 CS-PDC-M 的粒徑大小，多。圖 2.2 為 CS-PDC-M 的粒徑及其分布圖。從圖中可DI 為 0.185，呈正態(tài)單峰分布，平均粒徑為 220nm 左。如圖 2.3 和表 2.1，CS-PDC-M 的平均粒徑為 220n40.6nm 比較有所增大。CS-PDC-M 的 Zeta 電位為-14位-28.1mV 相比有所升高。這兩者表明殼聚糖分子中子中含有的羧基(-COOH)成功的通過正負(fù)電荷交聯(lián)徑和表面電荷有所改變。

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本文編號：2775234