【摘要】：目的:研究RIB通過PRMT5介導(dǎo)精氨酸甲基化修飾抑制胃癌生長的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制。方法:用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]比色法考察RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞生長的作用;采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞集落形成的影響;用流式細(xì)胞儀檢測RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞周期與凋亡的影響;用Western blot檢測相關(guān)蛋白表達(dá),研究其體外的抗腫瘤作用機(jī)制;用MTT法考察RIB與化療藥物聯(lián)用對胃癌細(xì)胞的作用,并研究體外聯(lián)用的抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果:1.RIB對小鼠胃癌細(xì)胞MFC和人胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖具有抑制作用,并具有時間-濃度依賴性。RIB作用MFC細(xì)胞48 h、72 h、96 h后其IC50值分別為13.70±1.52?g/mL、10.97±0.59?g/mL、5.73±0.21?g/mL。RIB治療SGC-7901細(xì)胞48 h、72 h、96 h后其IC50值分別為34.93±1.44?g/mL、28.56±1.79?g/mL、24.73±1.69?g/mL。2.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,RIB能夠抑制MFC、SGC-7901細(xì)胞集落形成。3.流式細(xì)胞儀檢測RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果顯示,RIB不能誘導(dǎo)MFC,SGC-7901細(xì)胞凋亡。4.流式細(xì)胞儀檢測RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞周期各時期的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RIB使MFC、SGC-7901細(xì)胞在G0/G1期數(shù)目減少,S期增加,因此RIB將MFC、SGC-7901細(xì)胞阻滯在S期,抑制DNA的復(fù)制,從而抑制細(xì)胞增殖。5.Western blot結(jié)果顯示,RIB處理MFC、SGC-7901細(xì)胞后,PRMT5和eIF4E蛋白低表達(dá),即RIB可能通過下調(diào)PRMT5,eIF4E的表達(dá)從而抑制胃癌細(xì)胞的生長。6.25μg/mL的RIB與10?20μg/mL的氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)用后,對抑制MFC細(xì)胞增殖有相加作用,但對抑制SGC-7901細(xì)胞增殖具有拮抗作用;25μg/mL的RIB與0.0625~0.125μg/mL的阿霉素(Adriamycin或Doxorubicin,ADM或DOX)聯(lián)用后,對抑制MFC、SGC-7901細(xì)胞增殖有相加作用;25μg/mL的RIB與濃度為0.0625?0.125μg/mL的順鉑(Cisplatin,DDP)聯(lián)用后,對抑制MFC細(xì)胞增殖具有相加作用,與0.0625?0.5μg/mL的順鉑聯(lián)用后對抑制SGC-7901細(xì)胞具有相加作用。結(jié)論:1.RIB對MFC、SGC-7901細(xì)胞的增殖具有時間-濃度依賴性的抑制作用。2.RIB能夠抑制MFC、SGC-7901細(xì)胞集落形成。3.RIB不能夠誘導(dǎo)MFC、SGC-7901細(xì)胞凋亡。4.RIB能夠?qū)FC、SGC-7901細(xì)胞阻滯在S期,阻滯DNA的復(fù)制,從而抑制細(xì)胞增殖。5.RIB可能通過下調(diào)PRMT5,eIF4E蛋白的表達(dá),達(dá)到抗胃癌細(xì)胞生長的作用。6.25μg/mL的RIB與5-FU(10?20μg/mL)聯(lián)用后,對抑制MFC細(xì)胞增殖具有相加作用,但對抑制SGC-7901細(xì)胞增殖具有拮抗效應(yīng);RIB與阿霉素(≤0.125μg/mL)或順鉑聯(lián)用后,對抑制MFC、SGC-7901細(xì)胞增殖具有相加作用。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R96
【圖文】：

碩士學(xué)位論文 RIB 通過 PRMT5 抑制胃癌生長的作用第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果TT 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)IB 對 MFC 細(xì)胞增殖的抑制作用過 MTT 法檢測 RIB 對 MFC 細(xì)胞增殖的抑制作用如圖 1-1 所示，與比，RIB 各個濃度治療組其細(xì)胞增殖率明顯降低，P < 0.001，具有與此同時，RIB 濃度越高，細(xì)胞增殖率越低，P < 0.01，各濃度間差異 表明 RIB 能夠明顯抑制 MFC 細(xì)胞的增殖，且具有濃度依賴示，MFC 細(xì)胞經(jīng) RIB 作用 48 h 72 h 96 h后其 IC50 值分別為 1310.97±0.59 g/mL 5.73±0.21 g/mL。

1-2 RIB對 SGC-7901 細(xì)胞增殖的影響（48 h 72 h 和 96 h, x s，n=32 Effects of RIBon proliferation of SGC-7901 cells ( 48 h, 72 h and 96 h, x 與陰性對照組比較，* P 0.05，** P < 0.01，*** P < 0.001（雙側(cè) t 檢驗(yàn)表 1 RIB處理 MFC 及 SGC-7901 細(xì)胞不同時間段 IC50 值( x s) IC50 of MFC and SGC-7901 cells treated with RIB at different time points (Cell linesIC50 of RIB (μg/mL)48 h 72 h 96 hMFC 13.70±1.52 10.97±0.59 5.73±0.21SGC-7901 34.93±1.44 28.56±1.79 24.73±1.6B 對胃癌細(xì)胞集落形成能力的影響

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 RIB 通過 PRMT5 抑制胃癌生長的作用及機(jī)制研究μg/mL 范圍內(nèi)具有量效關(guān)系，表現(xiàn)出一定的濃度依賴性 SGC-7901 細(xì)胞陰性對照組，RIB 3.125 μg/mL 組，6.25 μg/mL 組，12.5 μg/mL 組所對應(yīng)克隆形成率分別為 84.667%±4.163%，78.667%±1.333%，76.667%±2.000%，54.333%±2.517%，與陰性對照組相比，給藥后的集落形成減少，但低濃度組與陰性對照組相比沒有顯著性差異，中濃度組與對照組相比，P < 0.05，具有顯著性差異，高濃度組與對照組相比，P < 0.001，極具有顯著性差異 3.125 μg/mL 組與 6.25 μg/mL 組相比，集落形成減少，但差異沒有顯著性，6.25 μg/mL 與 12.5 μg/mL 組相比，集落形成減少，且 P < 0.001,差異極具有顯著性 3.125 μg/mL 組與 12.5 μg/mL 組相比，集落形成減少，P < 0.001，差異極具有顯著性，因此，RIB能夠抑制SGC-7901細(xì)胞克隆形成，且在 3.125 μg/mL 6.25 μg/mL 組范圍內(nèi)具有量效關(guān)系，表現(xiàn)出一定的濃度依賴性

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