發(fā)布時間：2020-07-27 11:35

【摘要】：藤黃酸作為我國的一類新藥,其抗癌活性已得到許多研究證實,但其具有一定的肝毒性和腎毒性,藤黃酸的毒副作用限制了其臨床應(yīng)用的發(fā)展。聯(lián)合用藥是目前常用的增強(qiáng)藥物活性和降低藥物毒副作用的手段之一。姜黃素作為一種本身具有抗癌活性的天然產(chǎn)物,研究發(fā)現(xiàn)其能增強(qiáng)許多抗癌藥物的抗癌活性,同時姜黃素還具有治療肝腎損傷的能力。藤黃酸與姜黃素的水溶性均較差,口服生物利用度低。納米膠束是一種用于解決難溶性藥物水溶性差的的新型藥物劑型,其通過核殼結(jié)構(gòu)增強(qiáng)藥物的水溶性和穩(wěn)定性,同時還能通過對膠束材料結(jié)構(gòu)修飾賦予膠束不同特性。本課題設(shè)計將藤黃酸和姜黃素聯(lián)合用藥,通過計算藥劑學(xué)方法設(shè)計和篩選能夠同時包載藤黃酸與姜黃素的具有優(yōu)良載藥能力與增溶性能的協(xié)同載藥納米膠束,用以降低藤黃酸的毒副作用、增強(qiáng)藤黃酸與姜黃素的抗癌活性、水溶性和生物利用度。本課題首先通過體外細(xì)胞存活率實驗對藤黃酸和姜黃素之間的協(xié)同抗腫瘤活性進(jìn)行考察,并通過聯(lián)合指數(shù)和金正均Q值評價藤黃酸和姜黃素間的協(xié)同抗腫瘤作用。聯(lián)合指數(shù)顯示,部分濃度的藤黃酸和姜黃素聯(lián)用組合能夠?qū)θ烁伟┘?xì)胞HepG2和SMMC-7721產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用,而所有濃度的藤黃酸和姜黃素的聯(lián)用組合對人正常肝細(xì)胞LO2均為拮抗作用。金正均Q值顯示,所有濃度的藤黃酸和姜黃素聯(lián)用組合在人肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721中均顯示出協(xié)同抗腫瘤作用,而所有濃度的藤黃酸與姜黃素聯(lián)用組合在人正常肝細(xì)胞LO2中均表現(xiàn)為拮抗或低協(xié)同作用。隨后通過Annexin V-FITC/PI試劑盒、活性氧檢測試劑盒和Westen Blot方法探究了藤黃酸與姜黃素在HepG2中產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用的可能機(jī)制。結(jié)果表明,對比單獨用藥組,藤黃酸與姜黃素聯(lián)合給藥可顯著增加HepG2細(xì)胞的凋亡率和壞死率、顯著增加HepG2細(xì)胞內(nèi)活性氧水平、顯著增加HepG2內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白cleave-caspase-3的表達(dá),在總AKT蛋白水平不變的情況下顯著減少HepG2細(xì)胞內(nèi)抗凋亡相關(guān)蛋白pAKT的表達(dá)。本課題還通過計算機(jī)藥劑學(xué)設(shè)計和篩選了能夠同時包載藤黃酸與姜黃素的協(xié)同載藥納米膠束。通過漢森溶解度參數(shù)篩選膠束疏水段,結(jié)果顯示藤黃酸與姜黃素的FloryHuggins相互作用參數(shù)為0.19,相容性良好,優(yōu)于聚己內(nèi)酯和和聚乳酸與姜黃素的Flory-Huggins相互作用參數(shù)。隨后通過分子動力學(xué)模擬研究三種膠束材料mPEG-藤黃酸、mPEG-PCL以及mPEG-PLA和藥物的結(jié)合過程與自由結(jié)合能,結(jié)果表明三種膠束材料均能與藥物形成膠束,mPEG-藤黃酸與藥物的自由結(jié)合能相對于另兩種膠束材料較強(qiáng)。計算機(jī)模擬顯示以mPEG-藤黃酸包載姜黃素制成的協(xié)同載藥納米膠束具有良好的載藥能力與增溶作用。本課題隨后合成了mPEG-藤黃酸并采用薄膜水化法制備了同時包載藤黃酸與姜黃素的協(xié)同載藥納米膠束。膠束溶液外觀澄清透徹,具有明顯的丁達(dá)爾效應(yīng);馬爾文粒度儀測得膠束粒徑為83.28±0.92 nm,投射電鏡顯示膠束在80 nm左右,大小均一,具有明顯的核殼結(jié)構(gòu);膠束對姜黃素的載藥量和包封率分別為24.46±0.41%和86.76±1.96%,膠束將藤黃酸與姜黃素在水中的溶解度分別增加383倍和2072倍,具有良好的增溶能力;膠束在溶出介質(zhì)中釋放穩(wěn)定,12小時藤黃酸與姜黃素的累計釋放率分別為21.96%和43.19%;48小時藤黃酸與姜黃素的累計釋放率分別為34.2%和59.63%;72小時藤黃酸與姜黃素的累計釋放率分別為39.45%和60.67%,膠束在溶出介質(zhì)中釋放藥物的摩爾比例具有協(xié)同作用。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R943
【圖文】：

圖 1-1 藤黃酸和姜黃素單獨給藥和聯(lián)合給藥對 HepG2 細(xì)胞存活率影響ig.1-1 Cell viability of HepG2 incubated by gambogic acid and curcumin alone and combi

圖 1-2 藤黃酸和姜黃素單獨給藥和聯(lián)合給藥對 SMMC-7721 細(xì)胞存活率影響Fig.1-2 Cell viability of SMMC-7721 incubated by gambogic acid and curcumin alone ancombined

圖 1-3 藤黃酸和姜黃素單獨給藥和聯(lián)合給藥對 LO2 細(xì)胞存活率影響Fig.1-3 Cell viability of LO2 incubated by gambogic acid and curcumin alone and combin4.2 通過聯(lián)合指數(shù)評價藤黃酸與姜黃素之間的協(xié)同作用

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2771795