【摘要】：目的 惡性腫瘤是當(dāng)今威脅人類健康的第一殺手，我國的癌癥發(fā)病率一直處于上升趨勢，腫瘤的治療是當(dāng)今學(xué)者所研究的熱點(diǎn)之一。本文以具有抗腫瘤活性的蘆薈多糖為主藥、以天然無毒可降解的殼聚糖為載體、以葉酸作為配體采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒。并利用響應(yīng)面法優(yōu)化蘆薈殼聚糖納米粒的制備工藝，同時(shí)考察蘆薈殼聚糖納米粒的表征和體外釋藥性能；修飾納米粒表面，在納米粒表面連接葉酸，使其具有靶向性，并用紅外吸收光譜檢測連接情況。通過使納米粒包載熒光染料異硫氰酸熒光素（FITC）來考察腫瘤細(xì)胞SMMC-7721對(duì)納米粒的攝取性能，證明偶聯(lián)葉酸的納米粒具有靶向性，因此攝取性能優(yōu)于普通非偶聯(lián)葉酸的納米粒。通過MTT法考察空白納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721的毒性，證明納米粒的輔料無毒性；比較蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒及蘆薈原藥在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721的活力抑制作用，證明蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒與蘆薈原藥同樣具有抗腫瘤效應(yīng)，同時(shí)證明了葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖納米粒因其具有的靶向性，優(yōu)于普通的蘆薈殼聚糖納米粒與蘆薈原藥。通過吖啶橙（AO）染色法，更加直觀的來說明空白偶聯(lián)葉酸殼聚糖納米粒載體的安全性、無毒性；包載蘆薈多糖的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721增殖有明顯的抑制作用。 方法 采用離子交聯(lián)法來制備蘆薈殼聚糖納米粒。以藥物量與殼聚糖量比例、pH、攪拌速度作為考察因素，以納米粒的包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)；采用響應(yīng)面法研究響應(yīng)值以及最佳變量的組合，篩選最佳處方工藝；并對(duì)蘆薈殼聚糖納米粒進(jìn)行體外釋放研究。利用EDC與NHS來連接葉酸與納米粒并通過紅外來檢測葉酸與納米粒的連接情況。通過MTT實(shí)驗(yàn)考察空白納米粒對(duì)細(xì)胞活力的影響并證明輔料的無毒性，比較蘆薈原藥、蘆薈殼聚糖納米粒、葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒三者對(duì)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721的活力抑制作用。將納米粒包載熒光染料異硫氰酸熒光素（FITC），考察腫瘤細(xì)胞SMMC-7721對(duì)普通納米粒及偶聯(lián)葉酸納米粒的攝取情況。通過吖啶橙（AO）染色法，考察空白偶聯(lián)葉酸殼聚糖納米粒載體與包載蘆薈的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果 采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒大小較均一，結(jié)構(gòu)完整，為球形或類球形。蘆薈殼聚糖納米粒的制備采用響應(yīng)面法設(shè)計(jì)并優(yōu)化后的處方工藝為：藥物量與殼聚糖量比例為0.14、pH為3.0、攪拌速度294r/min。以此條件制得的納米粒包封率與預(yù)測值偏差較小。蘆薈殼聚糖納米粒具有緩釋特性，體外釋放過程符合Ritger-Peppas模型。通過紅外吸收光譜檢測到葉酸與納米粒以連接偶合。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蘆薈殼聚糖納米粒及葉酸偶聯(lián)蘆薈殼聚糖對(duì)腫瘤細(xì)胞SMMC-7721有明顯的抑制作用，空白納米粒對(duì)細(xì)胞幾乎無抑制作用。細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取效果明顯，特別是偶聯(lián)葉酸的蘆薈殼聚糖納米粒更為突出。吖啶橙實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是空白的葉酸偶聯(lián)殼聚糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖無影響，包載蘆薈的葉酸偶聯(lián)殼聚糖納米粒對(duì)細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。 結(jié)論 采用離子交聯(lián)法制備蘆薈殼聚糖納米粒，并利用響應(yīng)面法設(shè)計(jì)并優(yōu)化是可行的，納米粒具有明顯的緩釋特性，納米粒在腫瘤細(xì)胞中攝取良好，其中偶聯(lián)葉酸的納米粒的攝取更加明顯具有靶向性，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯抑制作用，輔料無毒性，具有很大的研究前景。
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R944.9
【圖文】：

薈多糖制成新的劑型可以更好的發(fā)揮蘆薈多糖的抗腫瘤活性。納米粒是尺寸小于 1000 nm 的納米粒子。一般由天然高分子材料通過化學(xué)材料交聯(lián)構(gòu)成，作為新型藥物傳遞系統(tǒng)納米粒是目前研究的熱點(diǎn)。納米粒由于其特殊的性質(zhì)已廣泛應(yīng)用于抗腫瘤藥物的傳遞。一是因?yàn)槟[瘤的血管壁間隙約為 100 nm，對(duì)尺寸小于 100 nm 的粒子具有生物通透性，因此包含抗腫瘤藥物的納米�？梢詮膬�(nèi)皮組織血管中逸出進(jìn)入腫瘤內(nèi)部而發(fā)揮療效[10]。二由于納米粒的尺寸很小可以被腫瘤細(xì)胞通過吞噬作用而攝取，從而有效避免了細(xì)胞膜對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的限制。三是惡性腫瘤細(xì)胞膜的通透性增加，納米粒還可大大延長作用時(shí)間。四是將抗腫瘤藥物包裹于納米粒之中還避免了藥物與腫瘤細(xì)胞外耐藥蛋白的結(jié)合還有效抑制了腫瘤細(xì)胞的耐藥性。殼聚糖是自然界中唯一存在的堿性多糖，是甲殼素脫乙酰后的產(chǎn)物，廣泛存在于自然界中其表面有氨基帶正電具有極性強(qiáng)、易結(jié)晶等特點(diǎn)[11]。殼聚糖的結(jié)構(gòu)如下圖所示

殼聚糖釋放率測定量適量采用優(yōu)化處方制備的冷凍干燥蘆薈殼聚糖析袋中，緊密封口，放入錐形瓶中。向錐形瓶中加 7.4），采用恒溫振蕩水浴法，溫度為 37±0.5 ℃，以釋放。分別于 0.5，1，2，4，6，9，12，18，2線方法計(jì)算多糖量，并每次補(bǔ)充 10 mL 新鮮磷酸鹽結(jié) 果外觀形態(tài)及粒徑持膜的銅網(wǎng)上滴加 1~2 滴蘆薈殼聚糖納米粒，自然00EX 透射電子顯微鏡觀察載藥納米粒的形態(tài)，見殼聚糖納米粒大小較均一，結(jié)構(gòu)完整，為球形或類

檢測波長的確立多糖可與濃硫酸發(fā)生作用，水解成單糖，并與苯酚進(jìn)一步發(fā)，在一定紫外波長下具有特定吸收峰[26]。實(shí)驗(yàn)以無水葡萄糖苯酚-硫酸法測定蘆薈中蘆薈多糖的含量。分別將葡萄糖水釋至一定濃度后，滴加 5%苯酚試液，振搖 1 min，迅速加in，在 400~600 nm 波長內(nèi)進(jìn)行掃描。掃描結(jié)果如圖 4 所 處有最大吸收，而除蘆薈外的其他輔料在此波長下則不吸測波長的選擇及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王祥珍;李英勇;孫顯斌;;蘆薈治療對(duì)子宮內(nèi)膜癌survivin表達(dá)的影響[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年04期

本文編號(hào)：2768697