【摘要】：目的:研究亮菌口服液(armillariella oral solution,AOS)對(duì)5-FU(5-fluorouracil,5-FU)導(dǎo)致小鼠腸黏膜損傷的影響及可能的機(jī)制。方法:60只C57BL/6小鼠被隨機(jī)分為6組:正常組,模型組,亮菌口服液低劑量組(1 ml/kg),中劑量組(5 ml/kg),高劑量組(10 ml/kg),陽性對(duì)照組(雙歧桿菌450 mg/kg)。正常組予以生理鹽水進(jìn)行腹腔注射7天,并于腹腔注射前1周開始予以生理鹽水灌胃(共14天),模型組、亮菌口服液組和陽性對(duì)照組均接受5-FU腹腔注射7天(50 mg/kg),分別于化療前1周開始接受生理鹽水、亮菌口服液及雙歧桿菌溶液灌胃,共14天。治療過程中觀察小鼠飲食、活動(dòng)、毛發(fā)、體重等一般情況,治療結(jié)束24小時(shí)后處死小鼠。小鼠腸組織用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色檢測(cè)腸黏膜損傷情況;異硫氰酸熒光素-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-Dextran)示蹤法檢測(cè)腸黏膜通透性;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血漿中內(nèi)毒素含量;細(xì)菌平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)腸道細(xì)菌移位情況;免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)腸道緊密連接蛋白帶狀閉合蛋白-1(zonula occluden 1,ZO-1),咬合蛋白Occludin,腸隱窩細(xì)胞增殖抗原Ki-67,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase-3),富含亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5(leucinerich repeat containing G protein-coupled receptor5,Lgr5)的表達(dá)情況;TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(tdt-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)檢測(cè)腸隱窩細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果:1.模型組HE染色提示小鼠腸黏膜損傷顯著,絨毛萎縮融合,隱窩加深或消失,大量炎性細(xì)胞浸潤;與模型組相比,AOS中、高劑量組小鼠腸黏膜損傷減輕,絨毛和隱窩部分恢復(fù),少量炎性細(xì)胞浸潤。2.與正常組相比,模型組血漿中FITC-Dextran及內(nèi)毒素含量顯著升高(P0.05),腸道細(xì)菌移位率明顯升高(P0.01);與模型組相比,AOS中、高劑量組小鼠血漿中FITC-Dextran及內(nèi)毒素含量顯著降低(P0.05),腸道細(xì)菌移位率明顯降低(P0.05)。3.與正常組相比,免疫組織化學(xué)染色示模型組腸道緊密連接蛋白ZO-1,Occludin的表達(dá)明顯下降(P0.01),Ki-67及Lgr5表達(dá)降低(P0.01),Caspase-3表達(dá)升高(P0.01);與模型組相比,AOS中、高劑量組小鼠ZO-1,Occludin蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01),Ki-67及Lgr5表達(dá)升高(P0.01),Caspase-3表達(dá)降低(P0.01)。4.與正常組相比,TUNEL染色提示模型組腸隱窩凋亡細(xì)胞增加(P0.01);而與模型組相比,經(jīng)亮菌口服液治療后腸隱窩的凋亡細(xì)胞明顯減少(P0.01)。結(jié)論:1.亮菌口服液能緩解5-FU導(dǎo)致的小鼠腸黏膜損傷,可能與降低腸黏膜的通透性,抑制內(nèi)毒素和細(xì)菌移位有關(guān);2.亮菌口服液能緩解5-FU導(dǎo)致的小鼠腸黏膜損傷,可能與上調(diào)腸隱窩細(xì)胞中Lgr5的表達(dá),來抑制腸隱窩細(xì)胞凋亡,恢復(fù)隱窩細(xì)胞增殖有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

小鼠出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，可能與藥物反應(yīng)及灌胃處理不當(dāng)有關(guān)：模型組小鼠出現(xiàn) 3 只死亡，亮菌口服液低劑量組死亡 2 只，中劑量組死亡 1 只，高劑量組無死亡，雙歧桿菌組死亡 1 只，正常組小鼠無死亡。故后續(xù)檢測(cè)結(jié)果從化療結(jié)束后存活小鼠中隨機(jī)選取 6 只進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。3.1 各組小鼠一般情況正常組小鼠飲食、活動(dòng)正常，受刺激后反應(yīng)靈敏，毛發(fā)有光澤，體質(zhì)量持續(xù)增加，大便正常。模型組小鼠化療后第 5、6 天，飲食及活動(dòng)減少，受刺激后反應(yīng)遲鈍，體質(zhì)量呈明顯下降趨勢(shì)（P<0.01），有中度或重度腹瀉癥狀。與模型組相比，AOS 中、高劑量組及雙歧桿菌組小鼠體質(zhì)量下降程度減輕（P<0.05），腹瀉程度也明顯減輕（P<0.05），受刺激反應(yīng)和活動(dòng)尚可；低劑量 AOS 組與模型組相比，小鼠體質(zhì)量變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見圖 1A-B）。

而模型組小腸腸管顏色發(fā)黑，彈性較差，充血及水腫情況明顯；AOS高劑量組及雙歧桿菌組可見腸管損傷明顯減輕，腸腔輕、中度水腫，無明顯出血，彈性尚可。見圖2。圖 2 各組小鼠腸組織肉眼觀察Fig 2 Visual observation of intestinal tissues in each group of miceA：正常組；B：模型組；C：AOS 低劑量組 1 ml/kg；D：AOS 中劑量組 5 ml/kg ；E：AOS高劑量組 10 ml/kg ；F：雙歧桿菌組 450 mg/kg3.3 各組小鼠腸組織病理改變通過HE染色檢測(cè)小鼠空腸組織病理學(xué)變化。如圖3所示，與正常組相比，模型組有嚴(yán)重的組織損傷，包括絨毛的萎縮，變形或者消失，腸隱窩加深，甚至丟失，炎癥細(xì)胞浸潤，及細(xì)胞空泡化和水腫。然而，中劑量組絨毛高度有所恢復(fù)，隱窩變淺，炎癥細(xì)胞浸潤減少，高劑量組絨毛高度恢復(fù)，隱窩排列整齊，各層結(jié)構(gòu)相對(duì)清晰完整。由此提示亮菌口服液給藥組緩解了5-FU誘導(dǎo)的腸黏膜損傷，并且可能呈現(xiàn)劑量依賴性。另外，雙歧桿菌組也明顯緩解了化療所致的腸黏膜損傷。同時(shí)，通過組織病理學(xué)評(píng)估，AOS治療組腸黏膜鏡下評(píng)分分別為2.33

高劑量組 10 ml/kg ；F：雙歧桿菌組 450 mg/kg3.3 各組小鼠腸組織病理改變通過HE染色檢測(cè)小鼠空腸組織病理學(xué)變化。如圖3所示，與正常組相比，模型組有嚴(yán)重的組織損傷，包括絨毛的萎縮，變形或者消失，腸隱窩加深，甚至丟失，炎癥細(xì)胞浸潤，及細(xì)胞空泡化和水腫。然而，中劑量組絨毛高度有所恢復(fù)，隱窩變淺，炎癥細(xì)胞浸潤減少，高劑量組絨毛高度恢復(fù)，隱窩排列整齊，各層結(jié)構(gòu)相對(duì)清晰完整。由此提示亮菌口服液給藥組緩解了5-FU誘導(dǎo)的腸黏膜損傷，并且可能呈現(xiàn)劑量依賴性。另外，雙歧桿菌組也明顯緩解了化療所致的腸黏膜損傷。同時(shí)，通過組織病理學(xué)評(píng)估，AOS治療組腸黏膜鏡下評(píng)分分別為2.33

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1 高紅;;亮菌口服液預(yù)防抗結(jié)核藥物肝損害療效觀察[J];中國誤診學(xué)雜志;2011年18期

2 王小明;李躍旗;宮Z

本文編號(hào)：2766398