【摘要】：目的探討大鼠急性PQ中毒后腦組織內質網應激和凋亡的變化；明確UTI和/或Salubrinal對急性PQ中毒大鼠腦組織的影響及作用機制。 方法選用Wistar大鼠250只，體重(250±10)g，按雌雄各半原則隨機分為5組，每組各50只。Con組：空白對照組，一次性給予1ml生理鹽水灌胃，1ml生理鹽水2次/日腹腔注射；PQ組：PQ染毒組，一次性給予PQ溶液40mg/kg灌胃，1ml生理鹽水2次/日腹腔注射；PU組：UTI處理組，大鼠PQ中毒后給予UTI（12萬U/kg）2次/日腹腔注射；PS組：Salubrinal處理組，于中毒后第1、3、5天給予Salubrinal（1.0mg/kg）1次/日腹腔注射，一次1ml生理鹽水腹腔注射；PUS組：UTI＋Salubrinal處理組，給予UTI（12萬U/kg）2次/日腹腔注射，中毒后1、3、5天給予Salubrinal（1.0mg/kg）1次/日腹腔注射。（注：為保證每日2次腹腔注射，Salubrinal給藥時與UTI同時腹腔注射，UTI0.5ml、Salubrinal0.5ml，體積共1ml）。觀察大鼠一般狀態(tài)，于中毒后第7天取大腦，行HE染色觀察腦組織中海馬區(qū)形態(tài)學變化，免疫組織化學法檢測腦組織中CHOP的表達，TUNEL染色檢測海馬神經元凋亡情況，Western blot法檢測腦組織中GRP78、caspase-3蛋白的表達，行統(tǒng)計學分析。 結果①HE染色結果顯示：Con組顯示海馬神經細胞排列整齊緊密，胞質豐富，核仁清晰。PQ染毒組海馬區(qū)多數(shù)細胞濃縮，核仁消失。PU組海馬區(qū)個別細胞濃縮，核仁消失。PS組海馬神經細胞排列松散，大多數(shù)細胞濃縮，核仁消失。PUS組部分海馬細胞濃縮，核仁消失。②Western Blot結果顯示：與Con組相比，PQ組GRP78蛋白含量表達增高（P0.05)；與PQ組相比，PU組、PS組和PUS組GRP78蛋白含量表達降低（P0.05)；與PU組相比， PS組和PUS組中GRP78蛋白含量表達增高（P0.05)；與PS相比，PUS組GRP78蛋白含量表達降低（P0.05)。③Western Blot結果顯示：與Con組比較，PQ組CHOP蛋白表達量明顯增高（P0.05）；與PQ組相比，PU組、PS組和PUS組CHOP表達降低（P0.05）；與PU組相比，PS組CHOP表達降低（P0.05)，PUS組CHOP表達無明顯變化（P＞0.05)；與PS組相比，PUS組中CHOP表達降低（P0.05)。④免疫組化結果顯示：與Con組比較，PQ組CHOP蛋白表達量明顯增高（P0.05）；與PQ組相比，PU組、PS組和PUS組CHOP表達降低（P0.05）；與PU組相比，PS組CHOP表達增高（P0.05)；PUS組CHOP表達無明顯變化（P＞0.05)。與PS組相比，PUS組中CHOP表達降低（P0.05)。⑤TUNEL檢測結果顯示：對照組可見極少量TUNEL染色陽性細胞。與Con組相比，PQ組細胞凋亡數(shù)明顯增高（P0.05）；與PQ組相比，PU組、PS組與PUS組細胞凋亡數(shù)減少（P0.05）；與PU組相比，PS組和PUS組細胞凋亡數(shù)增加（P0.05)；與PS相比，PUS組細胞凋亡數(shù)減少（P0.05)。 結論①急性PQ中毒誘發(fā)大鼠腦組織ERS和細胞凋亡的發(fā)生。②UTI抑制急性PQ中毒大鼠腦組織ERS和細胞凋亡，對腦組織有保護作用。③Salubrinal抑制急性PQ中毒大鼠腦組織ERS和細胞凋亡，對大鼠腦有損傷作用，其機制尚待進一步探討。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R965;R595.4
【圖文】：

圖 4.1 實驗大鼠腦織海馬區(qū) HE 染色結果（40×）4.3 大鼠腦海馬區(qū) Western blot 結果4.3.1 Western blot 法檢測大鼠腦組織中 GRP78 的表達Western Blot 結果：測定 GRP78 蛋白的電泳條帶灰度值，以各組 GRP78 蛋白的灰度值和與之相對應的內參 β-actin 的灰度值的比值作為 GRP78 蛋白表達的相對值，行統(tǒng)計學分析，做直方圖。與 Con 組相比，PQ 組 GRP78 蛋白含量表達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；與 PQ 組相比，PU 組 GRP78 蛋白含量表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)， PS 組、PUS 組 GRP78 蛋白含量表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；與 PU 組相比，PUS 組中 GRP78 蛋白含量表達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。與 PS 相比，PUS 組 GRP78 蛋白含量表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。（圖 4.2，圖 4.3）。

圖 4.1 實驗大鼠腦織海馬區(qū) HE 染色結果（40×）4.3 大鼠腦海馬區(qū) Western blot 結果4.3.1 Western blot 法檢測大鼠腦組織中 GRP78 的表達Western Blot 結果：測定 GRP78 蛋白的電泳條帶灰度值，以各組 GR白的灰度值和與之相對應的內參 β-actin 的灰度值的比值作為 GRP78 蛋白相對值，行統(tǒng)計學分析，做直方圖。與 Con 組相比，PQ 組 GRP78 蛋白達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；與 PQ 組相比，PU 組 GRP78 蛋表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)， PS 組、PUS 組 GRP78 蛋白含降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；與 PU 組相比，PUS 組中 GRP78 蛋表達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。與 PS 相比，PUS 組 GRP78 蛋白達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。（圖 4.2，圖 4.3）。

圖 4.3 實驗大鼠腦海馬區(qū) GRP78 的相對表達量4.3.2 Western blot 法檢測大鼠腦組織中 caspase-3 的表達Western Blot 結果：測定 Cleaved-caspase3 的電泳條帶灰度值，以各Cleaved-caspase3 的灰度值和與之相對應的內參 β-actin 的灰度值的比值作Cleaved-caspase3 表達的相對值，做直方圖。與 Con 組相比，PQ 組 Cleaved-casp蛋白表達增高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。與 PQ 組相比，PU 組、PS 組PUS 組中 Cleaved-caspase3 蛋白含量表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；PU 組相比，PS 組 Cleaved-caspase3 蛋白含量表達增高，差異有統(tǒng)計學意（P<0.05)，PUS 組 Cleaved-caspase3 蛋白含量表達無明顯變化（P＞0.05）；PS 組相比，PUS 組 Cleaved-caspase3 蛋白含量表達降低，差異有統(tǒng)計學意（P<0.05) 。（圖 4.4，圖 4.5）。

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 高捷,武英;烏司他丁對腦缺血再灌注后大鼠海馬區(qū)神經細胞凋亡及學習記憶功能的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年13期

2 陳偉峰;劉德紅;何衛(wèi)平;周丹;;烏司他丁對大鼠全腦缺血再灌注后NF-κB的影響[J];廣西中醫(yī)學院學報;2006年02期

3 江蓮,戎小平,孟繁Y

本文編號：2761906