【摘要】：目的:我們已知右美沙芬是一種臨床使用十分廣泛而安全的止咳劑,結(jié)構(gòu)上屬于嗎啡類藥物,鑒于其右旋結(jié)構(gòu),故右美沙芬與阿片類受體親和力弱,很難形成成癮性。而既往的研究已經(jīng)證實(shí)通過(guò)抑制NOX2活性,減少ROS及其他促炎因子的合成,減少LPS引起的小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,右美沙芬具有對(duì)抗神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng),預(yù)防神經(jīng)退行性變的作用。同時(shí)還可以減輕膿毒癥模型下,急性肝衰竭的死亡率但上述研究目標(biāo)是觀察長(zhǎng)期神經(jīng)元的保護(hù)效應(yīng)。而關(guān)于右美沙芬在LPS引起的感染急性期病態(tài)行為的作用,以及NOX2-/-模型中,觀察短期病態(tài)行為的研究目前罕有報(bào)道。所以我們提出假設(shè)右美沙芬是否在LPS誘導(dǎo)的病態(tài)行為中通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)(中樞),達(dá)到緩解病態(tài)行為的目的。材料與方法:1.(1)分組:野生型(C57BL/6J)小鼠隨機(jī)分為2組(A組,B組);NOX2基因敲除(Cybb)小鼠隨機(jī)分為2組(C組,D組)。(2)處理方式:A組.野生型對(duì)照組(WT-saline)。B組.野生型內(nèi)毒素組(WT-LPS)。C組.NOX2基因敲除對(duì)照組(Cybb-saline)。D組.NOX2基因敲除內(nèi)毒素組(Cybb-LPS)。PBS(100ul/20g)及內(nèi)毒素(2.5mg/kg)均為腹腔內(nèi)注射。2.病態(tài)行為的觀察及曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)小鼠分別在注射內(nèi)毒素后每3小時(shí)觀察一次病態(tài)行為學(xué)評(píng)分,并測(cè)量體重變化。主要觀測(cè)指標(biāo):觸碰反應(yīng),觸碰后移動(dòng)距離,豎毛,眼瞼下墜,眼睛分泌物。實(shí)驗(yàn)小鼠注射PBS或LPS后9小時(shí),給予病態(tài)行為評(píng)分后立即進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn),測(cè)量時(shí)間20分鐘。3.實(shí)驗(yàn)小鼠在注射內(nèi)毒素溶液/PBS溶液后第6,9,12,24小時(shí)予以灌流取腦組織,并行免疫組織化學(xué)染色(DAB法)。4.ELISA方法測(cè)量腦組織的炎癥因子蛋白表達(dá)水平(IL-1β,IL-6);Real-time PCR測(cè)量腦組織的炎癥因子基因表達(dá)水平(IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,iNOS,NOX2,CD-11b)。5.(1)分組:野生型(C57BL/6J)小鼠隨機(jī)分為4組(A組,B組,C組,D組)。(2)處理方式:A組.野生型對(duì)照組(WT-Saline)。B組.野生型內(nèi)毒素組(WT-LPS)。C組.野生型內(nèi)毒素聯(lián)合右美沙芬組(WT-LPS/DM)。D組.野生型右美沙芬組(WT-DM)。PBS(100ul/20g)及內(nèi)毒素(2.5mg/kg)均為腹腔內(nèi)注射。DM皮下注射(12.5mg/kg、100uL/20g)。6.病態(tài)行為的觀察及曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)小鼠分別在注射內(nèi)毒素后每3小時(shí)觀察一次病態(tài)行為學(xué)評(píng)分,并測(cè)量體重變化。主要觀測(cè)指標(biāo):觸碰反應(yīng),觸碰后移動(dòng)距離,豎毛,眼瞼下墜,眼睛分泌物。實(shí)驗(yàn)小鼠注射PBS或LPS后9小時(shí),給予病態(tài)行為評(píng)分后立即進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn),測(cè)量時(shí)間20分鐘。7.實(shí)驗(yàn)小鼠在注射內(nèi)毒素溶液/PBS溶液后第6,9,12,24小時(shí)予以灌流取腦組織,并行免疫組織化學(xué)染色(DAB法)。ELISA方法測(cè)量腦組織的炎癥因子蛋白表達(dá)水平(IL-1β,IL-6,TNF-α);Real-time PCR測(cè)量腦組織的炎癥因子基因表達(dá)水平(IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,iNOS,NOX2,CD-11b)。結(jié)果:1.野生型小鼠及NOX2~(-/-)小鼠均接受LPS的腹腔注射后,分別從3小時(shí)開(kāi)始到24小時(shí)結(jié)束每3小時(shí)觀察一次,兩組小鼠都可觀察到病態(tài)行為,而且均是從3小時(shí)開(kāi)始逐漸加重,直至15小時(shí),病態(tài)行為達(dá)到最嚴(yán)重的程度。隨后病態(tài)行為逐漸減輕,但直至24小時(shí),兩組小鼠仍存留不同程度的病態(tài)行為。其中NOX2~(-/-)小鼠表現(xiàn)出的病態(tài)行為較野生型小鼠的病態(tài)行為輕微,而在注射LPS后的第9,12,15小時(shí),NOX_2~(-/-)小鼠的病態(tài)行為評(píng)分低于WT小鼠的病態(tài)行為,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。而曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中,NOX_2~(-/-)小鼠在第9小時(shí)的各項(xiàng)指標(biāo)高于WT小鼠在第9小時(shí)的各項(xiàng)指標(biāo)(總活動(dòng)次數(shù)506.6±206.7 vs 293.5±183.6;走動(dòng)次數(shù)437.8±184.2 vs 313±210.8;總活動(dòng)時(shí)間138.3±56.6s vs 71.9±43.5s;移動(dòng)距離681.2±237.2cm vs 252.4±170.3cm),兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.野生型小鼠及NOX2~(-/-)小鼠均接受LPS的腹腔注射后,前者黑質(zhì)紋狀體部位的小膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)可活化的跡象,通過(guò)CD11b的染色可以觀察到,小膠質(zhì)細(xì)胞形狀體積的增大,觸角的增多,染色深染;對(duì)比野生型小鼠,NOX2~(-/-)小鼠黑質(zhì)紋狀體部位的小膠質(zhì)細(xì)胞活化不甚明顯,細(xì)胞體積較WT-LPS組明顯縮小,細(xì)胞分叉減少,染色較WT-LPS淺淡,同時(shí)與NOX2~(-/-)注射生理鹽水組對(duì)比,NOX2~(-/-)注射LPS的小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞并且顯示出激活的跡象。同時(shí)我們還分析了兩組小鼠分別給LPS后腦內(nèi)炎癥介質(zhì)(IL-1β及IL-6)的時(shí)間變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)NOX2~(-/-)小鼠注射LPS后中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的IL-1β及IL-6均較野生型小鼠注射LPS后中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的IL-1β及IL-6水平降低(IL-1β:29.58±4.9 pg/ml vs 40.17±3.22pg/ml;IL-6:19.2±2.1 pg/ml vs 25.93±2.61 pg/ml)(p0.05)。3.腹腔注射LPS后,分次皮下注射右美沙芬后(LPS注射后3小時(shí),6小時(shí),9小時(shí)),每3小時(shí)觀察一次病態(tài)行為。單純注射LPS組的小鼠,其病態(tài)行為評(píng)分從第3小時(shí)開(kāi)始,隨時(shí)間的推移逐漸增加,直至注射LPS后的第15小時(shí),病態(tài)行為評(píng)分達(dá)到最高,此后逐漸下降,至24小時(shí),仍存在一定程度的病態(tài)行為。與之相比,注射LPS及右美沙芬組的小鼠,其病態(tài)行為隨時(shí)間推移,其升高的程度較單純注射LPS組小鼠,表現(xiàn)輕微;尤其是在第6小時(shí),第9小時(shí)及第15小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn),兩組之間的病態(tài)行為評(píng)分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。而曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中,LPS聯(lián)合DM組小鼠在第9小時(shí)的各項(xiàng)指標(biāo)高于單純LPS處理組小鼠在第9小時(shí)的各項(xiàng)指標(biāo)(總活動(dòng)次數(shù)785±194 vs 340±91;走動(dòng)次數(shù)711±168vs 294±78;總活動(dòng)時(shí)間194±39.8s vs 60±10.7s;移動(dòng)距離833±179cm vs332±96.4cm),兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.我們通過(guò)ELISA方法連續(xù)測(cè)定(注射LPS后的第3小時(shí),第6小時(shí)及第9小時(shí))小鼠腦組織內(nèi)的IL-1β,IL-6及TNF-α的含量。發(fā)現(xiàn)在腹腔注射LPS后的第9小時(shí)(即第三次皮下注射右美沙芬時(shí)間點(diǎn)),測(cè)定兩組小鼠腦組織內(nèi)的IL-1β及IL-6的含量(單純LPS組及LPS聯(lián)合右美沙芬組)有差異。聯(lián)合注射LPS及右美沙芬組的小鼠腦組織內(nèi)第9小時(shí)的IL-1β及IL-6水平比單純注射LPS小鼠腦組織內(nèi)第9小時(shí)的IL-1β,IL-6水平降低(IL-1β:39.41±4.3pg/ml vs 50.73±1.82pg/ml;IL-6:17.9±2.67pg/ml vs 24.7±2.20pg/ml)(p0.05);同時(shí)我們通過(guò)免疫組化染色還發(fā)現(xiàn),腹腔注射LPS后的第24小時(shí),單純腹腔注射LPS的小鼠,腦組織內(nèi)黑質(zhì)紋狀體處的小膠質(zhì)細(xì)胞活化程度明顯,呈現(xiàn)出體積增大,偽足增多,胞內(nèi)染色深染(CD11b)的表現(xiàn);而聯(lián)合注射LPS及右美沙芬組的小鼠,在第24小時(shí),腦組織內(nèi)黑質(zhì)紋狀體處的小膠質(zhì)細(xì)胞染色發(fā)現(xiàn),小膠質(zhì)細(xì)胞體積增大較前者減弱,偽足數(shù)量較單純注射LPS組小鼠減少,同時(shí)CD11b的染色較單純注射LPS組小鼠輕微。結(jié)論:NOX2~(-/-)模型中,腹腔注射LPS后引起的短期病態(tài)行為比野生型小鼠的病態(tài)行為輕微,提示NOX2~(-/-)可以減輕腹腔注射LPS引起的小鼠的病態(tài)行為;同時(shí)使用NOX2的抑制劑右美沙芬,可以通過(guò)減輕中樞炎癥反應(yīng)(降低IL-1β,IL-6水平),達(dá)到緩解病態(tài)行為的作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 二、NOX2 在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的中樞系統(tǒng)炎癥中的組（Cybb-LPS）6 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，9 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，12 小時(shí)時(shí)間點(diǎn) IL-1β 分別(55.02±3.34 pg/ml, 29.58±4.9 pg/ml, 34.98±3.54 pg/ml, p<0.0001)(圖 2.3 A)。9時(shí)間點(diǎn)，四組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)9h(3,36)=38.47, p<0.001，WT 小鼠LPS 后，IL-1β 較對(duì)照組上升；但是 NOX2-/-內(nèi)毒素組產(chǎn)生的 IL-1β 比野生型素組產(chǎn)生的 IL-1β 降低（B 組：40.17±3.22 pg/ml， D 組：29.58±4.9 pq=5.133,p=0.028）。提示注射 LPS 后，Cybb （NOX2-/-）可以減少 IL-β 的產(chǎn)（圖 2.3 B）AB

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 四、右美沙芬在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的 CNS 炎p<0.0001)。D 組. 野生型右美沙芬組（WT-DM）6 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，9 小12 小時(shí)時(shí)間點(diǎn) IL-1β 分別為：(10.36±1.6pg/ml, 12.59±2.24 pg/ml, 1pg/ml, p=0.434)。(圖 4.3 A)。9 小時(shí)時(shí)間點(diǎn)，四組之間差異有統(tǒng)計(jì)F9h(3,36)=46.39, p<0.001；其中 C 組 IL-1β 水平低于 B 組(B 組：50.73 ±C 組：39.41±4.3 pg/ml, q=4.077,p=0.013)。提示 WT 小鼠注射 LPS 后 9 較對(duì)照組上升；而 LPS 聯(lián)合 DM 組產(chǎn)生的 IL-1β，比單純 LPS 組產(chǎn)減低。(圖 4.3 B)。A B

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王菲;;血小板是病態(tài)行為的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素[J];肝臟;2018年02期

2 阮晨暉;;心理投射下的病態(tài)行為模式[J];健康之路;2017年05期

3 魯銳;當(dāng)今社會(huì)病態(tài)行為的探析[J];社會(huì);1995年07期

4 戴加華,高愛(ài)軍;企業(yè)病態(tài)行為的透視[J];經(jīng)營(yíng)與管理;1990年02期

5 ;經(jīng)常對(duì)親人發(fā)脾氣是一種病態(tài)[J];僑園;2011年Z1期

6 ;性感過(guò)敏是怎么回事[J];伴侶(A版);2006年03期

7 趙婷;;“微博病”的社會(huì)心理學(xué)分析[J];青年與社會(huì);2013年04期

8 閆長(zhǎng)山;李惠良;;磨牙:一種病態(tài)行為[J];醫(yī)藥與保健;2013年04期

9 姜澤艷;;淺談精神病患者病態(tài)時(shí)的心理護(hù)理[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2016年17期

10 魏皓嚴(yán);;據(jù)我觀察的關(guān)于空間的我女兒[J];住區(qū);2013年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 張朝;于宗富;秦敬民;;青少年網(wǎng)絡(luò)成癮及防預(yù)對(duì)策[A];中國(guó)心理衛(wèi)生協(xié)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2003年

2 肖紅月;朱菲;;老年癡呆的相關(guān)健康教育[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)全國(guó)第12屆老年護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 李勇杰;朱宏偉;陶蔚;胡永生;;疼痛的評(píng)估與治療策略[A];2016中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)疼痛醫(yī)師專業(yè)委員會(huì)年會(huì)資料匯編[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 華中師范大學(xué)新聞傳播學(xué)院院長(zhǎng) 江作蘇;淺議“網(wǎng)絡(luò)病夫”的療治[N];中國(guó)新聞出版廣電報(bào);2017年

2 本報(bào)記者　 吳紅梅　蔣廷玉;五院士痛斥科技界“病態(tài)行為”[N];新華日?qǐng)?bào);2007年

3 張稼;增強(qiáng)免疫力藥物會(huì)誘發(fā)抑郁（上）[N];大眾科技報(bào);2001年

4 上海市社會(huì)團(tuán)體管理局 王勁穎;社會(huì)組織應(yīng)在預(yù)防腐敗中發(fā)揮積極作用[N];中國(guó)改革報(bào);2008年

5 趙海燕;他想洗掉什么[N];北京科技報(bào);2004年

6 魯庸興;“謀”而“實(shí)”方成事[N];中國(guó)工商報(bào);2015年

7 譚年瓊;美科學(xué)家發(fā)現(xiàn)人腦“賭博區(qū)域”,有助治賭癮[N];新華每日電訊;2006年

8 航空總醫(yī)院心身醫(yī)學(xué)科 喻小念;雙十一搶購(gòu) 謹(jǐn)防不良心理作祟[N];健康報(bào);2017年

9 記者 白竟楠　呂擇;同性戀?zèng)]病 “恐同癥”才是“病”？[N];北京科技報(bào);2014年

10 程奎星;懂得包容 城市才能更美好[N];遼寧日?qǐng)?bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李毅;NADPH氧化酶2及右美沙芬在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的病態(tài)行為中的作用研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 李珊珊;內(nèi)皮型一氧化氮合酶缺失對(duì)缺血性腦卒中后病態(tài)行為的影響[D];廣東藥科大學(xué);2016年

2 王康秀;校園“霸凌”研究[D];蘇州大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2761428