發(fā)布時(shí)間：2020-07-17 23:27

【摘要】：芽孢桿菌種類繁多,分布廣泛,其次級(jí)代謝產(chǎn)物具有多種生物活性。本研究針對(duì)一株來源于石斛的拮抗細(xì)菌——賴氨酸芽孢桿菌He14,通過生物活性初篩實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵液對(duì)植物病原真菌具有拮抗作用。為了研究菌株He14發(fā)酵液的抑菌機(jī)理,本研究開展了以下工作:1、將He14液體發(fā)酵后進(jìn)行抑真菌活性實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明該菌的發(fā)酵液對(duì)于常見植物病原真菌和部分動(dòng)物病原真菌的生長(zhǎng)有抑制作用,綜合考慮發(fā)酵液對(duì)病原真菌的抑制率和病原真菌的生長(zhǎng)速率,篩選出辣椒灰霉病菌作為后期活性跟蹤實(shí)驗(yàn)的指示菌;對(duì)菌株He14及其發(fā)酵液進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中的活性物質(zhì)具有遺傳穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性和紫外穩(wěn)定性。2、分別使用萃取、沉淀、大孔吸附樹脂對(duì)發(fā)酵液中的活性成分進(jìn)行富集,發(fā)現(xiàn)使用大孔吸附樹脂LX-60預(yù)處理發(fā)酵液可最大程度的保留其抑真菌活性成分;通過使用硅膠柱常壓分離、中壓柱分離等方式,進(jìn)一步對(duì)發(fā)酵液粗產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,最終從菌株He14的發(fā)酵液中分離得到10個(gè)化合物。通過波譜技術(shù)(MS,~1H-NMR,~(13)C-NMR),并結(jié)合SicFinder Scholar、Antibase數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的比對(duì)結(jié)果確定了5個(gè)化合物的結(jié)構(gòu),分別為Triphenylmethanol(化合物1)、Palmitic acid(化合物2)、3,3’-Diindolymethane(化合物4)、Pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione(化合物8)和Phenylacetic acid(化合物10)。3、對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抗真菌活性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)化合物8與化合物10對(duì)供試病原真菌的生長(zhǎng)具有抑制效果�；衔�10對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的抑制效果較強(qiáng),對(duì)該病原真菌的生長(zhǎng)不僅有抑制作用,還對(duì)已生長(zhǎng)的菌絲有消融作用。另外,通過反復(fù)硅膠柱層析得到的混合物Ⅰ對(duì)辣椒灰霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌及須毛癬菌的生長(zhǎng)有抑制作用。綜上所述,本文研究了拮抗菌株賴氨酸芽孢桿菌He14的抑真菌活性及其發(fā)酵液的穩(wěn)定性,并分離鑒定出兩種具有抑真菌活性的化合物,本研究對(duì)分離純化這類化合物提供了優(yōu)化工藝的參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R915
【圖文】：

貴州大學(xué) 2019 屆碩士研究生畢業(yè)論文類化合物質(zhì)與氨基酸的化合物或復(fù)合體，是一類重要的抗菌，且以來源于細(xì)菌居多。脂肽類化合物的發(fā)現(xiàn)最早人首次從枯草芽孢桿菌株發(fā)現(xiàn)呈晶狀的脂肽結(jié)構(gòu)如圖 1-1，且研究發(fā)現(xiàn)，Surfactin 具有抗病毒、的能力[54]。之后不斷有學(xué)者從芽孢桿菌中分離到脂粉芽孢桿菌 B10-6-1 中分離出脂肽類抗生素 C14 Baycin D，兩種抗生素可用于抑制黃曲霉菌的生長(zhǎng)[55]。桿菌發(fā)酵液中的脂肽類物質(zhì)可以抑制大腸桿菌的生

性的磷、鉀鹽，供作物吸收利用[61]。張愛民篩選出一株對(duì)ium dahliae)、棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)、棉oxysporum)、小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)和小ulmorum)均有抑菌活性的芽孢桿菌 CX-7，通過高效液相酵液，結(jié)果表明該菌可分泌草酸、酒石酸、檸檬酸和蘋酮類化合物來源于乙�；捅；鶅烧叩木酆�，可作為抗細(xì)菌藥、抗抗癌藥、免疫抑制劑和降血脂藥物，具有極大商業(yè)價(jià)值。95F26 發(fā)酵液中分離得到化合物 95F26A(如圖 1-2)，經(jīng)鑒物，活性分析表明該化合物對(duì)金黃色葡萄球菌、短小芽孢生長(zhǎng)具有較明顯的抑制作用[63]。桑建偉等從香蕉植株根部抑制真菌活性的解淀粉芽孢桿菌，該菌的發(fā)酵液n、Difficidin 和 Bacillaene 三類聚酮類化合物[64]。

圖 2-1 賴氨酸芽孢桿菌 He14 發(fā)酵液對(duì)供試動(dòng)植物病原真菌的抑制效果ig. 2-1 Inhibitory effects of Lysinibacillus fusiformis He14 fermentation broth on tespathogenic fungi菌株 He14 的發(fā)酵液除了對(duì)白色念珠菌無抑制作用，對(duì)其余 6 株植物病 2 株動(dòng)物病原真菌的生長(zhǎng)均有抑制作用。其中，發(fā)酵液對(duì)馬鈴薯晚疫病作用最強(qiáng)，抑制率為 100%；對(duì)辣椒灰霉菌的拮抗作用稍弱，抑制率為稻紋枯病菌、水稻稻瘟病菌、煙草黑脛病菌、馬鈴薯早疫病菌、須毛癬毛癬菌的抑制率在 50%~75%之間。根據(jù)抑制率和病原真菌的生長(zhǎng)速度辣椒灰霉病菌作為菌株 He14 發(fā)酵液后續(xù)活性跟蹤實(shí)驗(yàn)的指示菌。2 He14 發(fā)酵液抑菌活性和菌液干重與時(shí)間的關(guān)系考察菌株 He14 不同發(fā)酵時(shí)間下發(fā)酵液的抑真菌活性及發(fā)酵液干重情2。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2760071