【摘要】：研究目的和內(nèi)容本研究主要對(duì)8個(gè)新型抗耐藥結(jié)核藥物候選物的成藥性進(jìn)行了初步研究,具體包括:(1)分別建立血漿等生物基質(zhì)中HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P 8個(gè)候選藥物的HPLC-MS/MS檢測(cè)方法,并按照生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證;(2)用建立的方法分別進(jìn)行8個(gè)候選藥物大鼠單劑量(50mg/kg)灌胃給藥及單劑量(5 mg/kg)靜脈注射給藥后的藥動(dòng)學(xué)研究;(3)篩選出一個(gè)藥代動(dòng)特性良好的候選藥物,并評(píng)價(jià)該候選藥物進(jìn)行大鼠單次單劑量(50mg/kg)灌胃給藥后主要組織中藥物分布情況和多次(連續(xù)7天,每天1次)單劑量灌胃給藥后體內(nèi)藥物蓄積情況;(4)建立Caco-2細(xì)胞單層模型,采用HPLC-MS/MS法初步考察該候選藥物與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-糖蛋白的相互作用;(5)對(duì)該候選藥物進(jìn)行大鼠在體腸吸收動(dòng)力學(xué)研究,考察該候選藥物在大鼠不同腸段的吸收動(dòng)力學(xué)特性;(6)對(duì)該候選藥物進(jìn)行初步的安全性評(píng)價(jià)。研究結(jié)果(1)建立了快速、靈敏和準(zhǔn)確的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P生物樣品HPLC-MS/MS分析方法,并對(duì)分析方法進(jìn)行了考核,方法的精密度、準(zhǔn)確度等各項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)過(guò)確證后,符合生物樣品測(cè)定的相關(guān)規(guī)范。(2)大鼠分別單次靜脈注射給予5 mg/kg的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P后,平均血漿消除半衰期分別為54.1、43.5、91.1、86.9、129、32.6、78.2和63.3 min;平均血漿清除率分別為0.009、0.039、0.036、0.014、0.016、0.013、0.018和0.011 L/min/kg,其中HY152-D的平均血漿清除率為大鼠肝臟全血流量(約0.055 L/min/kg)的70.9%,屬高清除藥物,而HY152-E和HY152-M的平均血漿清除率分別為大鼠肝臟全血流量的65.5%和33.0%,屬于中等清除藥物,其余候選物的平均血漿清除率均小于大鼠肝臟全血流量的30%,為低清除藥物;平均表觀分布容積分別為0.67、2.49、4.82、1.79、3.20、0.59、2.04和1.00 L/kg。大鼠分別單次灌胃給予50 mg/kg的HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、HY152-M和HY152-P后,平均血漿消除半衰期分別為126、105、66.7、171、137、55.1、323和186 min,平均血漿峰濃度分別為16.4、7.6、5.9、6.1、14.8、34.3、2.5和0.1μg/mL。經(jīng)過(guò)計(jì)算,HY152-C、HY152-D、HY152-E、HY152-J、HY152-K、HY152-L、hy152-m和hy152-p的絕對(duì)生物利用度分別為13.3%、53.0%、32.0%、58.2%、133%、242%、13.3%和0.97%。8個(gè)候選物的大鼠體內(nèi)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)無(wú)明顯性別差異(p0.05)(3)經(jīng)過(guò)8個(gè)候選藥物的大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究,最終篩選出了一個(gè)藥代動(dòng)特性良好的候選藥物hy152-j。大鼠單次灌胃給藥50mg/kg的hy152-j后,藥物廣泛分布于心、肝、脾、肺、腎組織中,主要組織中濃度高于血漿濃度,組織中的達(dá)峰時(shí)間為給藥后4h,且給藥12h后組織中濃度低于峰濃度的20%。多次(連續(xù)7天,每天1次)給藥后,主要組織中未發(fā)現(xiàn)藥物蓄積。(4)用于轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)的caco-2細(xì)胞能夠形成致密、完整以及功能良好的均勻單層細(xì)胞;不同濃度的候選藥物hy152-j從腸腔側(cè)到基底側(cè)的表觀滲透系數(shù)在1.76×10-5-2.61×10-5cm/s的范圍內(nèi);不同濃度hy152-j從基底側(cè)到腸腔側(cè)的表觀滲透系數(shù)與腸腔側(cè)到基底側(cè)的比值介于0.74-1.27之間;與陰性對(duì)照組相比,hy152-j在0.625 10μmol/l范圍內(nèi)并沒(méi)有明顯降低caco-2細(xì)胞單層模型中地高辛的外排比。(5)候選藥物hy152-j在大鼠十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的吸收速率常數(shù)和表觀滲透系數(shù)無(wú)顯著性差異(p0.05);與低濃度(25μg/ml)組相比,高濃度(100μg/ml)組中hy152-j的吸收速率常數(shù)和表觀滲透系數(shù)均存在非常顯著性差異(p0.01),中濃度(50μg/ml)組中hy152-j的表觀滲透系數(shù)存在顯著性差異(p0.05);不同ph的介質(zhì)對(duì)吸收速率常數(shù)和表觀滲透系數(shù)均無(wú)顯著性影響(p0.05);p-糖蛋白抑制劑對(duì)hy152-j的腸吸收沒(méi)有顯著性影響(p0.05)。(6)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明,icr小鼠分別灌胃給予5g/kg、4g/kg、3.2g/kg、2.56g/kg和2.05g/kg的hy152-j,在兩周的觀察期內(nèi),除了最低劑量組之外,其余各個(gè)劑量組均出現(xiàn)小鼠死亡,經(jīng)過(guò)計(jì)算,雄性小鼠ld50值為3.264g/kg、雌性小鼠ld50值為3.416g/kg。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明,sd大鼠灌胃給予250mg/kg的hy152-j一個(gè)月后,實(shí)驗(yàn)組大鼠前三周的攝食量與對(duì)照組相比均存在顯著性差異(p0.05),實(shí)驗(yàn)組大鼠體重與照組相比不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但有減小趨勢(shì);血液學(xué)檢查未見(jiàn)與藥物有關(guān)的明顯毒性反應(yīng);血生化檢查發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組大鼠與照組相比alt、tp、alb、chol、ast、tg、pt指標(biāo)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在差異(p0.05或p0.01);實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟的臟器系數(shù)與照組相比存在非常顯著性差異(p0.01);組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠的肝臟出現(xiàn)了一定程度的脂肪變性。結(jié)論本文從藥代動(dòng)力學(xué)角度對(duì)8個(gè)新型抗耐藥結(jié)核藥物候選物的成藥性進(jìn)行初步研究,篩選出了藥代動(dòng)特性良好的候選藥物hy152-j,然后進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究和安全性評(píng)價(jià)。研究結(jié)果表明,HY152-J的大鼠口服絕對(duì)生物利用度為58.2%;大鼠口服灌胃給藥后4 h在組織中濃度達(dá)最大值,大量分布于心、肝、脾、肺、腎組織中;多次給藥后,組織中未發(fā)現(xiàn)蓄積;HY152-J不是P-糖蛋白的底物,且對(duì)P-糖蛋白不具有抑制作用;HY152-J在不同腸段均有吸收,且無(wú)明顯的特定吸收部位;在25μg/mL至100μg/mL范圍內(nèi),隨濃度增大,其吸收有逐漸飽和趨勢(shì),初步推斷HY152-J的吸收機(jī)制為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn);HY152-J的雄性小鼠LD50值為3.264 g/kg,雌性小鼠LD50值為3.416 g/kg,屬于低毒化合物;血液生化、系統(tǒng)尸檢、臟器系數(shù)、組織病理學(xué)檢查均發(fā)現(xiàn)與藥物相關(guān)的肝毒性反應(yīng),推測(cè)HY152-J的主要毒性靶器官可能為肝臟。
【學(xué)位授予單位】：上海醫(yī)藥工業(yè)研究院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

HY152-C的典型色譜圖

圖 2-2 HY152-C 大鼠血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2-2 Standard curve line of HY152-C密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表 2-1，HY152-C 準(zhǔn)確度（%REC）103.6~1116.0~10.8。表 2-1 HY152-C 的大鼠血漿測(cè)定批內(nèi)差Tab.2-1 Accuracy and precision intra day of HY152-C in rat plasmaQC 濃度（ng/mL）60 500 80068.7 583 90564.6 575 90853.3 567 83166.2 550 753/ 500 746

HY152-D的典型色譜圖

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號(hào)：2755719