【摘要】：目的:探討二甲雙胍是否通過影響轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming Growth Factorβ1,TGF-β1)相關(guān)信號(hào)通路抑制肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),進(jìn)而減輕肺纖維化的發(fā)生與發(fā)展,從而為其臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取8周齡雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,體重(200±20 g),適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、博萊霉素(Bleomycin,BLM)組、二甲雙胍(100 mg·kg-1)劑量組及二甲雙胍(300 mg·kg-1)劑量組。每組n=12。采用BLM(5 mg·kg-1)氣管滴注誘導(dǎo)肺纖維化大鼠模型。造模后每天灌胃給藥1次,對(duì)照組和BLM組給予等體積(1m L·100g-1)生理鹽水,連續(xù)給藥28天。HE染色和Masson染色觀察肺組織病理學(xué)及膠原沉積的變化;免疫組化檢測(cè)肺組織I型膠原(collagen I)、III型膠原(collagen III)和TGF-β1的表達(dá);Western Blot法檢測(cè)肺組織TGF-β1、collagen I、collagen III、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、E鈣粘蛋白(E-Cadherin)、緊密連接蛋白-1(ZO-1)及p-ERK1/2和p-Smad2/3的表達(dá);real time-PCR檢測(cè)TGF-β1、collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin、E-Cadherin、ZO-1 m RNA的表達(dá)。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將大鼠Ⅱ型肺泡上皮(RLE-6TN)細(xì)胞隨機(jī)分為6組:Control組、TGF-β1(5ng·ml-1)組、TGF-β1+二甲雙胍(1、10、100μmol·L-1)組和二甲雙胍100μmol·L-1單獨(dú)組。細(xì)胞先用TGF-β1預(yù)處理1h,再加入不同劑量二甲雙胍共處理48h。CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖。Western blot法檢測(cè)collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin、E-Cadherin、ZO-1及p-ERK1/2和p-Smad2/3的蛋白表達(dá)水平;real time-PCR檢測(cè)collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin、E-Cadherin及ZO-1 m RNA的表達(dá)。結(jié)果:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(1)HE和Masson染色結(jié)果顯示BLM組肺組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,肺泡壁厚度明顯增加,纖維化明顯,肺泡間隔內(nèi)成纖維細(xì)胞顯著增多,且局部實(shí)變,肺組織膠原沉積明顯增多。而不同劑量二甲雙胍連續(xù)給藥4周后能明顯改善肺組織損傷,顯著降低肺組織膠原的沉積。(2)免疫組化結(jié)果顯示BLM組大鼠肺組織collagen I、collagen III以及TGF-β1的陽性表達(dá)明顯升高,而不同劑量二甲雙胍給藥4周后能明顯降低BLM誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織collagen I、collagen III以及TGF-β1的表達(dá)。(3)real time-PCR結(jié)果顯示,與正常組比較,BLM組肺組織TGF-β1、collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin m RNA表達(dá)水平均不同程度升高而E-Cadherin及ZO-1 m RNA表達(dá)水平均不同程度降低(P0.01);與BLM組相比,不同劑量二甲雙胍給藥4周后肺組織TGF-β1、collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin m RNA表達(dá)水平均不同程度降低而E-Cadherin及ZO-1m RNA表達(dá)水平均不同程度升高(P0.01或P0.05)。(4)Western Blot結(jié)果顯示,與正常組比較,BLM組肺組織TGF-β1、collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin蛋白表達(dá)水平均不同程度升高而E-Cadherin及ZO-1蛋白表達(dá)水平均不同程度降低(P0.01);與BLM組相比,給予不同劑量二甲雙胍4周后肺組織TGF-β1、collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin蛋白表達(dá)水平均不同程度降低而E-Cadherin及ZO-1蛋白表達(dá)水平均不同程度升高(P0.01或P0.05)。(5)與正常組比較,BLM組大鼠肺組織p-ERK1/2、p-Smad2/3蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P0.01);與BLM組相比,不同劑量二甲雙胍給藥4周后肺組織ERK1/2和Smad2/3磷酸化水平均不同程度下降(P0.01或P0.05)。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(1)不同劑量二甲雙胍對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖具有不同程度的抑制作用(P0.01或P0.05)。(2)與Control組相比,TGF-β1組collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin m RNA和蛋白表達(dá)水平均不同程度升高而E-Cadherin及ZO-1 m RNA和蛋白表達(dá)水平均不同程度降低(P0.01);與TGF-β1組相比,不同劑量二甲雙胍組collagen I、collagen III、α-SMA、Vimentin m RNA和蛋白表達(dá)水平均不同程度降低而E-Cadherin及ZO-1 m RNA和蛋白表達(dá)水平均不同程度升高(P0.01或P0.05)。(3)與Control組相比,TGF-β1組ERK1/2及Smad2/3蛋白磷酸化水平明顯升高(P0.01);與TGF-β1組相比,不同劑量二甲雙胍組ERK1/2及Smad2/3蛋白磷酸化水平明顯降低(P0.01或P0.05)。結(jié)論:二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化具有一定的緩解作用,其機(jī)制可能與其降低肺組織Smad2/3或ERK1/2磷酸化水平、進(jìn)而抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺泡EMT有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

圖 1 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的影響（HE 染色，×200）1.2 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織膠原沉積影響Masson 染色結(jié)果顯示對(duì)照組大鼠肺組織可見少量藍(lán)色膠原纖維染色，博萊霉素組大鼠肺組織可見大量膠原纖維沉積。而經(jīng)二甲雙胍（100、300 mg·kg-1）

圖 2 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織膠原的表達(dá)（Masson 染色，×200）1.4 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織 collagenⅠmRNA 表達(dá)的影響Real time PCR 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與 Control 組相比，BLM 組大鼠肺組織 collagenⅠ

圖 3 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化肺組織 collagenⅠmRNA 的表達(dá)A：collagenⅠmRNA 表達(dá)水平；B：肺組織 collagenⅠ熔解曲線；C：肺組織 GAPDH 熔解曲線。數(shù)據(jù)表示為 x ± s，n = 8 ~12。**P<0.01 vs. Control；#P < 0.05,##P < 0.01 vs. Bleomycin。1.5 二甲雙胍對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織 collagenⅠ蛋白

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 孫錦濤;徐興祥;;特發(fā)性肺纖維化發(fā)病機(jī)制及藥物治療的研究進(jìn)展[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2015年02期

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本文編號(hào)：2755715