【摘要】：背景:近年來,作為一種針對癌細胞無限增殖特性的治療腫瘤的新途徑,化療藥物誘導(dǎo)的癌細胞衰老逐漸成為研究人員關(guān)注的焦點。雖然已有大量的報道顯示傳統(tǒng)抗腫瘤藥物能夠通過誘導(dǎo)細胞衰老來抑制多腫瘤細胞的增殖,但是誘導(dǎo)胃癌細胞衰老的抗腫瘤藥物的研究仍然比較少。隨著對腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入,鑒于傳統(tǒng)藥物運用的局限性,通過化學(xué)合成新型小分子化合物已經(jīng)成為全球生物醫(yī)藥領(lǐng)域研究的重點之一。因此,本論文主要通過篩選和鑒定誘導(dǎo)細胞衰老的新型小分子化合物,達到治療胃癌的效果,并為抗腫瘤藥物研發(fā)與合成提供理論依據(jù)。方法:通過MTT實驗篩選出能夠明顯抑制胃癌細胞增殖的化合物,并驗證抑制胃癌細胞增殖的效果。隨后,我們使用流式細胞術(shù)研究化合物對胃癌細胞周期和凋亡的影響。首先,我們通過X-β-Gal染色實驗檢測胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性,BrdU摻入實驗檢測DNA合成情況以及DAPI染色和免疫熒光實驗檢測核內(nèi)異染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的改變,研究了化合物誘導(dǎo)的細胞衰老特征。隨后,通過Western blot實驗檢測了相關(guān)信號通路上蛋白的水平的變化,解析了化合物的作用機制。最后,我們通過皮下成瘤小鼠驗證篩選出來的化合物在體內(nèi)的抗腫瘤活性,蘇木素-伊紅染色和免疫組織化學(xué)檢測腫瘤組織病理學(xué)特征以及相關(guān)蛋白水平的表達情況。結(jié)果:在本課題中,我們首先從48種化合物中篩選出的一種能明顯抑制胃癌細胞增殖的化合物,4,5-二苯基-2-吡啶甲酸甲酯(4,5-diphenyl-2-methyl picolinate,DMP)。實驗結(jié)果顯示,DMP以劑量依賴的方式對MKN-28和MKN-45細胞表現(xiàn)出顯著的細胞毒性作用。DMP化合物處理后的細胞阻滯在G2/M期,與對照組比較差異顯著(P0.05或P0.01)。進一步的實驗顯示,DMP能夠引起胃癌細胞產(chǎn)生細胞衰老的特征。DMP處理的大多數(shù)的胃癌細胞的衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的活性顯著提高,BrdU摻入明顯減少以及SAHF的形成。通過對DMP誘導(dǎo)細胞衰老機制的研究發(fā)現(xiàn),DMP可以在胃癌細胞中引發(fā)明顯的DNA損傷(P0.05或P0.01),并且上調(diào)了衰老相關(guān)的信號蛋白p38、p-p38、p-p53、p21和p16的水平。另外,DMP化合物在高劑量的情況下能夠明顯抑制成瘤小鼠腫瘤的生長速度,并且上調(diào)了腫瘤組織衰老相關(guān)蛋白p53和p21的水平。結(jié)論:4,5-二苯基-2-吡啶甲酸甲酯能夠抑制體外培養(yǎng)的MKN-28和MKN-45胃癌細胞的增殖,主要通過激活p53/p21信號通路誘導(dǎo)了胃癌細胞的衰老,并且在體內(nèi)表現(xiàn)出良好的抑制腫瘤生長的效果,同時對小鼠的生長與器官并沒有明顯的毒性作用。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R914
【圖文】：

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文解決耐藥性的問題，恢復(fù)其對抗腫瘤的敏感性。1.3.6 m-TOR 抑制劑m-TOR 主要通過形成 m-TORC1 和 m-TORC2 復(fù)合物調(diào)節(jié)細胞代謝、細胞運動、細胞生存、蛋白合成、細胞自噬和轉(zhuǎn)錄[77]。過度激活 m-TOR 信號通路能夠顯著促進腫瘤的發(fā)生的發(fā)展。已有相關(guān)研究證實了通過抑制 m-TOR 可以顯著增加腫瘤細胞對電子輻射的敏感性，m-TOR 抑制劑 Rapamycin 及其類似物可以誘導(dǎo)腫瘤細胞發(fā)生自噬，而細胞自噬目前被認(rèn)為決定細胞從細胞凋亡向細胞衰老轉(zhuǎn)換的開關(guān)[78]。

圖 2.1 不同化合物對各種胃癌細胞株增殖的影響。 (A-D) 不同化合物在 300 μM 的濃度下處理 48 h 后，MTT 實驗檢測不同化合物對胃癌細胞 AGS、BGC823、MKN-28 和 MKN-45細胞增殖影響的結(jié)果 (n≥3)。Figure 2.1 Effects of different compounds on the proliferation of various cell lines. (A-D)Effects of different compounds on the proliferation of gastric cancer cells AGS, BGC823,MKN-28, and MKN-45 cells treated at a concentration of 300 μM for 48 h was examined by MTTassay (n≥3).2.3.2 篩選出 5 種沒有明顯抑制人成纖維細胞 IMR90 的增殖的化合物為了進一步研究第一輪篩選出來的化合物是否會對正常細胞產(chǎn)生細胞毒性作用，我們將篩選出來的 10 種化合物作用于人成纖維細胞 IMR90，在同樣作用濃度和作用時間下，MTT實驗檢測10種化合物對人正常成纖維細胞增殖的影響。實驗結(jié)果如圖 2.2 所示，10 種化合物對 IMR90 的增殖影響效果不同，其中 5 種

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文的毒性作用。其他 5 種化合物 A-6，A-7，A-14，B-4 和 C-15 對人正胞 IMR90 的增殖沒有明顯的抑制作用。因此，我們挑選抑制效果不A-7，A-14，B-4 和 C-15 作為第二輪篩選的候選化合物。為了進一種化合物在四種胃癌細胞中的抑制增殖的效果，我們將進一步檢測這在胃癌細胞中的濃度生長曲線。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 Dheepak Kanagavel;Mikhail Fedyanin;Alexey Tryakin;Sergei Tjulandin;;Second-line treatment of metastatic gastric cancer:Current options and future directions[J];World Journal of Gastroenterology;2015年41期

2 Toshifusa Nakajima;Masashi Fujii;;What make differences in the outcome of adjuvant treatments for resected gastric cancer?[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

3 楊濤濤;林國武;王占偉;金喬梅;王越;陸濤;;吡唑衍生物在抗腫瘤方面的研究進展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2012年05期

4 Chia-Hsin Chan;;Novel roles of Skp2 E3 ligase in cellular senescence,cancer progression,and metastasis[J];癌癥;2012年04期

5 徐靜;;吡啶類化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用[J];中外醫(yī)療;2011年02期

本文編號：2755704