【摘要】：目的研究阿米替林(amitriptyline,AMI)對骨癌痛(bone cancer pain,BCP)模型大鼠機(jī)械縮足反射閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)及胞膜谷氨酸-天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(glutamate-aspartate transporter,GLAST)和腦脊液中谷氨酸濃度的影響,并探討其可能機(jī)制。方法清潔級雌性SD大鼠90只,180-220g,隨機(jī)分為6組,每組15只:空白對照組(CONT組)、假手術(shù)組(Sham組)、骨癌痛組(BCP組)、BCP+1.5mg/kgAMI組(AMI_(1.5)組)、BCP+3mg/kgAMI組(AMI_3組)、BCP+10mg/kgAMI組(AMI_(10)組)。CONT組不做任何處理,Sham組大鼠右側(cè)后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射10ul PBS液,術(shù)后第5d開始腹腔注射1ml生理鹽水,每天兩次,BCP組大鼠右側(cè)后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射等量Walker256大鼠乳腺癌細(xì)胞PBS混懸液,AMI_(1.5)組、AMI_3組及AMI_(10)組中在BCP模型建立后第5天開始,分別經(jīng)腹腔注射1.5mg/kg、3mg/kg及10mg/kg AMI,每天兩次。Von Frey纖毛測痛儀測定術(shù)前、術(shù)后第4d、7d、11d、14d、17d、21d各組大鼠注射癌細(xì)胞側(cè)后肢機(jī)械縮足反射閾值(mechanical withdrawal threshold,MWT);RT-PCR檢測各組大鼠術(shù)后第7d、14d、21d脊髓背角GLAST mRNA表達(dá)、Western Blot檢測術(shù)后第7d、21d脊髓背角GLAST及術(shù)后第21d脊髓背角蛋白激酶A/蛋白激酶C(protein kinase A/C,PKA/PKC)表達(dá)、紫外分光光度法檢測術(shù)后第7d、14d、21d腦脊液中谷氨酸(glutamate,Glu)濃度的變化。組間和組內(nèi)采用單因素方差分析的統(tǒng)計(jì)方法,P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(1)MWT變化:術(shù)前各組間大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),CONT組與Sham組大鼠術(shù)后MWT無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);術(shù)后第7d、11d、14d、17d、21d,BCP組大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT較CONT組顯著降低;AMI_(1.5)組與BCP組大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),AMI_3組、AMI_(10)組大鼠較BCP組術(shù)側(cè)后肢MWT顯著升高(P0.05);術(shù)后第11d、14d,AMI_3組與AMI_(10)組大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);術(shù)后第17d、21d,AMI_3組大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT明顯低于AMI_(10)組(P0.05)。(2)RT-PCR檢測結(jié)果:Sham組大鼠術(shù)后GLAST mRNA表達(dá)與CONT組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);BCP組大鼠脊髓背角GLAST mRNA表達(dá)較CONT組明顯降低(P0.05);AMI治療組脊髓背角GLAST mRNA表達(dá)與BCP組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(3)Western Blot檢測結(jié)果:Sham組大鼠脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞表面及細(xì)胞質(zhì)中GLAST、PKA/PKC與CONT組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);BCP組大鼠脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)GLAST較CONT組明顯降低,PKA/PKC明顯升高(P0.05);AMI治療組大鼠脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞表面GLAST較骨癌痛組明顯升高,細(xì)胞質(zhì)中GLAST明顯下降,PKA/PKC明顯下降(P0.05)。(4)紫外分光光度法檢測結(jié)果:Sham組大鼠腦脊液中谷氨酸濃度與CONT組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);BCP組大鼠腦脊液中谷氨酸濃度在建模后第7d、14d、21d較CONT組明顯升高(P0.05);AMI治療組大鼠腦脊液中谷氨酸濃度較BCP組明顯降低(P0.05)。結(jié)論AMI可抑制骨癌痛大鼠MWT的降低,其機(jī)制可能與其降低骨癌大鼠脊髓背角PKA/PKC,從而介導(dǎo)大鼠脊髓背角GLAST從膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到胞膜表面,繼而降低腦脊液中谷氨酸濃度而實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965
【圖文】：

2.4.1 準(zhǔn)備好癌細(xì)胞、75%酒精、5 只 60-80g SD 幼鼠；2.4.2 75%酒精消毒幼鼠腹部，灌胃手勢固定好幼鼠，左手固定，頭朝下，旁正中線，在腹腔靠下的部位 1ml 無菌注射器垂直刺入，勿扎到心臟，回抽無將癌細(xì)胞注入幼鼠腹腔中，0.5ml/只，5×106個(gè)細(xì)胞/ml，緩慢拔出針頭。2.5 抽腹水接種過 Walker256 大鼠腹水癌細(xì)胞的幼年雌性 SD 大鼠 7-14d 后會出現(xiàn)明腹水癥狀。將 Walker256 腹水鼠用灌胃姿勢固定好（左手固定），頭朝上，75%酒精毒整個(gè)腹部，右手拿 10ml 注射器針管加 1ml 注射器針頭，在幼鼠腹腔最低位刺入（腹部中線旁刺入，勿扎到心臟），抽取腹水并比較，留有棕黃的粘稠腹瘤細(xì)胞待用，棄用血性腹水。將收集到的腹水瘤細(xì)胞 1200rpm、離心 8min，棄清，沉淀物在超凈臺上用 10ml、0.01M PBS 懸浮后再 1200rpm、離心 8min，棄清，然后用 PBS 重懸腹水瘤細(xì)胞，使?jié)舛葹?5×106個(gè)細(xì)胞/ml，置于冰上待用

（C） （D） 2 脛骨鉆孔后，輕微彎曲的 2mL 注射器針頭探測骨髓腔（圖 A、B）；脛骨上的穿刺孔（圖 C）；微量注射器將癌細(xì)胞注入脛骨骨髓腔內(nèi)（圖 D）。.7 干預(yù)方法及分組.7.1 CONT 組:不做任何處理；.7.2 Sham 組:右后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射 10ul PBS 液，第 5 天開始定時(shí)腹腔 1ml 生理鹽水，一天兩次；.7.3 BCP 組：右后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射 10ul 癌細(xì)胞 PBS 混懸液，第 5 天開時(shí)腹腔注射 1ml 生理鹽水，一天兩次；.7.4 AMI1.5 組：右后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射 10ul 癌細(xì)胞 PBS 混懸液，第 5 天定時(shí)腹腔注射 1.5mg/kg AMI，一天兩次；.7.5 AMI3 組：右后肢脛骨骨髓腔內(nèi)注射 10ul 癌細(xì)胞 PBS 混懸液，第 5 天開

骨 X 線檢測結(jié)果（如圖 3）：正常大鼠骨小梁完整，骨皮質(zhì)連續(xù)；第 7d，術(shù)側(cè)脛骨少量骨小梁缺失，骨皮質(zhì)完整；注射癌細(xì)胞后第骨皮質(zhì)不連續(xù)，周圍組織輕微腫脹；注射癌細(xì)胞后第 21d，術(shù)側(cè)脛續(xù)，出現(xiàn)病理性骨折，周圍組織明顯腫脹。結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2751747