【摘要】：癌癥的高病發(fā)、高死亡、低生存趨勢(shì)越來越嚴(yán)重,已經(jīng)成為了21世紀(jì)危害人類健康的主要?dú)⑹�。其�?肺癌和乳腺癌的發(fā)病率分別居我國男性和女性的癌癥發(fā)病首位(國家癌癥中心)。目前,臨床治療癌癥的主要方法手段有放射治療、化學(xué)治療和手術(shù)治療,這些傳統(tǒng)治療方式普遍存在用藥靶向選擇性低、毒副作用大、術(shù)后容易愈后復(fù)發(fā)等缺陷,使其抗癌療效受到了很大的限制。近年來,抗癌肽因其具有廣譜的生物活性和獨(dú)特的作用機(jī)制備受關(guān)注,很多抗癌肽具有良好的腫瘤靶向性和穿透性,不易產(chǎn)生耐藥性,部分抗癌肽還可激活機(jī)體免疫,因此有望成為抗癌新藥的重要候選分子。在前期工作中,我們研究了兩種具有不同理化特征和活性作用機(jī)制的抗癌肽,陽離子膜活性肽HPRP-A1與凋亡誘導(dǎo)肽kla。HPRP-A1呈α螺旋結(jié)構(gòu),具有良好的癌細(xì)胞膜滲透性與靶向性,高濃度可通過破膜導(dǎo)致癌細(xì)胞壞死。kla呈折疊結(jié)構(gòu),由全D型氨基酸組成,通過誘導(dǎo)線粒體凋亡的途徑引發(fā)細(xì)胞凋亡,但其細(xì)胞的攝取率不高,很難進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮活性作用。本課題以陽離子膜活性多肽HPRP-A1和凋亡誘導(dǎo)肽kla為研究對(duì)象,以肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和乳腺癌細(xì)胞系MCF-7為研究模型,對(duì)是否可以通過聯(lián)合用藥發(fā)揮兩種多肽的互補(bǔ)協(xié)作效應(yīng),進(jìn)一步提高抗癌肽的抗癌活性并降低其用藥毒性的問題進(jìn)行了研究。首先通過FMOC固相合成法合成多肽HPRP-A1與kla,并用高效液相色譜儀分析制備獲得純肽;其次,利用MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測HPRP-A1與kla聯(lián)合用藥對(duì)肺癌細(xì)胞A549與乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞活性與增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低劑量的HPRP-A1可以大大提高kla的抗癌活性,相對(duì)于A549,聯(lián)合用藥組對(duì)MCF-7的活性與增殖影響更為明顯;再次,利用激光共聚焦顯微鏡檢測多肽的細(xì)胞攝取與共定位,結(jié)果表明聯(lián)合用藥組可以明顯提高細(xì)胞對(duì)多肽kla的攝取率,共定位顯示多肽kla進(jìn)入細(xì)胞后結(jié)合到線粒體上發(fā)揮活性作用;進(jìn)一步,利用熒光顯微鏡與線粒體凋亡檢測試劑盒檢測聯(lián)合用藥對(duì)細(xì)胞線粒體影響,結(jié)果顯示聯(lián)合用藥組引起了線粒體膜電位的明顯變化,Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)kla通過引起線粒體膜電位的變化,導(dǎo)致線粒體膜破壞及線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放到胞質(zhì)中;最后,構(gòu)建小鼠體內(nèi)乳腺癌模型,按天注射抗癌肽,觀察癌癥體積變化,并對(duì)用藥后的組織器官進(jìn)行免疫組化分析,結(jié)果顯示,聯(lián)合用藥組有效抑制癌癥的生長,并對(duì)正常組織沒有毒性損傷。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96
【圖文】：

圖 1.1 HPRP-A1 的兩親性結(jié)構(gòu)模型抗癌肽通過其他的作用機(jī)制模式在癌癥藥物治療中發(fā)揮別癌細(xì)胞，能夠滲透進(jìn)入癌細(xì)胞以及癌癥血管和組織透細(xì)胞膜進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部而不破壞細(xì)胞膜的細(xì)胞膜穿透肽復(fù)制合成的多肽等[59, 60]。據(jù)及研究內(nèi)容學(xué)藥物相比，抗癌肽作為一類小分子多肽能夠有效克服機(jī)體內(nèi)后更好的發(fā)揮生物活性[61]，并且各類抗癌肽的抗式和途徑，為了更充分的發(fā)揮抗癌肽的生物活性，我們的方式，將不同作用機(jī)理的抗癌肽聯(lián)合用藥，多肽聯(lián)合

多肽高效液相圖

圖 2.2 多肽飛行質(zhì)譜圖（A）多肽 kla 質(zhì)譜圖（B）多肽 HPRP-A1 質(zhì)譜圖2.3.3 多肽含量測定凍干獲得的純肽在凍干的過程中由于不可控的因素，比如凍干機(jī)的壓力，溫度以及凍干時(shí)間等，會(huì)使獲得的純肽粉末中存在水份。為了進(jìn)一步精確確定多肽的用量。通過高效液相分析多肽峰面積與已知含水量的多肽標(biāo)準(zhǔn)品峰面積的比值，得到純化多肽的凈含量，多肽 kla 與多肽 HPRP-A1 的含量如表 2.2。表 2.2 多肽含量No Peptide Content1 kla 55.5%2 HPRP-A1 63.7%2.3.4 多肽二級(jí)結(jié)構(gòu)分析

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4 許穎;;聯(lián)合用藥利弊分析及合理用藥原則[J];中國藥物濫用防治雜志;2007年04期

5 王海霞;;注意聯(lián)合用藥誤區(qū)[J];中國社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2005年03期

6 卞如濂;聯(lián)合用藥的目的與隱患[J];新醫(yī)學(xué);1991年05期

7 湯光;;《中西藥相互作用與聯(lián)合用藥》一書已出版[J];中國藥學(xué)雜志;1988年02期

8 黃祝林;;對(duì)加強(qiáng)聯(lián)合用藥管理的一點(diǎn)建議[J];中國農(nóng)村衛(wèi)生事業(yè)管理;1988年09期

9 趙丕烈;;幾例聯(lián)合用藥淺析[J];青海醫(yī)藥雜志;1988年02期

10 王亞磊;何志遠(yuǎn);;中醫(yī)聯(lián)合用藥在慢性支氣管炎急性發(fā)作期中的應(yīng)用效果研究[J];中醫(yī)臨床研究;2018年10期

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4 張?zhí)煊?;一例因聯(lián)合用藥引起ARF的用藥案例及分析[A];2010年臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆臨床藥師論壇論文集[C];2010年

5 王明玉;;臨床常用聯(lián)合用藥中熱原的檢測[A];2006第六屆中國藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 梁蓓蓓;張瑩;王睿;;聯(lián)合用藥MPC[A];第十屆全國化療藥理暨抗感染藥理高峰論壇資料匯編[C];2010年

7 李建萍;張倩;郭建明;段金廒;;丹紅注射液與阿司匹林聯(lián)合用藥效益與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[A];第二屆臨床中藥學(xué)大會(huì)論文集[C];2018年

8 文濤;;酚妥拉明、硝苯地平、硫酸鎂聯(lián)合用藥對(duì)妊娠高血壓綜合征的效果觀察[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)研討會(huì)論文綜合刊[C];2015年

9 楊晴晴;衛(wèi)曉慧;孫立;林森森;袁勝濤;;YS-1聯(lián)合用藥抗腫瘤作用研究[A];第八屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

10 吳雪瓊;;鈣離子通道阻滯劑維拉帕米——MDR-TB聯(lián)合用藥的新選擇[A];第三屆耐藥結(jié)核病防控與診治新進(jìn)展研討會(huì)資料匯編[C];2016年

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4 上海醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院教授 汪宗俊;聯(lián)合用藥要趨利避害[N];中國醫(yī)藥報(bào);2000年

5 莊愉;聯(lián)合用藥開辟抗耐藥新天地[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

6 湖南省岳陽市中醫(yī)院臨床藥學(xué)室主任 黎春輝;幾例不當(dāng)聯(lián)合用藥解析[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

7 王秋冬;聯(lián)合用藥不合理導(dǎo)致療效降低[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

8 記者 朱國旺;降壓時(shí)聯(lián)合用藥可更好地保護(hù)心血管[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

9 肖祥云;為何服降壓藥療效不佳[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2000年

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1 江森;|菜活性化合物在抗腫瘤聯(lián)合用藥中的作用和機(jī)理研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2018年

2 牛牛;聯(lián)合用藥在肺癌抗血管治療中的療效及毒副作用分析[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2013年

3 楊民;S-烯丙基巰基半胱氨酸的代謝、抗慢阻肺機(jī)制及聯(lián)合用藥研究[D];山東大學(xué);2017年

4 史衛(wèi)衛(wèi);白藜蘆醇增強(qiáng)抗腫瘤藥物活性的機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

5 常青;低劑量棉酚和甾體激素聯(lián)合用藥抗男性生育協(xié)同作用分析及對(duì)精原干細(xì)胞微環(huán)境的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

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7 王玉亮;青蒿琥酯作為降脂輔助用藥的作用和機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

8 田雪;多利培南及其聯(lián)合用藥對(duì)不同碳青霉烯酶基因鮑曼不動(dòng)桿菌體外和體內(nèi)抗菌作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 錢曉菁;低劑量棉酚和甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠精子發(fā)生的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2008年

10 靳雪源;丙型病毒性肝炎聯(lián)合治療藥物相互作用及肝靶向利巴韋林的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

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2 張超偉;中重度OSAHS患兒術(shù)后聯(lián)合用藥的療效分析[D];海南醫(yī)學(xué)院;2018年

3 李明;中藥“聯(lián)合用藥”治療精神分裂癥的臨床療效評(píng)價(jià)[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 楊琛;基于網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)分析的精準(zhǔn)聯(lián)合用藥研究及相關(guān)預(yù)測平臺(tái)的建立[D];華東師范大學(xué);2016年

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10 宋霆;抗癌防轉(zhuǎn)湯與5-氟尿嘧啶聯(lián)合用藥對(duì)H22荷瘤小鼠抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2745128