【摘要】：目的:通過構(gòu)建結(jié)直腸癌細(xì)胞氧化損傷模型,運(yùn)用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究6-姜烯酚對(duì)過氧化氫(H_2O_2)誘導(dǎo)正常腸上皮細(xì)胞(NCM460)、原位癌細(xì)胞(HCT116)及原位癌細(xì)胞(HT29)氧化損傷的不同作用及可能的分子機(jī)制,進(jìn)一步探討6-姜烯酚抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的作用靶點(diǎn)及與相關(guān)凋亡基因表達(dá)之間的關(guān)系。方法:通過相差倒置熒光顯微鏡觀察24h后各濃度6-姜烯酚對(duì)NCM460、HCT116及HT29細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的改變。CCK8法篩選各濃度6-姜烯酚對(duì)NCM460、HCT116及HT29增殖的影響及存活率,并繪制細(xì)胞增殖曲線。Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測不同分組NCM460、HCT116及HT29凋亡情況。Western-blot檢測分析不同濃度6-姜烯酚對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)NCM460、HCT116及HT29后相關(guān)凋亡基因蛋白(A2F、MCC1、Caspase3、PARP1和BCL2)不同表達(dá)情況。結(jié)果:CCK8法示:與對(duì)照組相比,NCM460-H_2O_2組細(xì)胞數(shù)目減少,NCM460-6姜烯酚組,細(xì)胞數(shù)卻一定程度上增加,尤其在NCM460-H_2O_2-6姜烯酚組,隨著6-姜烯酚濃度由5μM到15μM,細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)明顯不同程度地增高(p0.05)。反觀在HCT116和HT29各細(xì)胞分組,HCT116-H_2O_2和HT29-H_2O_2組細(xì)胞數(shù)明顯減少,并且隨著6-姜烯酚濃度的增加,各分組細(xì)胞數(shù)也發(fā)生不同程度減少,抑制了細(xì)胞增殖(p0.05)。Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)示:與對(duì)照組相比,在NCM460各分組細(xì)胞中,隨著6-姜烯酚濃度由5μM到15μM,其中右上象限和右下象限死亡細(xì)胞數(shù)之和均發(fā)生不同程度減少(p0.05);但在HCT116和HT29各分組細(xì)胞中,隨著6-姜烯酚濃度的不斷升高,右下象限和右上象限死亡細(xì)胞數(shù)之和卻呈現(xiàn)不同程度的增多(p0.05)。Western-blot檢測示:與對(duì)照組相比,6-姜烯酚可不同程度增加H_2O_2誘導(dǎo)NCM460中BCL2表達(dá),卻降低了MCC1、A2F、Caspase3、PARP1表達(dá)(p0.05),在一定程度上可以保護(hù)細(xì)胞免受H_2O_2的氧化損傷,促進(jìn)NCM460增殖;但是在HCT116和HT29中,6-姜烯酚卻可不同程度增加了MCC1、A2F、Caspase3、PARP1表達(dá),反而抑制BCL2表達(dá)(p0.05),一定程度上加劇了H_2O_2對(duì)HCT116和HT29的氧化損傷作用,抑制HCT116和HT29增殖。結(jié)論:6-姜烯酚對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)NCM460具有明顯的抗氧化保護(hù)作用,但對(duì)HCT116和HT29卻呈現(xiàn)相反的增強(qiáng)氧化損傷作用,可抑制結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞增殖,促使腫瘤細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究6-姜烯酚抑制結(jié)直腸腫瘤增殖的相關(guān)靶點(diǎn)或具體機(jī)制研究奠定了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2737527