發(fā)布時間：2020-07-01 03:48

【摘要】：目的:探究ACN誘導的腦組織氧化應激和炎癥反應對NF-κB信號通路的影響,以及NF-κB激活后對凋亡相關基因的調節(jié)作用,為ACN神經毒性機制深入研究提供依據(jù)。方法:60只SPF級健康成年雄性SD大鼠,隨機分為5組:對照組(玉米油)、ACN低、中、高ACN組(11.5、23.0、46.0mg/kg ACN)、NAC干預組(46.0mg/kg ACN+300mg/kg NAC),灌胃染毒,每天1次,每周6次,連續(xù)4周。末次染毒后,次日心臟采血后處死大鼠。(1)染毒前及末次染毒后,采用曠場實驗(open-field test,OFT)評價大鼠自主活動水平;(2)稱量大鼠腦濕重,計算臟器系數(shù);(3)制備腦組織HE病理染色切片,觀察腦組織病理學改變;(4)制備腦組織勻漿,ELISA法測定大鼠腦組織內炎癥細胞因子濃度;生化法檢測腦組織中GSH、MDA含量以及GSH-Px、SOD、CAT酶活力;(5)Real-Time PCR檢測腦組織NF-κB信號通路以及線粒體凋亡途徑相關基因IKK-α、IκB、NF-κB、TLR4、caspase-9和caspase-3 mRNA表達水平;(6)Western Blot檢測腦組織NF-κB信號通路以及線粒體凋亡途徑相關蛋白NF-κB、IKK-α、p-IKKα/β、IκB-α、p-IκBα、TLR4、Cyt c、caspase-9、caspase-3、Bax、Bcl-2相對表達量。(7)TUN EL法檢測腦組織神經細胞凋亡水平。結果:(1)ACN染毒后,在OFT 0-10 min和11-20 min運動過程中,高ACN組大鼠lardist值、總距離與對照組比較均增加(P0.05)。與高ACN組比較,NAC組大鼠在OFT 0-10 min和11-20 min運動過程中總距離減少(P0.05)。(2)染毒前及整個染毒過程中,各劑量組大鼠體重變化差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。染毒結束后,各劑量組大鼠腦臟器系數(shù)均未發(fā)生明顯變化(P0.05)。(3)HE染色可見,中、高ACN組大鼠腦組織損傷明顯,皮層區(qū)錐體細胞結構不完整,胞核淡染,部分細胞軸突、尼氏體消失,并觀察到神經細胞衛(wèi)星現(xiàn)象;海馬CA1區(qū)神經元排列紊亂,層次不清,胞核淡染、胞漿模糊,細胞結構不清晰。與高ACN組比較,NAC組大鼠腦組織皮層區(qū)錐體細胞結構較完整,可見胞核、軸突,尼氏體較豐富;海馬CA1區(qū)神經元排列較整齊,結構較清晰。(4)與對照組相比,低、中、高ACN組大鼠腦組織MDA含量均升高(P0.05);中、高ACN組大鼠腦組織GSH含量降低(P0.05);高ACN組GSH-Px活力下降(P0.05);低ACN組CAT活力下降(P0.05)。與高ACN組相比,NAC組大鼠腦組織SOD活力升高,MDA含量、CAT活力降低。(5)與對照組比較,低、中、高ACN組大鼠腦組織TNF-α濃度均升高(P0.05);中、高ACN組IL-1β濃度均升高;高ACN組IL-6濃度升高(P0.05)。與高ACN組比較,NAC組大鼠腦組織中炎癥細胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平均降低(P0.05)。(6)與對照組相比,中、高ACN組IKK-α、NF-κB mRNA表達均上調(P0.05);高ACN組大鼠腦組織TLR4、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表達均上調(P0.05)。與高ACN組相比,NAC組IKK-α、NF-κB、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表達均下調(P0.05)。(7)與對照組相比,低、中、高ACN組p-IKKα/β、IKK-α、NF-κB、Cyt c、Caspase-9蛋白相對表達量均升高(P0.05);中、高ACN組p-IκBα、Bax蛋白相對表達量均升高(P0.05);高ACN組TLR4蛋白相對表達量升高(P0.05);高ACN組Bcl-2蛋白相對表達量降低(P0.05)。與高ACN組比較,NAC組大鼠腦組織p-IKKα/β、NF-κB、Cyt c、Caspase-9、Caspase-3蛋白相對表達量均升高(P0.05);Bcl-2蛋白相對表達水平升高(P0.05)。(8)TUNEL染色結果顯示,中、高ACN組大鼠腦組織TUNEL陽性細胞數(shù)與對照組比較顯著增加。結論:(1)ACN染毒可致大鼠自發(fā)行為改變,并使腦組織發(fā)生病理學損傷,這可能與ROS介導的氧化應激有關;(2)ROS介導的炎癥反應、NF-κB信號通路和線粒體凋亡通路的激活是ACN致大鼠腦損傷的機制之一。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R99
【圖文】：

第三章 結果ACN 對大鼠體重、腦組織濕重及臟器系數(shù)的影響染毒前各組大鼠體重之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。染毒過大鼠體重均有所增加， ACN 各劑量染毒組大鼠體重相比，差異均無統(tǒng)（P>0.05）。見圖 3.1.1。單因素方差分析結果顯示， ACN 各劑量染毒組間大鼠腦組織濕重差異學意義（P<0.05），進一步經兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，高 ACN組織濕重降低（P<0.05）。低、中、高 ACN 組大鼠腦臟器系數(shù)差異無統(tǒng)（P>0.05）。見表 3.1.1。本次實驗過程中未發(fā)生大鼠死亡，高 ACN 組大鼠染毒第二周開始出現(xiàn)、易激惹等行為表現(xiàn)，其他組大鼠未見明顯行為改變。

ACN 組大鼠運動過程中大運動總時間增加；高 ACN 組大運動總距離均增（P<0.05）。與高 ACN 組比較，NAC 組大鼠 OFT 0-10 min和 11-20 min運動程中不活動總時間、不活動總距離、小運動總時間、小運動總距離值、大運動時間、大運動總距離、總距離之間的差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表 3.2表 3.2.2。ACN 染毒后，在 OFT 0-10 min 運動過程中，高 ACN 組大鼠大運動總時間大運動總距離、總距離與對照組比較均增加（P<0.05）。與高 ACN 組比較，NA組大鼠在 OFT 0-10 min運動過程中，大運動總時間、大運動總距離、總距離減少。在 OFT 11-20 min運動過程中，與對照組比較，中、高 ACN 組大鼠大動總時間均增加；高 ACN 組總距離增加。與高 ACN 組比較，NAC 組大鼠在 O11-20 min 運動過程中，大運動總時間、總距離均減少（P<0.05）。見表 3.2.3表 3.2.4。大鼠運動軌跡如圖 3.2.1 所示，對照組、低 ACN 組在周邊和中央區(qū)交替活動，表現(xiàn)出正常的趨避性，同時又嘗試探索中央區(qū)域，中、高 ACN 組鼠與對照組比較多在周邊活動，在中央區(qū)域活動較少。與高 ACN 組比較，NA大鼠在中央區(qū)域活動較多。

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本文編號：2736254