【摘要】：隨著發(fā)病率逐年增加,癌癥已成為備受關(guān)注的重大疾病。包括紫杉醇、多西他賽及卡巴他賽等在內(nèi)的紫衫烷類藥物是一類臨床常用的抗腫瘤藥物。然而,紫衫烷類藥物的水溶性通常較差,常規(guī)上市注射制劑常添加聚氧乙烯蓖麻油和吐溫-80等增溶劑。這些增溶劑的加入往往引起超過敏反應(yīng)及外周神經(jīng)病變等人體不適反應(yīng)。因此,研究新一代給藥劑型以改善紫衫烷類藥物的溶解性和體內(nèi)分布是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。2007年,由Samyang Pharma公司和Dabur Pharma公司分別研制的Genexol(?)-PM膠束和Nanoxel膠束先后在韓國和印度成功上市。Genexol(?)-PM膠束和Nanoxel膠束在提高紫杉醇溶解性的同時(shí),還表現(xiàn)出較高的用藥安全性和腫瘤靶向能力,激發(fā)了聚合物膠束體系的研究熱潮。聚合物膠束作為紫衫烷類藥物遞送載體具有如下優(yōu)勢：一方面,膠束可將紫杉醇包封進(jìn)入疏水性內(nèi)核中,可改善藥物的溶解性；另一方面,設(shè)計(jì)制備納米級(jí)的膠束制劑可經(jīng)EPR效應(yīng)介導(dǎo)的腫瘤靶向作用,實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤組織的蓄積,從而改善藥物的療效、降低體系對(duì)正常組織的毒副作用。然而,聚合物膠束是一種濃度依賴性較大的載藥體系,稀釋等因素會(huì)對(duì)其穩(wěn)定性產(chǎn)生較大的影響。因此,在制備聚合物膠束時(shí),應(yīng)充分關(guān)注其穩(wěn)定性。藥物-聚合物結(jié)合物膠束是一類特殊的膠束給藥體系。與物理包封型聚合物膠束相比,在結(jié)合物膠束中,藥物將通過化學(xué)共價(jià)鍵實(shí)現(xiàn)與聚合物材料連接,而化學(xué)連接鍵將在體系藥物控釋方面發(fā)揮著重要作用：在轉(zhuǎn)運(yùn)過程中,共價(jià)鍵將藥物牢固地連接在聚合物材料上,避免藥物突釋以增強(qiáng)體系的穩(wěn)定性；當(dāng)結(jié)合物到達(dá)腫瘤組織處,可通過連接鍵斷裂來釋放藥物,發(fā)揮體系抗腫瘤療效。目前,具有較強(qiáng)穩(wěn)定性的紫杉醇結(jié)合物制劑OpaxioTM已被FDA批準(zhǔn)用于治療多型性神經(jīng)膠母瘤。設(shè)計(jì)結(jié)合物膠束中連接鍵在腫瘤組織處的特異性斷裂將對(duì)改善體系療效產(chǎn)生至關(guān)重要的影響。相比于正常生理組織,腫瘤組織處具有較低的pH環(huán)境,可為體系中藥物的特異性釋放提供研究思路。在該方面,可利用pH敏感的腙鍵作為結(jié)合物中的連接鍵,以控制藥物在腫瘤組織的釋放。2013年,具有pH敏感性釋藥能力的新一代表柔比星結(jié)合物膠束制劑NC-6300已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段,充分證實(shí)了pH敏感型結(jié)合物膠束在抗腫瘤藥物遞送方面極具研究應(yīng)用潛力�；诮Y(jié)合物膠束在紫衫烷類藥物遞送方面的應(yīng)用潛力及新型pH敏感型結(jié)合物膠束在控釋藥物方面的突出優(yōu)勢,本課題擬以較紫杉醇活性更高的多西他賽(DTX)為模型藥物,以生物相容性良好的Pluronic P123為聚合物載體設(shè)計(jì)并制備DTX-Pluronic P123結(jié)合物膠束,使其具有穩(wěn)定的藥物遞送能力。在釋藥方面,考慮到腫瘤組織及細(xì)胞內(nèi)較低的pH環(huán)境,可采用腙鍵制備pH敏感型的DTX-Pluronic P123結(jié)合物膠束以控制藥物釋放。此外,為考察連接鍵中腙鍵個(gè)數(shù)對(duì)藥物釋放的影響,課題還分別制備了以單、雙腙鍵為連接鍵的結(jié)合物,并對(duì)其形成的結(jié)合物膠束釋藥性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)。課題具體制備方案為：首先,設(shè)計(jì)單腙鍵為連接鍵以制備結(jié)合物P123-S-DTX;設(shè)計(jì)雙腙鍵為連接鍵以制備結(jié)合物P123-L-DTX。其次,經(jīng)透析法使結(jié)合物自組裝以制備成結(jié)合物膠束：P123-S-DTX可制備成結(jié)合物膠束P123-S-DTX-CM; P123-L-DTX可制備成結(jié)合物膠束P123-L-DTX-CM.課題主要包括兩部分研究內(nèi)容：(1) P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的制備及理化性質(zhì)的研究；(2) P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的體內(nèi)與體外評(píng)價(jià)。主要試驗(yàn)方法與結(jié)果如下：1. P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的制備及理化性質(zhì)的研究以化學(xué)手段合成并最終制備了兩種結(jié)合物膠束并對(duì)其的粒徑形態(tài)等理化性質(zhì)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。首先,以乙酰丙酸(LEV)和己二酸二酰肼(ADH)對(duì)DTX進(jìn)行修飾合成了其腙鍵衍生物DTX-L-A。此外,對(duì)載體材料Pluronic P123進(jìn)行相應(yīng)修飾制備其衍生物：以丁二酸酐進(jìn)行修飾合成了具有羧基的衍生物P123-S；以LEV進(jìn)行修飾合成了具有羰基的衍生物P123-L。DTX-L-A與P123-S反應(yīng)可制備單腙鍵為連接鍵的結(jié)合物P123-S-DTX; DTX-L-A與P123-L反應(yīng)可制備雙腙鍵為連接鍵的結(jié)合物P123-L-DTX。對(duì)P123-S-DTX及P123-L-DTX的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征后,以透析法可將結(jié)合物制備結(jié)合物膠束：P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM。經(jīng)理化性質(zhì)表征,所制備的P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM的外觀圓整、形態(tài)良好；粒徑分別為131.6±19.2 nm和109.1±9.8 nm；載藥量分別為11.20±0.32%和10.37±0.36%。2. P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的體外與體內(nèi)評(píng)價(jià)對(duì)P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的體內(nèi)外性質(zhì)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。經(jīng)芘熒光探針法測定,P123-S-DTX和P123-L-DTX具有較低的臨界聚集濃度(CAC)值：其CAC值分別為28.357 μg/mL和28.377 μg/mL,小于P123材料的CAC；后續(xù)的抗稀釋和血漿釋放試驗(yàn)也表明,兩種P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM均具有較強(qiáng)的抗稀釋穩(wěn)定性和血漿穩(wěn)定性。以透析法考察了P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM在不同pH(7.4、6.5、5.0)條件下的藥物累積釋放量。結(jié)果顯示,P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM在pH 5.0條件下累積釋放量均超過80%,高于其在pH 7.4條件下的釋放量(分別為13.39±2.18%和38.10士2.06%)。此外,在pH 6.5條件下,P123-L-DTX-CM的累積釋藥量為75.08±3.16%,展現(xiàn)出高于P123-S-DTX-CM(21.68±0.73%)的藥物釋放能力,表明以雙腙鍵為連接鍵可提高結(jié)合物膠束的pH響應(yīng)值。選擇B16瘤細(xì)胞為模型對(duì)P123-S-DTX-CM及P123-L-DTX-CM的體外細(xì)胞毒性進(jìn)行了考察。結(jié)果表明,P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM均展現(xiàn)出劑量依賴性細(xì)胞毒性,其IC5o值分別為21.74±3.27 μg/mL和12.65±3.18 μg/mL。通過荷瘤昆明小鼠對(duì)P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM的體內(nèi)抗腫瘤活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在給藥治療3周后,P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM組小鼠的腫瘤體積均得到控制(其瘤體積分別為898.31±128.67 mm3和1099.31±86.03mm3),小于DTX注射液組(瘤體積為2063.45±333.26mm3)。通過考察荷瘤小鼠相對(duì)體重變化對(duì)P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM的用藥安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。在治療過程中,DTX注射液組小鼠的平均相對(duì)體重出現(xiàn)明顯的下降趨勢,而兩個(gè)結(jié)合物膠束組小鼠的平均相對(duì)體重變化較小,與生理鹽水組小鼠相對(duì)體重變化趨勢相似。小鼠體內(nèi)試驗(yàn)表明,P123-S-DTX-CM和P123-L-DTX-CM具有較強(qiáng)的抑瘤效果和良好的用藥安全性。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【圖文】：

（ｐｏｌｙ她ｙｌｅｎｅ邋ｇｌｙｃｏｌ，邋ＰＥ巧等親水性聚合物材料修飾納米藥物體系表面可減少調(diào)逡逑理素的結(jié)合，從而規(guī)避被ＲＥＳ吞喔清除逡逑聚合物膠束是一類具有親水性外殼結(jié)構(gòu)的納米藥物（見圖１）。用于制備聚合逡逑物膠束的聚合物材料通常具有兩親性嵌段，可在水性環(huán)境中自組裝成粒徑較逡逑小、具有核殼結(jié)構(gòu)的載藥體系疏水性嵌段在疏水作用力的作用下聚集形成逡逑膠束內(nèi)核，可包封疏水性藥物；親水性嵌段則包裹在內(nèi)核外構(gòu)成膠束親水性外逡逑層，增加膠束親水性ｐｓｉ。此外，基于親水外殼的保護(hù)作用，包封在膠束內(nèi)部的逡逑抗腫瘤藥物將更容易逃避體內(nèi)生物酶的降解，其在肝、脾、骨髓等部位的ＲＥＳ逡逑和巨嗟細(xì)胞的攝取量也將顯著降低ＰＷ，有助于載藥膠束利用ＥＰＲ效應(yīng)實(shí)現(xiàn)在腫逡逑瘤組織的鞭向蓄積。另一方面，所負(fù)載抗癌藥物的細(xì)胞毒性也將被膠束所屏逡逑蔽，其體內(nèi)給藥的安全性也會(huì)提高逡逑Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ邋Ｃｏｒｏｎａ逡逑／邋Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ邋Ｃｏｒｅ逡逑

雙腺鍵為連接鍵的結(jié)合物Ｐ１２３＾－ＤＴＸ是通過ＤＴＸ－ＬＡ與}基修飾的逡逑Ｐ１２３邋（Ｐ１２３－Ｌ）之間的反應(yīng)合成的。Ｐ１２３＊Ｌ－ＤＴＸ結(jié)合物凍干產(chǎn)物的ＩＨ－ＮＭ民譜逡逑圖如圖１－１４所示。如圖１－１３中Ｐ１Ｚ３－Ｓ－ＤＴＸ結(jié)合物圖譜所示，Ｐ１２３－Ｌ－ＤＴＸ結(jié)逡逑合物圖譜中也展示出明顯的７．０￣８．０邋ｐｐｍ處ＤＴＸ芳香氨組峰和３．３？３．８邋ｐｐｍ、逡逑１．０邋ｐｐｍ處Ｐ１２３組峰，充分證明ＤＴＸ＾－Ａ已成功連接到載體材料Ｐ１２３－Ｌ上制逡逑備成邋Ｐ１２３－Ｌ－ＤＴＸ。逡逑３４逡逑

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本文編號(hào)：2733570