【摘要】：目的(1)基于甘肅地區(qū)健康人群血清膽汁酸(Bile acids,BAs)的測(cè)定及含量分析,建立健康人群血清BAs參考值范圍,考察2型糖尿病(T2DM)患者血清中BAs的變化情況。(2)基于T2DM患者血清及BAs孵育的Hepa RG細(xì)胞,分別考察T2DM患者血清及BAs對(duì)該細(xì)胞系相關(guān)核受體、轉(zhuǎn)運(yùn)體與代謝酶表達(dá)的影響,初探T2DM患者血清BAs的變化機(jī)制。方法(1)收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院健康體檢中心健康志愿者與單純T2DM患者空腹靜脈血,檢測(cè)其生化指標(biāo),采用超高效液質(zhì)聯(lián)用儀(Ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometer,UPLC-MS/MS)測(cè)定其血清BAs的含量并對(duì)其組成進(jìn)行初步分析。(2)采用Western blot技術(shù)考察T2DM患者血清及BAs孵育Hepa RG細(xì)胞后對(duì)其膽酸鹽外排泵(Bile acid efflux pump,BSEP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白2(Multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)、�；悄懰徕c共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Sodium taurocholate cotransporter,NTCP)、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(Organic anion transporter polypeptide 1B1,OATP1B1)、法尼醇X受體(Farnesyl alcohol X receptor,FXR)、組成型雄甾烷受體(Constitutive androstane receptor,CAR)、孕甾烷X受體(Progesterone X receptor,PXR)、細(xì)胞色素P4503A4(Cytochrome P4503A4,CYP3A4)表達(dá)的影響。結(jié)果(1)健康人群血清BAs絕對(duì)水平無(wú)顯著的年齡與性別差異。相較于健康人群血清BAs水平,T2DM患者血清中總膽汁酸(Total bile acids,TBAs)、鵝去氧膽酸(Chenodeoxycholic acid,CDCA)、去氧膽酸(Deoxycholic acid,DCA)、硫酸化甘氨熊去氧膽酸(Sulfated glycine glycoursodeoxycholic acid,S-GUDCA)、�；蛆Z去氧膽酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)、�；悄懰�(Taurocholicacid,TCA)含量顯著性增加(P0.05);而甘氨石膽酸(Glycolithocholic acid,GLCA)、硫酸化石膽酸(Sulfated lithocholic acid,S-LCA)、硫酸化甘氨鵝去氧膽酸(Sulfated glycine chenodeoxycholic acid,S-GCDCA)含量顯著性降低(P0.01)。(2)相比于健康人群,T2DM患者血清孵育Hepa RG細(xì)胞后,其核受體FXR、CAR、PXR的表達(dá)顯著性降低(P0.01),外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2、BSEP及攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1顯著性增加(P0.01),攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體NTCP呈下降趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異(P0.05)。在健康人群與T2DM患者血清中加入生理濃度25×、50×、100×的CDCA/DCA孵育Hepa RG細(xì)胞后,其核受體FXR、外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體MRP2、BSEP表達(dá)顯著性增加(P0.05),攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體NTCP、核受體CAR及藥物代謝酶CYP3A4的表達(dá)顯著性降低(P0.05),而核受體PXR的表達(dá)只有給予DCA時(shí)才顯著性增加(P0.01)。結(jié)論(1)通過(guò)125例健康人群血清樣本建立了甘肅地區(qū)健康人群19種血清BAs參考值范圍。相比于健康人群,T2DM患者血清TBAs、CDCA、DCA、TCDCA、TCA的含量顯著增加,同時(shí)GLCA、S-LCA、S-GCDCA的含量顯著降低。(2)T2DM患者血清孵育Hepa RG細(xì)胞后其核受體FXR、CAR表達(dá)顯著降低,攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1表達(dá)顯著增加,提示T2DM患者血清中TBAs、CDCA、DCA、TCDCA、TCA含量的顯著增加可能與其核受體FXR被抑制有關(guān),血清中S-LCA、S-GCDCA含量的顯著降低可能與其核受體CAR的表達(dá)下調(diào)及攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。(3)T2DM患者血清及健康人群血清中加入生理濃度25×、50×、100×的CDCA/DCA后所孵育的Hepa RG細(xì)胞,其核受體FXR被激活后上調(diào)外排型轉(zhuǎn)運(yùn)體BSEP、MRP2的表達(dá),下調(diào)攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體NTCP、核受體CAR及代謝酶CYP3A4的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 糖尿病患者血清中膽汁酸的變化及其血清對(duì) HepaRG 細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（CYP27A1）為此過(guò)程的主要限速酶[21, 22]。通過(guò)以上兩種途徑合成的 BAs 在它們分泌到膽小管腔之前，初級(jí) BAs 末端側(cè)鏈的羧酸基團(tuán)會(huì)和牛磺酸或甘氨酸結(jié)合，產(chǎn)生�；撬峄蚋拾彼峤Y(jié)合的 BAs。該反應(yīng)由過(guò)氧化物酶體 BAs 輔酶-A：氨基酸 N-�；D(zhuǎn)移酶（Amino acidN-acyltransferase, BAAT）催化，高效率的此酶將導(dǎo)致超過(guò) 98％的從肝臟排泄的BAs 被酰胺化。在人體生理?xiàng)l件下形成的�；撬岷透拾彼峤Y(jié)合物的比例為 3:1，這主要取決于�；撬岜旧淼奶匦裕�?yàn)?BAAT 對(duì)該氨基酸具有更大的親和力[23]。BAs 的結(jié)合對(duì)于它們的溶解和分泌進(jìn)入膽汁十分必需，此過(guò)程賦予了這些分子兩親性質(zhì)，該性質(zhì)對(duì)于 BAs 在消化過(guò)程中的乳化作用也是必不可少的，并且共軛還會(huì)降低 BAs 的毒性，減少其在腸道內(nèi)的被動(dòng)重吸收。

ltidrug resistance, MDR3 / ABCB4）和 ABCG5 / ABCG8 異二聚體的這種共分泌允許在膽汁內(nèi)形成膠束，以保護(hù)膽汁系統(tǒng)免受高 BAs作用，分泌的 BAs 先儲(chǔ)存于膽囊中；BAs 還經(jīng)分布于膽管上皮細(xì)相關(guān)蛋白 3(Multidrug resistance-associated protein 3, MRP3)和定位胞的多耐藥相關(guān)蛋白 2（Multidrug resistance-associated protein 2, M排，此外，有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Organic solute transporter α/β, OST量的 BAs 外排。儲(chǔ)存于膽囊中的 BAs 在攝取膳食后響應(yīng)縮lecystokinin,CCK）的誘導(dǎo)下經(jīng)膽囊收縮排入腸腔，后經(jīng)回腸末端上上的鈉依賴(lài)性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Apical sodium-dependent bile aicd tra）主動(dòng)重吸收（≥95％），從腸道重新吸收的初級(jí)和次級(jí) BAs 與回蛋白（Ileal bile acids binding protein, I-BABP）結(jié)合，并從頂端面轉(zhuǎn)胞的基底外側(cè)膜，在異二聚體有機(jī)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 OSTa/β的作用下回肝臟，再經(jīng)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（Organic anion-transporting polyp）或�；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Na+/taurocholate contransporting poly）攝取重新進(jìn)入肝細(xì)胞[25]，如圖 1-2 所示。

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本文編號(hào)：2730560