【摘要】：妥洛特羅作為一種長效β2腎上腺素受體激動劑,近年來以貼劑的形式在臨床上被廣泛應(yīng)用,主要用于緩解支氣管哮喘、急性支氣管炎、慢性支氣管炎、肺氣腫和慢性阻塞性肺病(COPD)所致的呼吸困難等癥狀,具有很好的臨床有效性和安全性。開發(fā)兒童用妥洛特羅貼劑受到臨床醫(yī)生的關(guān)注,為了配合制劑學科研發(fā)兒童用妥洛特羅貼劑,篩選最佳制劑處方,本論文建立了生物樣本中妥洛特羅高效、靈敏、準確的分析方法,為制劑開發(fā)和貼劑的透皮吸收特點考察提供分析手段。首先建立測定新西蘭兔血漿中妥洛特羅含量的超高效液相色譜聯(lián)用三重四極桿質(zhì)譜(UHPLC-MS/MS)的分析方法,并進行了全面驗證。方法驗證結(jié)果表明,妥洛特羅在新西蘭兔血漿中最低定量限為0.01ng/mL,線性范圍在0.01-6ng/mL內(nèi),相關(guān)系數(shù)r0.999,線性良好。妥洛特羅和內(nèi)標的Carryover分別為6.1%和0.31%。4個不同濃度水平質(zhì)控樣本(LOQ、LQC、MQC和HQC)的日內(nèi)和日間的準確度分別在95.0-111%和94.6-110%之間,精密度RSD值均小于6.9%。提取回收率范圍為80.9-85.3%,基質(zhì)效應(yīng)范圍為92.2-109%。穩(wěn)定性考察了未處理的樣品在室溫條件(20℃)下放置6h、經(jīng)過3次凍融、在冰箱儲存條件(-80℃)放置2個月以及處理過的樣品在自動進樣器溫度(4℃)下放置24h的穩(wěn)定性,準確度均在94.1-113%之間。方法驗證結(jié)果表明,本研究所建立的分析方法符合中國藥典《9012生物樣品定量分析方法驗證指導原則》的要求,能夠滿足新西蘭兔血漿中妥洛特羅含量測定結(jié)果準確可靠的要求。其次,采用所建立的方法測定妥洛特羅貼劑給藥后新西蘭兔血漿樣本中妥洛特羅的濃度,計算獲得相關(guān)藥代參數(shù),并進行初步的透皮吸收特點考察。動物實驗共設(shè)置2個給藥組,包括參比貼劑阿米迪組和受試貼劑妥洛特羅組。實驗結(jié)果表明,兩批受試貼劑與參比貼劑相比:AUC(0-t)和AU(0-∞)一致,幾何均值比的90%置信區(qū)間均在85.9-113.9%之間;Cmax不一致,90%置信區(qū)間的數(shù)值比值范圍在21.0-140.0%之間,超出85.00-125.00%的等效區(qū)間。表明受試貼劑與參比貼劑相比透皮吸收特點存在差異,制劑處方需進一步優(yōu)化。雷公藤多苷片由雷公藤(Triptetygium wifordii Hook.f.)的提取物加工而成,臨床上被廣泛用于腎病綜合征、類風濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的治療,效果顯著。但其引起的肝臟和腎臟毒性不容忽視。雷公藤多苷片的有效性和毒性作用物質(zhì)基礎(chǔ)和機制研究成為近年來的研究熱點。本論文開展了雷公藤多苷片在小鼠體內(nèi)的代謝研究。采用BALB/c小鼠作為研究對象,分為三組,高劑量(LD50劑量,900mg/kg)單次給藥組、低劑量(治療劑量,15mg/kg)單次給藥組和低劑量多次(7天)給藥組,給藥后取小鼠的肝臟、腎臟和血漿樣本,采用實驗室已建立的高效液相色譜四極桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜分析方法(HPLC-QTOF-MS),分析生物樣本中雷公藤多苷片的原型成分和代謝物。首先采集對照品和樣品的一級和二級高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù),進一步通過保留時間、一級和二級高分辨質(zhì)量數(shù)、質(zhì)譜碎片裂解規(guī)律,以及結(jié)合文獻報道數(shù)據(jù)對化合物進行結(jié)構(gòu)推測和鑒定。在小鼠體內(nèi)共檢測到雷公藤多苷片的48種原型成分和99種代謝物。在高劑量單次給藥組檢測到48種原型成分和99種代謝物;低劑量單次給藥組檢測到15種原型成分和7種代謝物;低劑量多次給藥組中檢測到32種原型成分和16種代謝物。通過Discovery StudioTM軟件對小鼠體內(nèi)暴露成分和代謝物的肝毒性進行預(yù)測。結(jié)果在高劑量給藥組共有21種原型成分和35種代謝物經(jīng)預(yù)測具有潛在肝毒性;低劑量單次給藥組有6種原型成分和3種代謝物具有潛在肝毒性;低劑量多次給藥組中有13種原型成分和5種代謝物具有潛在肝毒性。三個給藥組共有的毒性成分有6種。通過研究雷公藤多苷片體內(nèi)暴露成分的潛在肝毒性,為監(jiān)測毒性成分和代謝物,發(fā)現(xiàn)早期毒性趨勢提供了依據(jù)。多次給藥與單次給藥相比暴露成分出現(xiàn)蓄積趨勢,提示臨床上應(yīng)監(jiān)測給藥周期。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R965
【圖文】：

類型和質(zhì)量虧損。逡逑ＭａＳ等［１１］將ＢＳ方法成功應(yīng)用于在ＨＬＭ孵育中的４個測試藥物（氯氮平，雙逡逑氯芬酸，丙米嗪和他克林）谷胱甘肽結(jié)合物的快速檢測。如圖１所示，Ａ圖為經(jīng)徹逡逑底的背景扣除后，丙咪嗪與ＨＬＭ和５ｍＭ邋ＧＳＨ孵育的基峰圖譜顯示６個不同的ＧＳＨ逡逑綴合物色譜峰（ＩＭ１－ＩＭ６）。相反，這些代謝物在未處理的原始色譜圖中難以發(fā)現(xiàn)逡逑（Ｂ）

邐第二章新西蘭兔血漿中妥洛特羅ＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ定量分析方法建立邐逡逑圖所示，在全掃描模式下，妥洛特羅和內(nèi)標妥洛特羅－ｄ９的豐度最高的離子均為準分逡逑子離子峰［Ｍ＋Ｈｆ，分別為２２８．１和ｍ／ｚ邋２３７．１，因此，確定妥洛特羅和內(nèi)標妥洛逡逑特羅－ｄ９的母離子分別為ｍ／ｚ邋２２８．１和＾＾２３７．１。在子離子掃描模式下，由于儀器默逡逑認的ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ值為３８０Ｖ，設(shè)定化合物母離子的值，采集化合物在不同碰撞能逡逑量下的碎片禹Ｉ子，１５ｅＶ下的＋

本文編號：2724884