【摘要】：目的:建立高效液相色譜的方法同時檢測血漿中依魯替尼及代謝物PCI-45227,在大鼠體內(nèi)、外水平上,觀察斑蝥酸鈉對依魯替尼代謝的影響。方法:(1)采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm);在柱溫為35°C的條件下,以流速為1.0 mL·min~(-1)的水-乙腈-0.2%TFA體系為流動相;以卡馬西平為內(nèi)標,在堿性條件下乙酸乙酯萃取血漿;探針藥物在234 nm波長下檢測;依魯替尼及其代謝物在258 nm波長下檢測。(2)36只雄性SD大鼠隨機分為A、B、C、D四組,每組9只。A組(探針藥物對照組)按0.5 m L/kg的劑量腹腔注射生理鹽水,B組(探針藥物實驗組)按0.025 mg/kg的劑量腹腔注射斑蝥酸鈉注射液,連續(xù)給藥10天,于第11天按5 m L/kg的劑量灌胃給予探針藥物(濃度為4 mg/mL的美托洛爾和2 mg/mL的咪達唑侖混合液);C組(依魯替尼對照組)按0.5 mL/kg的劑量腹腔注射生理鹽水,D組(依魯替尼實驗組)按0.025 mg/kg的劑量腹腔注射給予斑蝥酸鈉注射液,連續(xù)10天,于第11天按10mg/kg的劑量灌胃給予依魯替尼。A組、B組在給予探針藥物后不同時間點尾靜脈取血,C組、D組在給予依魯替尼后不同時間點尾靜脈取血。用已建立的高效液相方法分別測定血漿中探針藥物,依魯替尼及其代謝物的濃度。用DAS 3.0程序計算主要藥代動力學參數(shù)。(3)建立體外肝微粒體孵育體系,分別以美托洛爾、咪達唑侖和依魯替尼作為底物,加入干預藥斑蝥酸鈉注射液孵育處理,以水-乙腈-0.2%TFA體系為流動相,以卡馬西平為內(nèi)標,分別檢測美托洛爾、咪達唑侖和依魯替尼的濃度,計算K_m,V_(max)和IC_(50)值,觀察斑蝥酸鈉對CYP2D6和CYP3A4酶的作用,以及對依魯替尼體外代謝的影響。結(jié)果:(1)血漿探針藥物、依魯替尼及PCI-45227的濃度在10~2000 ng/mL范圍內(nèi)線性關系良好。美托洛爾標準曲線:y=0.1247x+0.0040(r=0.999 4);咪達唑侖標準曲線:y=0.1122x+0.0149(r=0.999 3);依魯替尼標準曲線:y=0.0597x+0.0039(r=0.999 7),PCI-45227標準曲線:y=0.1493x+0.0028(r=0.999 5)。低中高三個濃度的日內(nèi)、日間精密度RSD15%;以上血漿樣品常溫下放置4 h、4°C放置24 h,反復凍融三次、冰凍條件下保存30天仍具有良好的穩(wěn)定性。(2)A組、B組美托洛爾的C_(max)分別為(613.55±92.37)和(998.46±120.14)ng/mL;AUC_((0-∞))分別為(4881.10±2120.79)和(7745.15±1383.88)ng·h/m L;咪達唑侖的C_(max)分別為(1111.98±86.88)和(1298.05±64.91)ng/mL;AUC_((0-∞))分別為(6624.46±1680.99)和(8970.28±3219.13)ng·h/m L。結(jié)果顯示,給予斑蝥酸鈉后,探針藥物的C_(max)和AUC_((0-∞))均明顯增加,斑蝥酸鈉可以增加探針藥物的血漿暴露。提示斑蝥酸鈉抑制依魯替尼的代謝。C組、D組依魯替尼的C_(max)分別為(1019.43±74.88)和(1333.71±65.18)ng/m L;AUC_((0-∞))分別為(10956.72±2491.09)和(13447.88±1038.44)ng·h/m L;PCI-45227的C_(max)分別為(230.59±15.36)和(167.28±38.99)ng/mL;AUC_((0-∞))分別為(3203.80±345.78)和(2443.95±680.71)ng·h/m L。結(jié)果顯示,給予斑蝥酸鈉后,依魯替尼的C_(max)和AUC_((0-∞))均明顯增加,代謝物PCI-45227的C_(max)和AUC_((0-∞))均明顯降低,斑蝥酸鈉可以增加依魯替尼的血漿暴露,減少PCI-45227的血藥濃度。提示斑蝥酸鈉抑制依魯替尼在大鼠體內(nèi)的代謝。(3)體外肝微粒體孵育探針藥物和依魯替尼濃度在10~2000 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關系。美托洛爾標準曲線:y=0.0729x+0.0306(r=0.9993),測得美托洛爾V_(max)=1.21 nmol/min/mg pro,K_m=35.74μmol·L~(-1),斑蝥酸鈉對CYP2D6的IC_(50)=1.7477μg·ml~(-1);咪達唑侖標準曲線:y=0.0825x+0.0331(r=0.999 1),V_(max)=0.62 nmol/min/mg pro,K_m=20.04μmol·L~(-1),斑蝥酸鈉對CYP3A4的IC_(50)=1.7789μg·ml~(-1);依魯替尼標準曲線:y=0.0842x+0.0212(r=0.999 1),V_(max)=2.53 nmol/min/mg pro,K_m=36.46μmol·L~(-1),斑蝥酸鈉抑制依魯替尼的IC_(50)=1.90157μg·ml~(-1)。結(jié)論:(1)本研究建立的檢測大鼠血漿探針藥物以及檢測依魯替尼和PCI-45227的HPLC分離完全,專屬性高,檢測時間快,適合藥代動力學和藥物相互作用的研究。(2)斑蝥酸鈉在體內(nèi)可以抑制探針藥物和依魯替尼的代謝,增加美托洛爾、咪達唑侖及依魯替尼的血漿暴露。(3)建立的體外微粒體孵育體系,準確可靠、簡便快速,適用于大鼠肝微粒體CYP2D6和CYP3A4酶活性的研究。斑蝥酸鈉抑制大鼠微粒體CYP2D6和CYP3A4酶的活性。
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R965

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本文編號：2724357