【摘要】：異煙肼和利福平是世界衛(wèi)生組織推薦的臨床一線抗結(jié)核病治療藥物,具有療效高,口服方便,價格低廉等優(yōu)點。但是異煙肼和利福平單獨使用或聯(lián)合應用均具有一定的肝臟毒性,長期服用可能會造成藥源性肝損傷。目前對于異煙肼和利福平誘導產(chǎn)生肝臟毒性的研究很多,但是抗結(jié)核病藥物致肝損傷的具體機制并沒有得到完全的論述。原卟啉Ⅸ是一種內(nèi)源性的肝毒性物質(zhì),大劑量的原卟啉Ⅸ具有一定的肝毒性,可以導致膽汁栓塞型肝損傷。我們實驗證實異煙肼和利福平單獨用藥可在體內(nèi)誘導原卟啉Ⅸ的積聚,產(chǎn)生肝毒性作用,二者聯(lián)合用藥則可加劇原卟啉Ⅸ積聚,并認為原卟啉Ⅸ的積聚與孕烷X受體(pregnane X receptor,PXR)的激活有關(guān)。亞鐵螯合酶是血紅素生物合成途徑的最后一個關(guān)鍵酶,它可以催化二價鐵離子嵌入原卟啉Ⅸ環(huán)內(nèi)生成亞鐵血紅素。抑制此酶的活性,將使原卟啉Ⅸ轉(zhuǎn)化為亞鐵血紅素的能力下降,從而導致原卟啉Ⅸ在細胞中積聚。我們實驗證實異煙肼可在體內(nèi)外層面上對亞鐵螯合酶產(chǎn)生抑制作用。推測異煙肼的原卟啉Ⅸ積聚造成肝損傷的機制與亞鐵螯合酶的抑制有關(guān)。為異煙肼和利福平的肝毒性作用機制提出了一個新的思路。本課題主要分為兩個部分:第一部分孕烷X受體介導的異煙肼和利福平肝毒性的研究通過建立異煙肼,利福平處理C57BL/6野生型小鼠的動物模型,證明了異煙肼和利福平單獨用藥可在體內(nèi)產(chǎn)生肝毒性作用,在肝臟中誘導原卟啉Ⅸ的積聚,二者聯(lián)合用藥則可加劇原卟啉Ⅸ積聚,使肝損傷情況進一步加重。從體內(nèi)體外兩個方面探討原卟啉Ⅸ積聚與激動PXR的關(guān)系,體內(nèi)使用利福平大劑量腹腔注射的方法誘導小鼠PXR,體外使用HepG2細胞,異煙肼,利福平加藥處理。通過Western blot方法檢驗CYP3A4蛋白表達量,反映出PXR的表達量。結(jié)果證明原卟啉Ⅸ的積聚和PXR的激動呈相關(guān)關(guān)系。第二部分異煙肼通過對亞鐵螯合酶的抑制誘導肝損傷通過異煙肼灌胃的方式建立昆明種小鼠異煙肼誘導肝損傷的動物模型。證明異煙肼可以明顯誘導小鼠肝損傷,小鼠肝組織中原卟啉Ⅸ含量呈劑量、時間依賴型增長。通過使用高效液相色譜法檢測原卟啉鋅含量判斷亞鐵螯合酶活性,體外使用HepG2細胞,異煙肼處理后在熒光倒置顯微鏡觀察原卟啉Ⅸ熒光的方法,證明異煙肼可在體內(nèi)體外明顯抑制亞鐵螯合酶的活性。計算機結(jié)構(gòu)對接模擬顯示異煙肼與亞鐵螯合酶二聚體接口結(jié)合,進一步證明異煙肼本身對于亞鐵螯合酶起到抑制作用。異煙肼對亞鐵螯合酶活性的直接抑制,導致原卟啉Ⅸ在肝臟中的積聚可能是異煙肼造成的肝損傷原因。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R965

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本文編號：2719187