【摘要】：異煙肼和利福平是世界衛(wèi)生組織推薦的臨床一線抗結(jié)核病治療藥物,具有療效高,口服方便,價格低廉等優(yōu)點。但是異煙肼和利福平單獨使用或聯(lián)合應(yīng)用均具有一定的肝臟毒性,長期服用可能會造成藥源性肝損傷。目前對于異煙肼和利福平誘導(dǎo)產(chǎn)生肝臟毒性的研究很多,但是抗結(jié)核病藥物致肝損傷的具體機制并沒有得到完全的論述。原卟啉Ⅸ是一種內(nèi)源性的肝毒性物質(zhì),大劑量的原卟啉Ⅸ具有一定的肝毒性,可以導(dǎo)致膽汁栓塞型肝損傷。我們實驗證實異煙肼和利福平單獨用藥可在體內(nèi)誘導(dǎo)原卟啉Ⅸ的積聚,產(chǎn)生肝毒性作用,二者聯(lián)合用藥則可加劇原卟啉Ⅸ積聚,并認(rèn)為原卟啉Ⅸ的積聚與孕烷X受體(pregnane X receptor,PXR)的激活有關(guān)。亞鐵螯合酶是血紅素生物合成途徑的最后一個關(guān)鍵酶,它可以催化二價鐵離子嵌入原卟啉Ⅸ環(huán)內(nèi)生成亞鐵血紅素。抑制此酶的活性,將使原卟啉Ⅸ轉(zhuǎn)化為亞鐵血紅素的能力下降,從而導(dǎo)致原卟啉Ⅸ在細(xì)胞中積聚。我們實驗證實異煙肼可在體內(nèi)外層面上對亞鐵螯合酶產(chǎn)生抑制作用。推測異煙肼的原卟啉Ⅸ積聚造成肝損傷的機制與亞鐵螯合酶的抑制有關(guān)。為異煙肼和利福平的肝毒性作用機制提出了一個新的思路。本課題主要分為兩個部分:第一部分孕烷X受體介導(dǎo)的異煙肼和利福平肝毒性的研究通過建立異煙肼,利福平處理C57BL/6野生型小鼠的動物模型,證明了異煙肼和利福平單獨用藥可在體內(nèi)產(chǎn)生肝毒性作用,在肝臟中誘導(dǎo)原卟啉Ⅸ的積聚,二者聯(lián)合用藥則可加劇原卟啉Ⅸ積聚,使肝損傷情況進(jìn)一步加重。從體內(nèi)體外兩個方面探討原卟啉Ⅸ積聚與激動PXR的關(guān)系,體內(nèi)使用利福平大劑量腹腔注射的方法誘導(dǎo)小鼠PXR,體外使用HepG2細(xì)胞,異煙肼,利福平加藥處理。通過Western blot方法檢驗CYP3A4蛋白表達(dá)量,反映出PXR的表達(dá)量。結(jié)果證明原卟啉Ⅸ的積聚和PXR的激動呈相關(guān)關(guān)系。第二部分異煙肼通過對亞鐵螯合酶的抑制誘導(dǎo)肝損傷通過異煙肼灌胃的方式建立昆明種小鼠異煙肼誘導(dǎo)肝損傷的動物模型。證明異煙肼可以明顯誘導(dǎo)小鼠肝損傷,小鼠肝組織中原卟啉Ⅸ含量呈劑量、時間依賴型增長。通過使用高效液相色譜法檢測原卟啉鋅含量判斷亞鐵螯合酶活性,體外使用HepG2細(xì)胞,異煙肼處理后在熒光倒置顯微鏡觀察原卟啉Ⅸ熒光的方法,證明異煙肼可在體內(nèi)體外明顯抑制亞鐵螯合酶的活性。計算機結(jié)構(gòu)對接模擬顯示異煙肼與亞鐵螯合酶二聚體接口結(jié)合,進(jìn)一步證明異煙肼本身對于亞鐵螯合酶起到抑制作用。異煙肼對亞鐵螯合酶活性的直接抑制,導(dǎo)致原卟啉Ⅸ在肝臟中的積聚可能是異煙肼造成的肝損傷原因。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965

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本文編號：2719187